板栗(Castanea mollissima Blume)为壳斗科栗属植物,板栗苞为板栗最外包被的毛刺,其提取物具有抗氧化、降血糖、抗肿瘤、抗炎、抗菌等生理活性功能,在制药工业有很高的应用价值。目前对板栗苞生物活性研究主要集中在抗氧化和抗炎活性方面,对其抑菌活性方面的研究相对较少,而对其抑菌机制的研究更是鲜见报道。本论文以痢疾杆菌(Shigella dysenteriae)为供试菌,以抑菌率为响应值,对板栗苞抑菌成分的提取进行工艺优化,对板栗苞提取物的抗菌活性及抑菌机理进行系统地的阐述,以期为板栗苞治疗细菌性腹泻及产业化开发利用提供理论依据。主要研究结果如下:1.采用单因素实验结合响应面法优化板栗苞抑菌成分的提取工艺。结果:乙醇浓度45%,料液比1:20(g:m L),提取温度50℃,在此最佳条件下提取120 min,板栗苞提取物抑菌率为61.27±2.6%,与预测值相吻合。2.通过抑菌圈实验、最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)的实验评价其抗菌活性。结果表明乙酸乙酯层(CEY)对痢疾杆菌有显著抑制作用,MIC为0.4 mg/m L,MBC为1.6 mg/m L。测定板栗苞样品的总多酚及总黄酮含量,结果表明多酚、黄酮含量与抑菌活性呈正相关。运用HPLC-MS鉴定CEY的成分,鉴定出6种主要多酚类化合物的成分及含量,分别为鞣花单宁ellagic acid(15.51%)、原花青素procyanidin(0.13%)、杨梅黄酮myricetin(0.05%)、芦丁rutin(0.01%)、槲皮素quercetin(0.03%)、山奈酚kaempferol(0.22%)。采用生长曲线法测定CEY对痢疾杆菌的抑制作用,结果表明0.4 mg/m L CEY对痢Medicament manipulation疾杆抑菌率可达90%以上,在扫描电镜(SEMTaurine说明书)下CEY处理的细菌形态出现皱缩及破损,Berzosertib细胞培养CLSM下活菌数量明显减少,死亡细菌逐渐增加,流式细胞仪测定的结果也进一步印证CEY可抑制痢疾杆菌生长。3.在生理水平研究CEY对痢疾杆菌的抑菌机理。结果表明,CEY通过靶向作用痢疾杆菌细胞壁及膜,使细胞外膜及内膜都有一定程度破坏,DIBAC4(3)荧光染色实验证明痢疾杆菌细胞膜发生去极化,碱性磷酸酶(AKP)的泄漏、K+和内部大分子物质的泄露、蛋白质的释放、ATP的泄露和4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)染色进一步证实了CEY…