以CD79b为靶点抗体偶联药物结合活性的评价研究

目的:建立抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE的表面等离子共振(surface plasmon resonance, SPR)法和酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法评价其结合活性。方法:采用SPR法,使用Protein A芯片,测定抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE与其靶点CD79b蛋白之间的动力学常数包括结合常数(K_a)和解离常数(K_d)、亲和力常数(K_D)、半最大效应浓度(half maximal effective concentration, EC_(50))及相对效价;采用经典ELISA法测定抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的EC_(50)及相对效价。结果:经3次实验测定,抗CD79b单抗与CD79b的K_a为(2.61±0.14)×10~6 L·mol~(-1)·s~(-1),K_d为(1.87±0.12)×10~(-2)Trichostatin A s~(-1),K_D为(7.17±0.30)×10~(-9) mol·L~(-1),RSD均<10%;抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的K_a为(2.99±0.26)×10~6 L·molDibutyryl-cAMP分子量~(-1)·s~(-1),K_d为(1.46±0.04)×10~(-2) s~(-1),K_D为(4.88±0.31)×10~(-9) mol·L~(-1),RSD均<10%。经3次实验测定,SPR法测得抗CD79b单抗与CD79b的EC_(50)为(78.68±6.35)ng·mL~(-1),相对效价为(84.62±6.63)%,RSD均<10%;测得Cognitive remediation抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的EC_(50)为(35.93±0.75) ng·mL~(-1),相对效价为(84.74±1.76)%,RSD均<5%。经3次实验测定,ELISA法测得抗CD79b单抗与CD79b的EC_(50)为(22.66±0.41) ng·mL~(-1),相对效价为(95.70±1.74)%,RSD均<5%;测得抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的EC_(50)为(69.19±1.71) ng·mL~(-1),相对效价为(97.64±2.39)%,RSD均<5%,SPR和ELISA 2种方法结果基本一致。结论:建立了抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE的SPR法,并对靶点结合的动力学、亲和力进行评价,与ELISA方法在EC_(50)及相对效价方面进行了对比,为该类抗体偶联药物的研发提供参考。