目的:本课题组前期通过蛋白多肽组学从华蟾素注射液中鉴定出120余条多肽,结合镇痛动物模型的行为学观察,筛选https://www.selleck.cn/products/forskolin.html得到具有镇痛活性的多肽CI5,但CI5的安全性分析、具体的镇痛程度以及镇痛机制未进行探究。本研究重点关注多方面验证CI5的镇痛活性及安全性并探讨其镇痛机制。方法:(1)CI5的鉴定及安全性分析:采用质谱法检测多肽CI5的实际分子量,通过高效液相色谱法对多肽CI5进行纯度鉴定。采用溶血实验、细胞毒性实验以及急性毒性实验评估多肽CI5的生物相容性。(2)CI5的镇痛活性评估:通过福尔马林致痛模型和醋酸扭体模型验证CI5的镇痛活性。(3)CI5的抗炎活性检测:采用角叉菜胶小鼠足部肿胀模型评估CI5的抗炎活性。通过HE染色对小鼠足部组织进行了组织病理学检测。利用ELISA测定了小鼠足部组织的炎症因子以及致痛因子的表达水平。(4)CI5抗炎镇痛机制探究:利用全细胞膜片钳技术检测了CI5对镇痛相关离子通道的影响。通过醋酸扭体模型结合阿片受体拮抗剂纳洛酮来验证CI5作用机制是否与阿片受体有关。通过Western Blot评估CI5对相关通路关键蛋白表达水平的影响。结果:(1)质谱结果显示CI5的实际分子量为944.10与理论分子量944.10一致,液相结果显示CI5的纯度在95%以上,可用于后续的实验研究。溶血实验、细胞毒性实验、急性毒性实验表明CI5具有较好的生物相容性。(2)在经典的镇痛模型-醋酸扭体模型中,CI5在25 mg/kg、50 mg/kg和100 mg/kg剂量下,有效延长了第一次扭体潜伏期并减少了扭体次数,扭体次数抑制率分别为26.7%、59.9%和62.42%。在经典的炎性痛模型-福尔马林致痛模型中,多肽CI5可以显著减少福尔马林引起的小鼠舔足时间,表明CI5的镇痛活性可能是通过抗炎来实现的。(3)角叉菜胶小鼠足部肿胀模型中,CI5能够缓解角叉菜胶引起小鼠足部肿胀。在组织病理学分析中,CI5减少了角叉菜胶诱导小鼠足部肿胀组织中炎性中性粒细胞的聚集和浸润。ELISA结果表明CI5可显著抑制小鼠足部组织中TNF-α、PGE2、IL-6、IL-1β的表达水平。(4)在醋酸扭体模型中,提前注射阿片受体拮抗剂纳洛酮对CI5的镇痛活性程度无影响。全细胞膜片钳结果表明CI5对Nav1.7、Cav3.1、TRPA1、TRPV1通道无抑制或激动Biology of aging效应。Western Blot结果表明CI5降低了COX-2和磷酸化ERK1/2的表达。结论:(1)多肽CI5具有良好的生物相容性。(2)多肽CI5在福尔马林致痛模型和醋酸扭体模型中分别表现出显著的镇痛活性。(3)多肽CI5在角叉菜胶引起的小鼠足部肿胀炎症模型中表现出较好的抗炎活性。多肽CI5抑制角叉菜胶引起的中性粒细胞的聚集和浸润,同时抑制小鼠足部组织中的IL-6、IL-1β、TNF-α和PGE2的蛋白表达水平。(4)多确认细节肽CI5的抗炎镇痛机制可能与CI5抑制ERK1/2—COX-2—PGE2信号通路有关,而与Nav1.7、Cav3.1、TRPA1、TRPV1通道以及阿片受体无关。