目的:急性呼吸综合征冠状病2(SARS-Co V-2)引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)已成为严重的全球公共卫生威胁,从样本中检出完整SARS-Co V-2病毒对于诊断SARS-Co V-2感染和评估环境污染程度至关重要。但是,目前分离病毒的方法具有病毒载量高、病毒分离步骤繁琐、环境条件苛刻和实验周期长等缺陷,无法实现大规模临床检测。为此,我们欲结合免疫反应和分子检测开发一种能够准确、快速地检测完整SARS-Co V-2病毒的方法,从而精确评估感染状态,大幅度降低疫情防控的经济社会成本。方法:(1)利用基因重组、细胞转染和细胞转导进行假病毒包装和验证;(2)利用Western bloting和Viral particle gel从11种靶向野生型SARS-Co V-2刺突糖蛋白的候选抗体中筛选能够与完整SARS-Co V-2病毒结合的抗体;(3)评估免疫分子法的特异性、线性范围、检测限和稳定性;(4)利用蔗糖disc infection密度梯度离心分离病毒上清并鉴定总的病毒抗原/RNA与完整病毒颗粒含量的差异;(6)不同滴度的完整SARS-Co V-2假病毒用于感染HEK-293FT-h ACE2细胞验证完整病毒滴度和感染能力的关系;(7)测定不同材料(塑料、纸片、铜片和铝片)表面SARS-Co V-2假病毒的稳定性,模拟环境中完整SARS-Co V-2病毒的检测。结果:(1)病毒转导、Western blotingS63845抑制剂和q RT-PCR结果表明成功构建了一种全新的能够模拟SARS-Co V-2完整病毒结构的假病毒;(2)成功筛选到三株能够与完整SARS-Co V-2假病毒结合的抗体,其中CQ25显示出最强的特异性和亲和力;(3)免疫分子法检测完整SARS-Co V-2/假病毒的检测限为9×10~2TU/m L(95%置信区间),对于人源血清和常见病毒/假病毒的稳定性高(组内和组间的Protein Tyrosine Kinase抑制剂变异系数均为1.0～2.0%);(4)病毒上清中总的S蛋白/RNA与完整病毒颗粒的水平具有显著性差异(P<0.05);(5)HEK-293FT-h ACE2细胞的感染水平与完整SARS-Co V-2假病毒滴度呈正相关;(6)SARS-Co V-2假病毒在塑料和纸上比在铝和铜上更稳定,在不同材料表面处理96 h后其滴度大幅降低,但仍能被检测到(铜除外)。结论:我们开发了一种精准、便捷、经济的SARS-Co V-2完整病毒检测方法,实现了从检测病毒核酸到检测病毒颗粒的跨越,能够更加准确的评估患者和高危环境(隔离室、采样室、冷链物流等)的感染风险从而确保合理用药和消毒,大幅度降低疫情防控的经济社会成本。