三白灌肠液对溃疡性结肠炎的临床疗效观察及相关机制研究

目的:溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)是一种病因尚不明确且治愈率极低及高复发率的慢性炎症性肠病,炎症性肠病病情诱发因素较复杂。UC主要以肠腔内黏膜糜烂、充血、水肿等损伤为主要症状。临床上用药种类繁多,中医药治疗对溃疡性结肠炎有促进免疫机制应答,维持肠道菌群正常平衡独特的优势,具有副作用小、见效快的优点。UC大肠湿热证在临床上较为常见,主要以黏液脓血便,肛门灼热为主,病情大多反复无常,无法治愈。三白灌肠液为治疗UC的纯中药制剂,由防风、白芨、白蔹、白芷、当归5味中药组成,目前已开发为院内制剂为五味消澼洗液,全方谨守病机,共奏清热化瘀止痛、祛湿止泻功效,且防风作为三白灌肠液君药,研究证明其有明显抑制肺部炎症功效。所以我们进行以下五方面研究:一、观察三白灌肠液在UC(大肠湿热证)临床应用观察研究。二、分析三白灌肠液中君药防风的活性成分升麻素苷对DSS诱导UC小鼠模型的相关炎症因子反应影响。三、明确升麻素苷对NF-κB,AKT,MAPK信号通路的转导影响。四、探究升麻素苷对UC肠道菌群稳态丰度及定植调节作用。五、探究升麻素苷对LPS诱导RAW264.7细胞的炎症反应影响。方法:临床选取(大肠湿热型)UC患者在给与美沙拉嗪灌肠对照治疗的基础上合用三白灌肠液灌肠治疗,对比两组患者对服药前后中医症状积分、中医证候疗效比较以及改良Mayo评分、肠镜下评分方面及血ESR、CRP含量等方面的变化,客观评价其临床疗效和作用机制。实验将36只小鼠随机分为6组,DSS诱导小鼠UC造模成功后分析结肠HE染色结果及菌群测序结果;检测结肠组织中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平及检测屏障蛋白Occludin、Cludin-3和ZO-1荧光表达含量,后续进行WB检测NF-κB,AKT,MAPK信号通路相关蛋白磷酸化表达情况。结果:第一章研究表明临床治疗后两组均有改善治疗组总有效率93.3%;对照组总有效率76.9%。治疗组有效率明显高于对照组,且中医症候积分、Mayo评分降低、肠镜下评分及ESRBarasertib试剂、CRP表达抑制情况治疗组较对照组也有明显的效果,有显著统计学意义。第二章表明,升麻素苷降低DSS对小鼠UC模型临床及病理组织评分,显著抑制炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α表达水平;通过抑制MAPK、NF-κB和AKT信号通路中蛋白P38,ERK1/2,JNK1bio-inspired materials/2,P65,IκB-α和AKT磷酸化的表达来抑制炎症的发生Dorsomorphin说明书;升麻素苷通过上调肠道屏障蛋白Occludin、Claudin-3和ZO-1含量和调节肠道有益菌乳酸菌(Lactoba cillus),厚壁菌(Firmicute)及致病菌肠杆菌(Enterobacteriales),螺杆菌(H elicobacteraceae),弯曲杆菌(Campylobacterales)的定植来维持肠道菌群稳态从而抵抗肠道组织损伤。第三章研究表明,升麻素苷抑制LPS诱导巨噬细胞RAW264.7炎症发展,阻碍MAPK、NF-κB和AKT信号转导过程;同时下调炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α的m RNA表达含量;降低炎症蛋白COX-2和i NOS表达含量,阻碍两种信号蛋白的联合相互作用,形成对RAW264.7炎症保护。结论:临床应用结果示,治疗组对大肠湿热型UC患者治疗效果优于对照组,且副作用小,接受度较高。实验结果示,升麻素苷通过阻碍炎症信号通路形成和下调相关炎症因子表达来抑制炎症的发生,从而达到保护UC小鼠模型肠道组织损伤以及抑制LPS诱导RAW264.7细胞炎症发展。