目的 旨在建立一种有效分离、培养、扩增小鼠原代骨骼肌微血管内皮细胞（MMECs）的方法。方法 采用胶原酶消化法、差速贴壁法以及免疫磁珠法分离纯化骨骼肌微血管内皮细胞，贴壁培养进行体外扩增。利用相差显微镜观察培养细胞的形态、MTT法测定细胞的生长情况、CD31免疫荧光染色对其表型进行鉴定、流式细胞术鉴定细胞纯度。结果 实验成功获取小鼠骨骼肌微血管内皮细胞，小鼠原代骨骼肌微血管内皮细胞在培养24 h后迅速贴壁，3～6 d内迅速生长，呈梭形，单层排列，培养6～8 d可长满培养皿底，呈铺路石样排布。MTT法测得培养第2代小鼠骨骼肌微血管内皮细胞的生长曲线呈倒“S”形。流式细胞术检测经差速贴壁联合磁珠纯化的CD31~+的MMECs细胞购买Puromycin可达9PS-341试剂7.0%以上。结论 成功建立了一种简单、高效的分离小鼠骨骼肌微血管内皮细胞的方法，为开展与骨骼肌微血管内皮细胞相关研究提供了良好的实验方Chengjiang Biota法和技术手段。