外周血Septin9基因甲基化检测对肺癌诊断的意义及对肺癌细胞A549生物学特性的影响

目的:探讨肺癌患者外周血Septin9基因甲基化状态与临床病理特征的关系Secondary hepatic lymphoma,及其对人肺癌A549细胞生物学行为的影响。方法:选取104例肺癌患者为研究对象,96例健康人员为对照,采用甲基化特异聚BIBW2992合酶链式反应(PCR)法检测两组外周血中Septin9基因甲基化情况,并计算Septin9基因甲基化阳性率,分析Septin9基因甲基化阳性率与肺癌临床病理特征的关系。采用5、10、20μmol·L~(-1) 5-aza-d确认细节C处理人肺癌细胞系A549,以正常培养的A549细胞作为对照组,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹(Western blot)检测细胞中Septin9 mRNA和蛋白表达,通过MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Transwell实验检测细胞的迁移与侵袭能力。结果:与对照组相比,肺癌患者外周血中Septin9基因甲基化阳性率显著升高。Septin9基因甲基化阳性与肺癌患者的TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关,Septin9基因甲基化阳性与肺癌患者的性别和年龄无关。经5-aza-dC处理后,A549细胞中Septin9 mRNA和蛋白表达水平均显著上调,且呈浓度依赖性;5-aza-dC能显著抑制A549细胞增殖,呈浓度与时间依赖性;在5-aza-dC处理后,A549细胞的凋亡率呈浓度依赖性地显著增加;同时,5-aza-dC显著抑制了A549细胞的迁移与侵袭,且均呈浓度依赖性。结论:肺癌外周血Septin9基因甲基化阳性率增加,该指标与肺癌肿瘤分期、分化程度和淋巴结转移有关,5-aza-dC处理能通过恢复A549细胞中Septin9表达来抑制肺癌细胞增殖、迁移与侵袭,并诱导细胞凋亡。