八月札乙醇提取物含药血清通过糖酵解调控BEL-7404细胞增殖与凋亡的研究

目的 研究八月札乙醇提取物含药血清对 BEL-7404 细胞增殖和凋亡及糖酵解的影响,探讨其可能的作用机制。方法 制备八月札乙醇提取物低(生药 3.15 g·kg~(–1))、中(生药 6.30 g·kg~(–1))、高(生药 12.60 g·kg~(–1))剂量组及空白对照组的含药血清作用于体外培养的 BEL-7404 细胞。采用 CCK-8 法检测八月札乙醇提取物含药血清对细胞增殖的影响,采用 DAPI荧光染色法观察八月札乙醇提取物含药血清对凋亡的影响,采用 AnnexiPostmortem biochemistryn V-FITC/PI 双染色用流式细胞仪检测八月札乙醇提取物含药血清对细胞凋亡率的影响,采用葡萄糖检测试CCRG 81045细胞培养剂盒、乳酸检测试剂盒测定 BEL-74Dorsomorphin半抑制浓度04 细胞中葡萄糖摄取量、乳酸生成量,采用 Western blotting 检测八月札乙醇提取物含药血清对活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、己糖激酶 2(HK2)?丙酮酸激酶(PKM2)和乳酸脱氢酶 A(LDHA)及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt2 及 p-Akt2)蛋白表达的影响。结果 八月札乙醇提取物含药血清对 BEL-7404 细胞有明显的增殖抑制作用(P<0.05 或 P<0.01),使细胞核分散,细胞内形成凋亡小体,显著升高细胞总凋亡率(P<0.05),并伴随着葡萄糖摄取量及乳酸生成量显著降低(均 P<0.01),Western blotting 检测表明八月札乙醇提取物含药血清上调了促凋亡蛋白 cleaved caspase-3和 cleaved PARP 的表达(P<0.05),下调了糖酵解相关酶 HK2 和 PKM2 及 LDHAfr 的蛋白表达水平(P<0.05 或 P<0.01),抑制 Akt2 的磷酸化(P<0.05 或 P<0.01)。结论 八月札乙醇提取物含药血清通过抑制糖酵解从而抑制 BEL-7404 细胞增殖及促进其凋亡。