第一部分:临床研究 基于单病例随机对照方法观察槐杞黄颗粒对IgA肾病患者蛋白尿及肾脏纤维化相关指标的影响目的:观察槐杞黄颗粒治疗IgA肾病的临床疗效,评价其在治疗过程中的安全性,并观察其对患者肾脏纤维化相关指标的影响。方法:采用单病例随机对照设计,研究共分3轮,每轮分为治疗期与对照期,每期4周,各期之间设1周为洗脱期,试验总计进行29周,每一轮的治疗顺序由SAS 9.4软件随机产生。治疗期给予槐杞黄颗粒+替米沙坦治疗,对照期给予替米沙坦治疗,洗脱期为符合伦理要求予替米沙坦治疗。记录及检测患者入组时和每个干预周期后的24小时尿蛋白定量、中医症状评分、血常规、肝肾功能、肾脏纤维化相关指标及心电图。结果:①中医症状评分的比较:与对照期相比,患者1、2、3、4、8、9、10治疗期的中医症状评分明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。全部合并后的治疗期中医症状评分也明显低于对照期,差异具有统计学意义(P<0.05)。②24小时尿蛋白定量比较:与对照期相比,患者1、3、4、5、9、10治疗期的24小时尿蛋白定量均有不同程度的下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。全部合并后的治疗期24小时尿蛋白定量也明显低于对照期,差异具有统计学意义(P<0.05)。③对肾脏纤维化相关指标的影响:合并全部3轮治疗期与对照期的肾脏纤维化相关指标,治疗期与对照期相比,肾脏纤维化相关指标LN、Col Ⅳ的表达均下降,且差异均有统计学意义(P<0.05)。④Scr、BUN、UA、ALB的比较:合并全部3轮治疗期与对照期的指标,治疗期与对照期相比,患者Scr、BUN、UA、ALB差异无统计学意义(P>0.05)。⑤安全性评价:全部患者治疗deep-sea biology期与对照期的HGB、ALT、AST及心电图均未显示明显异常。结论:槐杞黄颗粒可以显著降低IgA肾病患者蛋白尿,改善中医证候,减少LN、Col Ⅳ的产生,从而可能起到延缓肾脏纤维化的作用,且试验过程未出现不良反应。第二部分:实验研究 基于Notch信号通路探讨槐杞黄颗粒改善IgA肾病大鼠肾脏纤维化的机制目的:探讨槐杞黄颗粒调控Notch信号通路对IgA肾病肾脏纤维化的影响。方法:采用牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖方法建立IgA肾病大鼠模型,于实验第13周进行造模鉴定。造模成功后,按随机数字表法将造模组大鼠随机分为模型组、替米沙坦组、槐杞黄组,加上空白组,每组各10只。每组给相应药物干预8周,实验共计21周。每3周检测大鼠24小时尿蛋白定量。实验结束时取腹主动脉血液并摘取大鼠肾脏,检测大鼠血生化水平,采用ELISA法检测血清肾脏纤维化指标。光电镜下观察各组大鼠肾脏病理变化,免疫组化法检测肾组织纤维化指标,Western-Blot法检测Notch通路相关蛋白的表达情况。结果:①24小时尿蛋白定量:实验第9周开始,与对照组相比,造模组的24小时尿蛋白定量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。药物干预后,21周时,与模型组比较,替米沙坦组、槐杞黄组的24小时尿蛋白定量减少,差异均具有统计学意义(P<0.05);与替米沙坦组比较,槐杞黄组的24小时尿蛋白定量未显示出统计学差异(P>0.05)。②血生化指标:各组ALB、ALT、AST进行比较,均无统计学差异(P>0.05)。各组Scr、BUN与替米沙坦组比较,均具有统计学差异(P<0.05)。③光镜下观察肾脏结构:空白组大鼠肾小球结构完整,血管腔薄而清晰,充盈良好,球囊腔未见扩张或萎缩,未见系膜细胞增生与系膜基质沉积;肾小管管腔排列规整,小管上皮细胞正常,未见变性及坏死,间质无纤维组织增生。模型组大鼠肾小球呈现代偿性扩张或萎缩,多数肾小球毛细血管袢狭窄,可见系膜细胞增生,伴系膜基质沉积;肾小管排列紊乱,小管代偿性扩张或萎缩,小管上皮细胞可见空泡样变性,间质充血、水肿,有纤维组织增selleckchem GW-572016生。替米沙坦组和槐杞黄组的肾小球及肾小管病变均减轻,可见肾小球轻度代偿性扩张或萎缩,少量系膜细胞增生与系膜基质沉积,肾小管排列较为整齐,少许小管上皮细胞变性,间质轻度充血水肿。④电镜下观察肾脏结构:空白组系膜区未见明显异常,足突形态正常,排列整齐,基底膜厚薄一致;模型组系膜区可见大量电子致密物沉积,足突大部分融合,排列杂乱,基底膜厚薄不一;替米沙坦组和槐杞黄组病变均减轻,系膜区可见少量电子致密物沉积,足突少部分融合,基底膜厚薄较为一致。⑤ELISA法检测大鼠血清肾脏纤维化指标:模型组和槐杞黄组大鼠肾脏血清LN、Col Ⅳ的表达水平与空白组相比明显增高(P<0.05);替米沙坦组和槐杞黄组血清LN、Col Ⅳ的表达水平与模型组相比,均有所下降,具有统计学差异(P<0.05);槐杞黄组的血清LN、Col Ⅳ的表达水平与替米沙坦组相比,无统计学差异(P>0.05)。⑥免疫组化法检测肾组织纤维化指标:模型组、替米沙坦组和槐杞黄组大鼠肾组织LN、Col Ⅳ的表达水平与空白组相比明显增高(P<0.05);替米沙坦组和槐杞黄组肾组织LN、Col Ⅳ的表达水平与模型组相比,均有所下降,具有统计学差异(P<0.05);槐杞黄组的肾组织LN、Col Ⅳ的表达水平与替米沙坦组相比,无统计学差异(P>0.05)。⑦Western-Blot法检测大鼠肾脏组织Notch信号通路相关蛋白的表达:与空白组相比,模型组、替米沙坦组和槐杞黄组的Notch1、Jagged1和Hes1表达均上升(P<0.05);与模型组比较,替米沙坦组和槐杞黄组的表达Bucladesine抑制剂均下降,差异具有统计学意义(P<0.05);与替米沙坦组相比,槐杞黄组的Notch1、Jagged1和Hes1表达下降幅度较低,有统计学差异(P<0.05)。结论:槐杞黄颗粒下调Nocth1、Jagged1和Hes1蛋白的表达,可能通过抑制Notch信号通路的传导,减轻肾脏纤维化,发挥肾脏保护作用。