牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea,BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的一种已经在世界范围内广泛流行的牛传染病,虽然BVD在我国仅被定为三类动物疫病,但它给养牛业造成的巨大经济损失仍然不容忽视。BVDV除了可引起牛的急性感染外,还可在母牛怀孕早期透过胎盘屏障导致持续性感染(PI)犊牛的出生。持续性感染动物往往比急性感染动物更能有效地传播BVDV,PI动物终生都会排出大量病毒,所以PI牛被认为是BVDV的主要宿主。世界上许多国家使用的控制方案主要依赖于PCH-223191研究购买I动物的早期发现和扑杀。E0蛋白是BVDV的囊膜蛋白之一。该蛋白被广泛用于研究BVDV基因工程亚单位疫苗。本研究旨在利用昆虫细胞表达BTamoxifen化学结构VDV E0蛋白,研制亚单位疫苗。首先设计特异性引物扩增BVDV E0基因,通过同源重组的方法将E0基因片段与昆虫表达载体质粒pFastBacHTB连接,将pFastBacHTB-E0转化至DH10Bac感受态中,目的基因转座至穿梭载体Bacmid上,通过蓝白斑筛选,获得重组杆粒rBacmid-E0。重组杆粒在转染试剂的作用下进入Sf9昆虫细胞获得具有细胞病变效应的重组杆状病毒r Bv-E0,病毒经传代得到具有高表达量的P4代重组病毒液,重组病毒通过与镍柱结合,在咪唑的洗脱作用hepatic ischemia下获得纯化的E0蛋白。将重组杆状病毒rBV-E0与弗氏佐剂混合形成油包水重组亚单位疫苗,免疫小鼠通过间接ELISA方法、中和实验、流式细胞仪和双抗体夹心ELISA等方法评价该疫苗的免疫原性。重组疫苗免疫后可刺激小鼠产生特异性抗体,中和抗体可中和BVDV,提高了CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群含量和Th1型细胞因子分泌水平。