乳是人类膳食结构中比较完善的食物,能促进身体生长发育。乳富含各种人群所需的多种营养素,主要包括蛋白质、干物质、脂肪、乳糖、维生素、酶、矿物质、激素、免疫球蛋白等。骆驼乳作为市场上常见的高值乳源,因其价格和产量等与羊乳和牛乳不同,常导致骆驼乳及其乳粉中掺入低价羊乳和牛乳的情况发生。为了维护消费者公平,促进行业健康持续发展,建立一种快速且灵敏的骆驼乳粉掺假鉴别方法非常有意义。本课题基于骆驼乳粉、羊乳粉和牛乳粉的DNA序列的差异,分别以骆驼、羊和牛的线粒体基因为靶基因设计特异性引物,建立了骆驼乳粉中掺入的羊和牛乳源成分的定性定量PCR检测方法,其研究内容及结果如下:优化了乳粉体细胞DNA提取方法。比较了柱式法和磁珠法对乳粉DNA的纯化效果,柱FUT-175半抑制浓度式法提取的乳粉(骆驼乳粉、羊乳粉和牛乳粉)DNA的浓度、纯度及完整性显著优于磁珠法(p<0.05),因此柱式法更适合用于乳粉DNA的纯化。优化后的骆驼乳粉柱式法提取DNA时的最佳裂解时间为50min,三氯甲烷和Wash Solution洗脱次数为2次;羊乳粉最佳裂解时间为30min,洗脱次数为2次;牛乳粉最佳裂解时间为50min,洗脱次数为2次,最佳富集管数为3个管。建立了普通PCR定性检测骆驼乳粉中羊和牛乳源成分的方法。基于骆驼、羊和牛线粒体细胞色素b(Cyt b)基因作为特异性基因,设计特异性引物,利用普通PCR技术最低能从骆驼乳粉中检测出1%的羊乳粉和牛乳粉成分。该技术也可用于市售不同品牌不同生产批次的骆驼乳粉样品中羊和牛乳源性成分的鉴别,具有良好的准确性和可行性,适合于骆驼乳粉中掺入的羊乳粉和牛乳粉成分的物种鉴定的要求。建立了荧光定量PCR定量检测骆驼乳粉中羊和牛乳源成分的方法。基于羊线粒体12S r RNA基因和牛线粒体细胞色素b(Cyt b)基因作为羊和牛的物种特异性基因,以反刍动物线粒体16S r RNA基因作为内参基因,设计特异性引物和内参引物,建立Ct比值(羊或牛特异性引物Ct值/内参引物Ct值)与羊乳粉或牛乳粉含量的掺假定量标准horizontal histopathology曲线。线性公式分别为Y=-0.0014x+0.9236(羊乳粉)和Y=-0.0026x+0.9862(牛乳粉),相关系数分别为0.9816和0.9862,模拟掺假样品的回收率均在88%-115%的范围,CVKD025<10%,能够在5%-100%的范围内实现骆驼乳粉中掺入的羊乳粉和牛乳粉成分的定量检测。