东北油豆角作为黑龙江特色小菜园产品,不仅风味好,而且含有人体所需的多种氨基酸、膳食纤维、维生素和矿物质,深受消费者的喜爱。此外,油豆角中还含点击此处有一些抗营养物质,如α-淀粉酶抑制剂、凝集素等,这些物质同时也具有重要的医用价值。本课题组前期已从金冠豆角中提取了α-淀粉酶抑制剂,本研究的目的是提取其中的凝集素,并对其性质进行研究。本研究对成熟期的金冠豆角籽粒进行取样,首先用1.5%Na Cl溶液盐溶来制备总蛋白粗提液,用80%的硫酸铵沉淀蛋白,再利用分子排阻层析与离子交换层析联用的方法进行提取纯化。分子排阻层析选用葡聚糖凝胶G75为填料,洗脱液为PBS,设置流速为0.5 m L/min;离子交换层析选用DEAE-A50为填料,用PB缓冲溶液、50 mmol/L和100 mmol/L浓度的Na Cl为洗脱液,流速为0.3 m L/min。接下对凝集素性质进行评价,选用2%的兔血红CHIR-99021细胞对凝集素的总活力进行测定;通过SDS-PAGE和Native-PAGE两种方法对凝集素分子量测定;使用三种单糖和三种双糖对糖特异性进行研究;对凝集素的热和p H稳定性进行研究;最后对凝集素功能性进行研究,包括凝集素对2%的牛血、羊血、鸡血、兔血红细胞的活力测定以及凝集素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、单增李斯特菌抑菌活性的测定。实验结果如下:硫酸铵沉淀后,测得蛋白质含量为90.33±5.56 mg/g,糖含量为2.58±0.42 mg/g,凝集活力为6.38×10~2 HU。通过分子排阻层析(葡聚糖凝胶G75)和阴离子交换层析(DEAE-A50),测得蛋白质含量为25.71±0.91 mg/g,凝集活力为4.19×10~6 HU。金冠豆角籽粒凝集素是由4个分子量为44 k Da亚基组的四聚体,其分子量在170 k Da左右。单糖结合实验中,该凝集素与D-果糖结合能力最强。在糖浓度最低为6.25 mmol/L时,凝集孔数为6;双糖结合实验中,乳糖与凝集素结合最好,凝集孔数为9。同时证明了D-果糖和乳糖与凝集素结合相比D-果糖较结合效果较好。在稳定性实验中,该凝集素在30-50℃内保持较高的凝集活性;在p H 3.0～7.0范围内凝集活性较高;在功能性实验中,该凝集素对牛血几乎没有凝血活性,对羊Bioglass nanoparticles血、鸡血、兔血的凝集孔数分别为8、10和9。该凝集素对单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌没有明显的抑菌效果。