家禽养殖中常见的鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)引起的急性呼吸系统疾病,被感染鸡主要出现咳嗽、喘鸣、啰音等临床症状,其气管、肺脏、肾脏等靶器官也呈现相应病变。IBV短时间内即可在鸡群中扩散、传播并变异,因此IB被认为是家禽养殖中的重要疫病之一。锦灯笼为茄科酸浆属植物,性寒,归肺经,具有清热解毒、利咽喉之功效,现代研究发现其中的黄酮类、甾体类和甾醇类等多种成分还具有抗炎、抗氧化等作用。本研究制备锦灯笼提取物,首先通过鸡胚肾细胞(Chicken embryo kidney cells,CEK细胞)体外试验探索了锦灯笼提取物对IBV的抑制作用,随后从组织损伤角度结合炎症等相关指标,通过体内试验综合研究了锦灯笼提取物对IB的预防和治疗作用,为研究和开发中药防治家禽呼吸系统疾病提供新的思路和方法。为了探究锦灯笼提取物对CEK细胞中IBV增殖的抑制作用,本试验测得自然条件下IBV M41株的鸡胚半数感染量(50%egg infectious dose,EID_(50))为10~(-7.625)/0.1 m L,醇提Pidnarulex NMR得到锦灯笼提取物,并采用细胞增殖-毒性法(Cell Counting Kit-8,CCK-8)筛选出作用于CEK细胞的最佳用药浓度为400μg/m L。本研究将培养24 h后的CEK细胞随机分为对照组、模型组和锦灯笼组,每个分组设置4个平行,向CEK细胞中添加400μg/m L锦灯笼提取物后,加入50μL IBV病毒液,培养72 h后收集细胞,采用q PCR检测方法对细胞中IBV(IBV-N)载量和炎症相关因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)转录水平进行测定。试验结果表明:(1)添加400μg/m L锦灯笼提取物可以抑制CEK细胞中IBV增殖;(2)添加400μg/m L锦灯笼提取物可以抑制IBV导致的CEK细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α因子的上调。为了探究锦灯笼提取物对IB的预防作用,本研究将40只17日龄海兰褐鸡随机分为对照组、模型组、1 g/kg锦灯笼组和3 g/kg锦灯笼组。试验鸡于感染IBV前开始灌服相应剂量锦灯笼提取物,每次给药间隔12 h,连续给药96 h,试验期间测定试验鸡体温、体重,并于试验结束后观察组织病变,检测IBV载量以及炎症相关指标。试验结果表明:(1)观sociology medical察Nirogacestat小鼠试验鸡气管、喉头、肺脏和肾脏组织病理切片,发现1 g/kg和3 g/kg锦灯笼提取物均可缓解其损伤,3 g/kg锦灯笼提取物的效果更显著;(2)1 g/kg和3 g/kg锦灯笼提取物对IBV导致的体温升高均有抑制作用,3 g/kg锦灯笼提取物效果较显著;(3)3 g/kg锦灯笼提取物显著影响试验鸡的增重;(4)检测试验鸡肺脏和肾脏组织中IBV-N转录水平,发现3 g/kg较1 g/kg锦灯笼提取物抑制IBV增殖的作用更为显著;(5)1 g/kg和3 g/kg锦灯笼提取物均可显著下调试验鸡血清中IL-6和TNF-α水平,并上调IL-10水平;(6)1g/kg和3 g/kg锦灯笼提取物均可下调试验鸡肺脏和肾脏中TNF-α水平,3 g/kg锦灯笼提取物效果更为显著。研究发现,试验鸡灌服3 g/kg锦灯笼提取物对IB具有较好的预防作用,本次试验对试验感染IBV,并注射细菌脂多糖(LPS)升高试验鸡体温,进一步探究锦灯笼提取物对IB的治疗作用。将30只17日龄海兰褐鸡随机分为对照组、模型组和锦灯笼(3g/kg)组,试验鸡滴鼻点眼IBV 60 h时腹腔注射LPS,随后灌服锦灯笼提取物,每次给药间隔12h,连续给药72 h,试验期间观察试验鸡临床症状,测定体温、体重,并于试验结束后观察组织病理变化,测定IBV载量及炎症相关指标。试验结果表明:(1)锦灯笼提取物可缓解试验鸡临床症状并减轻气管、喉头、肺脏与肾脏组织的病变;(2)锦灯笼提取物可抑制IBV和LPS引起的试验鸡体温升高;(3)锦灯笼提取物可显著影响试验鸡的增重。(4)锦灯笼提取物可以抑制试验鸡肺脏和肾脏中IBV增殖;(5)锦灯笼提取物可以下调试验鸡血清中IL-6和TNF-α水平,上调IL-10水平;(6)锦灯笼提取物可以抑制试验鸡肺脏和肾脏中TNF-α因子上调。综上所述,CEK细胞中添加400μg/m L锦灯笼提取物,可在体外水平抑制IBV增殖;给试验鸡灌服1 g/kg和3 g/kg锦灯笼提取物,均可体内水平预防IB;灌服3 g/kg锦灯笼提取物可以缓解试验鸡临床症状,减轻组织病理变化,下调体温,抑制IBV增殖及调控炎症水平,从而发挥治疗作用。研究结果表明,锦灯笼提取物防治IB效果显著,为治疗家禽呼吸系统疾病提供了一种可选的药物。