目的:Organic bioelectronics本实验利用Cas9方式对SD大鼠PLA2R1基因片段进行修饰,破坏内源性基因,构建PLA2R1基因片段敲除大鼠。观察不同年龄段的PLA2R1基因片段敲除大鼠的肾组织病理学改变,分析PLA2R1基因片段的生理功能及PLA2R1基因片段缺失对肾功能的影响,旨在为PLA2R1相关膜性肾病找到新的诊治思路。方法:利用Cas9方式构建PLA2R1基GNE-140因片段敲除大鼠,PCR鉴定和基因测序验证模型构建成功,将大鼠随机分为2月龄、4月龄、6月龄、8月龄、10月龄、12月龄野生型大鼠组(Wild type,WT)及PLA2R1基因片段敲除大鼠组(Knock-out,KO),每组各6只。定期检测各组大鼠尿蛋白的变化,检测各组大鼠血肌酐、血尿素氮、血清白蛋白及总胆固醇的指标变化,采用HE、PAS、Masson染色观察各组大鼠肾小球、肾小管及肾间质的病理特点,应用免疫荧光方法检测肾小球中足细胞特异性标记物WT-1和Nephrin的表达以及膜性肾病相关抗体Ig A、Ig G和补体C3在肾小球上的沉积情况,电镜观察各组大鼠肾脏的足突形态、宽度;肾小球基底膜的形HDAC抑制剂态、厚度和内皮细胞的形态结构。采用t检验进行统计分析。结果:尿蛋白水平在KO鼠中逐渐升高,相较于WT鼠(4.24±1.15),KO鼠(34.24±11.19)的24h尿蛋白显著增高(P<0.05),WT鼠和KO鼠的血肌酐、血尿素氮、血清白蛋白及总胆固醇未见明显差异(P>0.05)。光镜下硬化及纤维化肾小球的数量及比例在各组之间没有差异。免疫荧光显示WT-1在KO鼠肾小球中的表达减少(P<0.05),而Nephrin未见明显差异,在KO鼠中观察到抗体Ig A及补体C3沉积,未见膜性肾病相关抗体Ig G在肾小球上的沉积。电镜下足突形态,肾小球基底膜的形态厚度和内皮细胞的形态结构未见差异。结论:1.PLA2R1基因片段敲除大鼠出现了蛋白尿和轻微足细胞损伤。2.PLA2R1基因片段的缺失可能引起肾脏损伤。