旁分泌TGF-β1促进缺氧诱导的肉鸡肺血管平滑肌细胞增殖与迁移

制备禽转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1GW4869,TGF-β1)重组蛋白(chTGF-β1)和禽特异性TGF-β1抗体,采用免疫组化法检测肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension, selleck NMRPAH)肉鸡和正常肉鸡肺血管中TGF-β1的表达。分离培养肉鸡肺动脉平滑肌细胞(pulmonaReclaimed waterry arterial smooth muscle cells, PASMCs)和内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs),构建低氧细胞模型,采用Western blot检测TGF-β1表达;将常氧(21%O_2)和缺氧(5%O_2)培养的PASMCs用chTGF-β1(20μg/L)处理24 h,采用CCK-8试验和细胞划痕试验分别检测细胞增殖和迁移。将肺动脉节段置于常氧和缺氧条件下培养48 h,采用免疫组化法检测肺动脉中膜Ⅰ型TGF-β受体(TGFβR-1)的表达。结果显示,TGF-β1在正常肉鸡肺小动脉中膜中仅有微弱表达,在PAH肉鸡肺小动脉中膜中表达增强;chTGF-β1可促进低氧诱导的PASMC增殖及迁移;低氧对PASMCs中TGF-β1表达无显著性影响,但可显著促进EPCs表达TGF-β1;在低氧条件下,离体培养的肺动脉中膜Ⅰ型TGF-β受体(TGFβR-1)表达升高。结果表明,在PAH发病过程中,TGF-β1可能通过旁分泌方式作用于PASMCs,促进肺血管中膜肥厚。