褪黑激素对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡、类固醇激素分泌的影响

旨在研究褪黑素(Melatonin,MT)对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡、类固醇激素分泌及相关基因表达的影响,selleck化学以期解析MT影响绵羊繁殖的路径。本研究采集一岁龄体重相近饲养条件相同的20只健康小尾寒羊母羊新鲜卵巢,收集2~3 mm卵泡的颗粒细胞,随机分为5组,每组5个重复,分别添加0、10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6 )mol·L~(-1)MT,培养48 h后CCK8和Annexin V-FITC分别检测颗粒细胞的增殖和凋亡,确定体外培养浓度为10~(-7 )mol·L~(-1),将细胞随机分为2组,每组3个重复,收集试验组(添加10~(-7 )mol·L~(-1))和对照组(不添加)培养液及裂解液上清,ELISA检测孕酮(P_(4))、雌二醇(E_(2))和cAMP的含量,并利用RT-qPCR和Western blot分析MT对绵羊颗粒细胞MT受体基因、凋亡相关基因和类固醇分泌相关基因的mRNA和蛋白表达的影响。结果表明,添加MT各试验组均显著提高了颗粒细胞增殖活力,其中10~(-7 )mol·L~(-1)、10~(-6 )mol·L~(-1)和10~(-8 )mol·L~(-1)组颗粒细胞增殖活力显著高于10~(-9 )mol·Clinico-pathologic characteristicsL~(-1)组(P<0.05),10~(-7 )mol·L~(-1)细胞增殖活力最高,但与10~(-6 )mol·L~(-1)和10~(-8 )mol·L~(-1)组间差异不显著(P>0.05)。添加10~(-7 )mol·L~(-1)、10~(-6 )mol·L~(-1)和10~(-8 )mol·L~(-1) MT颗粒细胞早期凋亡和晚期凋亡率极显著低于10~(-9 )mol·L~(-1)组和对照组(P<0.01),其中10~(-7 )mol·L~(-1)组细胞凋亡率最低,但与10~(-6 )mol·L~(-1)和10~(-8 )mol·L~(-1)间差异不显著(P>0.05),而10~(-9 )mol·L~(-1)组对细胞凋亡没有显著影响(P>0.05)。添加10~(-7 )mol·L~(-1) MT颗粒细胞P_(4)分泌显著降低(P<0.05),而对E_(2selleck Ceralasertib)和cAMP水平无显著影响(P>0.05)。添加10~(-7 )mol·L~(-1) MT可显著上调MT受体基因MT1的mRNA和蛋白表达水平及抗凋亡基因Bcl-2的mRNA表达(P<0.05),显著下调了FSHR、StAR、CYP11A1和3β-HSD的mRNA和蛋白表达(P<0.05),以及凋亡基因BAX、Caspase-3的表达及BAX/Bcl-2比值(P<0.05),对受体基因MT2、LHR和CYP19A1的表达无显著影响(P>0.05)。综上,绵羊卵巢颗粒细胞体外培养添加MT通过上调抗凋亡基因表达,下调凋亡基因表达,抑制绵羊卵巢颗粒细胞凋亡;MT与MT1受体结合通过下调FSHR、StAR、CYP11A1和3β-HSD表达,抑制了P_(4)的分泌。