目的:通过体外细胞实验探索非同源末端连接活性是否参与三阴性乳腺癌对紫杉醇的耐药,观察抑制其活性后对三阴性乳腺癌紫杉醇耐药细胞的影响,并探讨其潜在分子机制,希望能为解决三阴性乳腺癌对紫杉醇的耐药提供一定理论参考。方法:首先将三阴性乳腺癌细胞(selleck NMRMDA-MB-231)以及三阴性乳腺癌紫杉醇耐药细胞(MDA-MB-231/PTX)复苏后进行体外培养;运用RT-PCR和Western blot法检测DNA连接酶IV(LIG4)在两种细胞中的表达差异;通过生物信息学方法检索TCGA数据库,分析LIG4在三阴性乳腺癌患者中的表达情况与生存预后关系;通过CCK8法比较两种细胞对不同浓度紫杉醇、不同浓度SCR7(LIG4抑制剂)的敏感性,检测两药联合Protein Characterization作用下MDA-MB-231/PTX细胞对紫杉醇敏感性的变化;将MDA-MB-231/PTX细胞分组为:对照组(MDA-MB-231/PTX细胞)、紫杉醇组(MDA-MB-231/PTX细胞+紫杉醇)、紫杉醇联合SCR7组(MDA-MB-231/PTX细胞+紫杉醇+SCR7),通过克隆形成实验观察各分组细胞增殖能力;划痕实验观察细胞迁移能力;Transwell实验观察细胞侵袭能力;流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期分布情况;Western blot法检测MDA-MB-231/PTX细胞中LIG4、XRCC1、PARP1及耐药蛋白P-g P的表达情况。结果:RT-PCR和Western blot结果显示,与MDA-MB-231细胞相比,MDA-MB-231/PTX细胞中LIG4的表达量更高(P<0.05);生物信息学分析显示,与低表达LIG4的三阴性乳腺癌患者相比,高表达LIG4的三阴性乳腺癌患者的生存期更短(P<0.05)。CCK8结果显示,MDA-MB-231/PTX细胞的紫杉醇作用48h IC_(50)显著高于MDA-MB-231细胞,对紫杉醇具有高度耐药性(P<0.05);MDA-MB-231/PTX细胞的SCR7作用48h IC_(50)与MDA-MB-231细胞的SCR7作用48h IC_(50)相比,差异无统计学意义(P>0.05);与仅紫杉醇作用于MDA-MB-231/PTX细胞的48h IC_(50)相比,经由紫杉醇联合SCR7作用后,MDA-MB-231/PTX细胞的紫杉醇作用48h IC_(50)显著降低(P<0.05)。细胞克隆形成、细胞划痕及Transwell结果显示,与对照组及紫杉醇组相比,紫杉醇联合SCR7组显著抑制了MDA-MB-231/PTX细胞的增殖、迁移及侵袭能力(P<0.05);流式细胞术分析显示,与对照组及紫杉醇组相比,紫杉醇联合SCR7组显著增加了MDA-MB-231/PTX细胞的凋亡率及细胞在G2/M期的聚集(P<0.05);Western Blot结果显示,紫杉醇联合SCR7组中LIG4、XRCC1、PARP1、P-g P蛋白表达均显著低于其他组(P<0.05)。结论:1.LIG4在MDA-MB-231/PTX细胞中高表达,且高表达LIG4的三阴性乳腺癌患者的生存期更短;2.LIG4的高表达可能参与三阴性乳腺癌对紫杉醇确认细节的耐药,使用LIG4抑制剂(SCR7)可以增强紫杉醇诱导的细胞凋亡作用,降低MDA-MB-231/PTX细胞对紫杉醇的耐药性;3.LIG4抑制剂(SCR7)可能是通过抑制非同源末端连接活性及其备选通路(PARP1、XRCC1)来抑制MDA-MB-231/PTX细胞对紫杉醇产生耐药的。