肿瘤坏死因子-α通过激活A549细胞Wnt/β-catenin通路降低肺泡液体清除功能

目的 探讨炎症环境下Wnt/β-catenin通路对肺泡液体清除功能的影响。方法 用不同浓度(10、40、80、160 ng·mL~(-1))肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理人肺泡上皮Ⅱ型细胞(A549)24 h,采用CCK-8法检测细胞存活率,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测炎性因子白介素(IL)-1β、IL-18、IL-6表达水平,Western blot检测钠水转运蛋白上皮细胞钠通道β亚型(βENaC)、NA~+、K~+-ATP酶(NKA)和水通道蛋白(AQP)4的表达,综合实验结果选取TNF-α最佳干预浓度;然后A549分为control组、TNF-α 40 ng·mL~(-1)组、Wnt通路抑制组(TNF-α+XAV939组),分别检测细胞存活率、凋亡率、炎性因子表达水平及β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、腺瘤息肉病基因蛋白(APC)、βENaC、NKA和AQP4的表达水平。结果 自TNF-α的40 ng·mLBiostatistics & Bioinformatics~(-1)起,A549细胞存活率逐渐降低,炎性因子表达水平逐渐升高,钠水SB203580转运蛋白βENaC、NKA表达逐渐降低,AQP4表达逐渐升高(P<0.05),选出最佳干预浓度为TNF-α 40 ng·mL~(-1);与control组相比,TNF-α 40 ng·mL~(-1)组A549细胞存活率降低,凋亡率、炎性因子表达水平升高,βENaC、NKA、APC蛋白表达降低,AQP4、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达升高(P均<0.05)。应用XAV939后,与TNF-α 40 ng·mL~(-1)组相比,TNF-α+XAV939组A549细胞存活率升高,凋亡率、炎性因子表达水平降低,βENaC、NKA、APC蛋白表达升高,AQP4、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达降低(P均<0.05)。结论 TNF-α可通过激活更多A549细胞Wnt/β-catenin通路,使钠水转运蛋白βENaC、NKA表达减少,AQP4表达增加,降低肺泡液体清除功能。