确认细节为了验证miR-21a-5p与CCL1基因的靶向关系，试验利用生物信息学软件预测miR-21a-5p和CCL1基因的结合位点，设计引物合成CCL1基因3′非翻译区(UTR)野生型及突变型目的片段，并将其克隆到psiCHECK2质粒上构建CCL1野生型(CCL1-WT)和突变型(CCL1-MUT)双荧光素酶报告质粒。将构建好的CCL1-WT和CCL1-MUT分别与miR-21a-5p模拟物(miR-21a-5p mimic)和阴性对照(miR-NC)共同转染到293T细胞中，检测CCL1-WT+miR-NC组、CCL1-Whttps://www.selleck.cn/products/forskolin.htmlT+miR-21a-5p mimic组、CCmultiple bioactive constituentsL1-MUT+miR-NC组、CCL1-MUT+miR-21a-5p mimic组的荧光素酶活性。结果表明：CCL1基因是miR-21a-5p的潜在靶基因；CCL1野生型和突变型双荧光素酶报告质粒测序结果与预期结果一致；与CCL1-WT+miR-NC组相比，CCL1-WT+miR-21a-5p mimic组荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而CCL1-MUT+miR-NC组与CCL1-MUT+miR-21a-5p mimic组之间差异不显著(P>0.05)。说明CCL1基因野生型及突变型双荧光素酶报告质粒构建成功，且miR-21a-5p与CCL1基因存在靶向关系。