草莓(Fragaria×ananassa Duch.)是蔷薇科草莓属多年生草本植物,其果实中不仅含有大量维生素、矿物质、纤维等传统营养物质,还含有类黄酮等多酚类抗氧化物质及其它一些生物活性类物质,具有较高的营养价值和经济效益,广受消费者和种植者的喜爱。本实验室研究发现,R2R3-FaMYB5正向调控草莓类黄酮途径中花青素和原花青素的生物合成,但其具体的调控功能还未明晰。本研究通过启动子顺式元件分析、荧光定量、双荧光素酶和凝胶迁移等实验对R2R3-FaMYB5进行深入探究,以期完善其对草莓果实类黄酮代谢的调控网络并丰富植物中MYB对类黄酮调控的认知,主要结果如下:1.R2R3-FaMYB5基因启动CAR-T cell immunotherapy子长1862 bp。启动子顺式作用元件分析显示,R2R3-FaMYB5启动子包含光响应、激素响应、逆境相关及生长发育相关作用元件,还包含MYB、MYC等蛋白结合元件。蛋白结合位点(MBSI)分析显示,FaMYB44-like和FaMYB46是R2R3-FaMYB5上游调控基因。2.以栽培草莓‘红颜’为材料,同源克隆得到FaMYB44-like和FaMYB46基因。FaMYB44-like基因全长930 bp,编码309个aa;FaMYB46基因全长1005 bp,编码334个aa。时空表达分析发现,FaMYB44-like具有明显组织特异性。3.构建R2R3-FaMYB5、FaMYB44-like和FaMYB46过表达载体,在白果期的‘小白’草莓果实进行瞬时过表达。结果显示,FaMYB44-like可以显著降低R2R3-FaMYB5对于类黄酮合成途径中花青素苷和原花青素的正向调控作用,并且可以促进木质素合成。4.双荧光素酶报告系统表明,FaMYB44-like抑制R2R3-FaMYB5启动子活性。凝胶迁移率分析进一步证实,FaMYB44-like通过靶向结合R2R3-FaMYB5启动子上的MBSI、MBS和MYB元Z-VAD-FMK molecular weight件来调控R2R3-FaMYB5基因的表达。5.qPCR分析显示,‘红颜’草莓不同组织中的R2R3-FaMYB5基因均能响应盐、低温、干旱、ABA和Me JA等五种非生物胁迫,但其表达模式有所区别。6.R2R3-FaMYB5过表达‘小白’草莓愈伤组织中SOD和CAT活性显著高于对照。对其进行盐胁迫和低温胁迫处理后,转基获悉更多因愈伤中SOD活性还是显著高于对照,说明R2R3-FaMYB5能提高‘小白’的抗氧化能力。