第一章去泛素化酶BRCC36对慢性压力负荷诱导心衰心肌细胞DNA损伤修复的影响目的:探讨去泛素化酶BRCC36对慢性压力负荷诱导心衰心肌细胞DNA损伤修复的影响。方法:1、采用Gateway基因技术构建心肌细胞特异性过表达BRCC36小鼠(α-MHC-BRCC36)作为研究对象。2、通过横主动脉缩窄术(TAC)构建慢性压力超负荷小鼠心衰模型。实验分组:野生假手术组(WT Sham,n=15)、野生TAC手术组(WTTAC,n=20)、转基因假手术组(BRCC36-Tg Sham,n=15)、转基因TAC手术组(BRCC36-Tg TAC,n=20)。3、TAC术后持续喂养8周,采用心脏超声方式检测小鼠术后心脏功能;采用WGA染色检测心肌细胞是否肥大。4、通过蛋白质免疫印迹及免疫组化检测慢性压力超负荷诱导心衰小鼠心肌细胞DNA损伤标志物γH2AX的表达,探讨BRCC36对慢性压力超负荷诱导心衰心肌细胞DNA损伤修复的影响。结果:1、超声心动图结果显示,与WT Sham组相比,WT TAC组小鼠心脏收缩功能(LVEF)显著下降(P<0.01);与WT TAC组相比,BRCC36-Tg TAC组小鼠心脏收缩功能(LVEF)显著改善(P<0.05)。2、免疫组化染色及Western blot分析显示,慢性压力超负荷可以明显诱导心肌细胞DNA损伤标志物γH2AX的表达显著上调(P<0.01),而与WT TAC组相比,在心肌细胞特异性过表达BRCC36的转基因小鼠中,慢性压力超负荷诱导的γH2AX的表达显著降低(P<SAG配制0.05)。结论:去泛素化酶BRCC36有可能通过减轻慢性压力超负荷诱导的DNA损伤,从而改善慢性压力超负荷,诱导心肌负性重构,改善心脏功能。第二章慢性心力衰竭患者血浆游离DNA的水平及其临床意义目的:通过定量检测慢性心衰患者和健康体检者血浆中游离DNA(cell-freeDNA,cfDNA)的水平,Acute care medicine本研Trichostatin A小鼠究将分析血浆cfDNA水平与慢性心衰患者病情严重程度之间的关系,用以评估cfDNA在慢性心衰患者临床诊断中具有的诊疗价值。方法:收集2021年11月至2022年1月期间在扬州大学附属医院心内科住院的慢性心衰患者血样以及同期本院体检中心收集的健康体检者血样。本研究共收集80位慢性心衰患者和80位健康体检者的血样。采用阴性磁珠分选法从血浆样本中提取cfDNA,使用全自动核算蛋白分析系统(Qsep 100)检测cfDNA片段大小及浓度。结果:1、相较于健康体检者(中位数7.6μg/ml,范围1.38-18.78μg/ml),慢性心衰患者血浆中cfDNA水平明显增加(中位数120.65 μg/ml,范围6.16-299.06μg/ml);慢性心衰患者的cfDNA浓度(48.77±70.48μg/ml)显著高于健康体检者(16.06±15.23μg/ml,P<0.01)。2、健康体检者血浆中的cfDNA片段大小主要处于48-100bp区间,其主要峰值集中在48bp、50bp、68bp处;心衰患者血浆的cfDNA呈现碎片状,呈轻度弥散,峰值集中在168bp处,部分患者在200-300bp、300-400bp处也会出现峰值。3、回归分析显示,慢性心衰患者血浆cfDNA水平与C反应蛋白(CRP)水平中度相关(R=0.6,P<0.001),而与 CK-MB 轻度相关(R=0.4,P<0.001)。结论:相较于健康体检者,慢性心衰患者血浆cfDNA水平明显增高,优势峰值在167bp处;cfDNA水平与CRP水平具有中度相关性。这些结果说明,心衰患者血浆的cfDNA水平升高可能与细胞凋亡有潜在的相关性,对临床诊断具有一定的提示作用。此外,血浆cfDNA片段大小150-200 bp的比率有可能作为慢性心衰的诊断生物标志物。