植物内生真菌是指在植物部分或整个生命周期中,存在于植物健康组织内部的真菌,一般不会造成宿主植物明显的感染伤害。植物内生真菌与寄主植物之间长期协同进化,能够产生许多与寄主植物相同或相似的结构新颖且具有药用价值的次级代谢产物。动物来源的真菌作为天然产物研究中的一类新型真菌资源相比于其他类型真菌研究较少,但因其特殊的生存环境,具有丰富的生物多样性,并且能够产生特异性生物活性的新颖代谢产物,而具有非常广阔的研究前景。因此,对植物内生真菌和动物来源真菌的化学成分及生物活性研究是天然产物新药研究工作中至关重要的组成部分。为了扩大真菌筛选研究范围,发现更多特殊生境真菌产生的新颖天然产物,本文在三类植物样本及三类动物样本中共培养及纯化得到30株真菌。根据菌种鉴定结果结合化学成分分析和活性初筛,从中选取了 4株具有较大研究潜力的真菌以及1株前期有一定研究基础的地衣内生真菌作为后续研究的目标菌株。对五株不同来源的真菌Xylaria sp.、Phialocephala fortinii、Penicillium citrinum、Aliiruegeria sabulilitoris和Talaromyces sp.使用大米培养基放大发酵,乙酸乙酯提取得到粗浸膏。采用各种分离手段:硅胶柱色谱、ODS柱色谱、中低压柱色谱、凝胶柱色谱和高效液相色谱等对大米发酵粗提物进行分离,共得到85个化合物,其中新化合物23个。在化合物结构鉴定过程中充分运用核磁共振波谱、质谱、紫外光谱、红外光谱、圆二色谱、X射线单晶衍射等方法确定了所得化合物的平面结构和立体构型。并测试了部分化合物的抗肿瘤、抗炎、抗真菌等生物活性。从柘木内生真菌Xylaria sp.(No.ZW-1)的次级代谢产物中分离得到35个化合物,包括5个2,5-二苯基环戊酮烯类化合物(1a、1b、1c、2a和2b)、7个α-吡喃酮类化合物(3-9)、1个γ-吡喃酮类化合物(10)、15个环二肽类化合物(11-25)、3个异香豆素类化合物(26-28)、3个其他类型生物碱类化合物(29-31)以及1个倍半萜类化合物(32)。其中化合物1a-1c、2a、2b、3-11为新化合物,共14个。对2,5-二苯基环戊酮烯类化合物1-2进行了生物合成途径推测。运用HPLC-MS分析手段确定了新化合物6-8为真菌产生的天然产物。此外,对新化合物1a-11进行了细胞毒活性和抗炎活性测试,结果显示化合物6对PC3肿瘤细胞株显示中等强度的抑制活性(IC50值为14.75μM),化合物1c和8对NO生成具有一定程度的抑制活性(IC50值分别为49.76和69.68 μM)。对前期有一定研究基础的地衣内生真菌Phialocephala fortinii(No.4537d)进行了二次放大发酵,在新苝醌类化合物分布集中的极性组分中分离得到8个化合物,包括7个苝醌类化合物(33-39)和1个螺二萘类化合物(40)。其中化合物33-37为新化合物,共5个。Femoral intima-media thickness细胞毒活性研究显示化合物33、34、38和40选择性的对EC109肿瘤细胞株显示一定的细胞毒活性,其IC50值范围为24.5～33.3μM。从苔藓内生真菌Penicillium citrinum(No.7-3)次级代谢产物中分离得到14个化合物,包括2个异香豆素类化合物(41-42)、4个苯酚类化合物(43-46)、4个橘霉素单体类化合物(47-50)、1个橘霉素二聚体类化合物(51)、2个甾体类化合物(52-53)和1个二氢α-吡喃酮类化合物(54)。其中41为新化合物,并且该化合物在本身对白色念珠菌野生型菌株SC5314和耐药菌株YEM13不具有明显抗真菌活性的前提下可以有效增强YEM13对氟康唑(FLC)的敏感性,在41为16μg/mL时可以将FLC的MIC80值降低为8μg/mL。从蚯蚓来源真菌Aliiruegeria sabulilitoris(No.SQ6-1)更多次级代谢产物中分离得到18个化合物,包括2个结构类型新颖的聚酮类化合物(55-56)、7个苯醚类化合物(57-63)、4个其他类型聚酮类化合物(64-67)、2个萘类化合物(68-69)和3个简单芳香类化合物(70-72)。其中55-57为新化合物,并对化合物55和56进行了生物合成途径推测。从东亚钳蝎来源真菌Talaromyces sp.(No.XZ-2)次级代谢产物中分离得到10个已知化合物,包括1个苯醚类化合物(73)、1个蒽醌类化合物(74)、1个异香豆素类化合物(75)、1个环己烯酮类化合物(76)和6个其他类型芳香类化合物(77-82)。其中化合物79为首次分离到的天然产物。对所得化合物生物活性研究显示77-79能够同时增强白色念珠菌耐药菌株YEM13和YEM15对FLC的敏感性(FICI 值<0.5)。本文通过对五株不同来源真菌次级代谢产物的化学成分及生物活性进行研究,PEG300核磁分离得到大量天然产物,其中部分为新结构化合物,且不乏部分生物活性显著的化合物。以上研究成果丰富了植物内生真菌及动物来源真菌代谢产物的研究,说明二者是新颖活性天然产物的重要来源,有待于进一步深入研究及挖掘。