基于核酸功能材料的新型生物传感器构建及在重金属离子快速分析中的应用研究

近年来,随着人类活动的增加,许多有害物质被排入水环境。其中,重金属离子(heavy metal ions,CX-5461抑制剂HMIs)被认为是最危险的污染物之一,其自身具有的不可降解性、生物积累性和高毒性对生态环境以及人类健康造成了严重的威胁。因此,实现水体中HMIs的快速灵敏分析具有重要意义。目前,HMIs的检测主要依靠传统的仪器分析技术,所用的分析仪器价格昂贵、检测成本高、样品预处理复杂,且不适于现场分析和连续在线检测。与此相比,生物传感技术因其操作简便、响应快速、成本低、抗干扰能力强等优势在污染物快速分析diABZI STING agonist小鼠方面显示出极大的应用潜力。其中,DNA生物传感技术以DNA作为传感元件,具有较高的灵敏度、特异性和现场检测能力。基于此,本文构建了几种新型DNA生物传感器,可实现对环境HMIs进行快速、高灵敏分析的目的。主要研究内容如下:(1)构建了一种基于脱氧核酶(DNAzyme)的新型电化学DNA生物传感器,实现了水中Pb~(2+)的超灵敏检测。在本研究中,将DNAzyme固定在磁珠上形成DNAzyme步行器参与目标物的识别并触发后续的链置换反应(strand displacement reaction,SDR)以提高生物传感器的灵敏度;同时将三嵌段聚腺嘌呤探针固定在电极表面,特异性捕获SDR的产物,并自组装形成大量双链,供电化学活性物质亚甲基蓝嵌入。最终,构建的电化学DNA生物传感器在无需添加天然酶、使用特殊器件以及合成无机材料的情况下成功实现了对实际样品中Pb~(2+)的超灵敏检测,且该方法具有检测限低(limit of detection,LOD,0.039 p M)和检测范围宽(0.1 p M–500 n M)等优势。(2)上述工作中所用的聚腺嘌呤探针虽然具备多种优势,但作为单链DNA,其可控性和稳定性较低。为解决这一问题,本研究设计了一种聚腺嘌呤DNA四面体(ATDN)探针,以此构建了一种可再生电化学传感器,实现了对Pb~(2+)的快速灵敏检测(LOD,0.035 n M)。在本研究中,由于兼备了聚腺嘌呤和四面体的优势,ATDN能够高效稳定地固定在电极表面,极大地提高了探针的杂交效率。且ATDN自身的静电斥力以及空间结构使其具备了调控探针空间位置的能力,从而实现电活性物质与电极表面距离的调控。此外,基底材料的使用保障了传感器的检测性能以及与其它策略的兼容性。该方法简单快捷,有较高的应用潜力。(3)上述工作均基于单目标物分析,而真实环境中往往是多种重金属共存,为此,本研究设计了一种新型的熵驱动“DNA纳米花”结构用于多目标同时分析。这种结构可富集大量荧光探针,从而提高反应效率,改善体系稳定性,且与SDR体系兼容后,仅需一步操作即可实现信号的放大与输出。以此构建的荧光生物传感器,实现了水中Pb~(2+)、Cu~(2+)和Hg~(2+)的同时快速检测,其LOD分别dental pathology为0.13n M、3.5 p M和4.6 p M。得益于DNA的可编程性及体系的灵活性,该方法可通过添加或替换探针实现对其它目标物的检测,具有极高的应用价值。