目的探究捏脊的持续效应对自闭症模型大鼠海马内源性大麻素受体及相关水解酶的影响。方法本实验采用20对育龄期SPF级Wistar大鼠,雌雄1:1合笼过夜,次日清晨查看,观察雌鼠出现阴栓记为胚胎第0.5天(embryofoday,E0.5)后,将雌雄分笼饲养,并将孕鼠随机分成正常组和VPA组。孕12.5天时,两组孕鼠均按体质量0.24m L/100g腹腔注射给药,VPA组腹腔注射250mg/m L戊丙酸钠溶液(Sodium valproate,VPA),正常组腹腔注射等体积生理盐水;所产子代经发育行为学(体质量、睁眼实验、方向趋向性实验、强迫游泳实验、热板致痛实验)检测筛选后确定为自闭症模型鼠。本实验选取符合条件的自闭症模型仔鼠56只,依据随机数字表法分为7组:模型组、捏脊组、捏脊后1d组、捏脊后2d组、捏脊后4d组、捏脊后8d组、捏脊后16d组,每组8只;另外选取8只正常大鼠为空白组。空白组与模型组不予干预,仅模拟抓取,持续28d后取材,其余6组进行捏脊干预,1次/d,21遍/1次,连续干预28d后即刻、后1d、后2d、后4d、后8d、后16d进行取材。8组大鼠于首次捏脊前(PN22)和取材前进行旷场行为学测试,末次旷场行为学检测结束后取材取大鼠大脑海马组织,运用免疫组织化学技术检测大鼠海马区内源性大麻素CB1/CB2受体表达情况,采取免疫蛋白印迹分析(Western Blot)检测大鼠海马区内源性大麻素CB1/CB2受体及相关代谢酶FAAH/MAGL蛋白表达。购买Taurine结果1、体重指标:与正常组仔鼠比较,VPA组仔鼠在PN7(出生后7天)、PN14、PN21的体重较低(P<0.001)。2、睁眼实验:与正常组仔鼠比较,VPA组仔鼠睁眼评分在PN12、PN13、PN14无明显区别(P>0.05),PN15、PN16睁眼评分明显降低(P<0.001)。3、强迫游泳实验:与正常组仔鼠比较,VPA组仔鼠游泳能力在PN9、PN11、PN13游泳评分明显降低(P<0.001),于PN15时两组评分无明显差异(P>0.05)。4、方向趋向性实验:与正常组仔鼠比较,VPA组仔鼠在PN7、PN8、PN9、PN10均有差异(P<0.05)。5、热板致痛实验:与正常组仔鼠比较,VPA组仔鼠对于痛觉感受明显迟钝,在PN9、PN11、PN13、PN15不同日龄均有显著性差异(P<0.001)。6、旷场行为学:1)干预前:与空白组比较,其余7组自闭症大鼠的活动总距离和中央区域活动距离更短、中央区域活动路程占总路程的比例(Rd)更小、站立次数减少、理毛次数增多,差异均具有统计学意义(P<0.05)。除空白组外,其余各组之间无统计学差异(P>0.05)。2)干预后:与模型组比较,其余7组活动总距离和中央区域活动距离增加、Rd值变大、站立次数变多、理毛次数减少,差异均具有统计学意义(P<0.05)。7、免疫印迹法:1)与空白组比较,模型组海马区FAAH、MAGL蛋白表达增多、CB1R蛋白表达减少(P<0.05),CB2R蛋白表life-course immunization (LCI)达无明显差异(P>0.05)。2)与模型组比较,捏脊后4d组FAAH、MAGL蛋白表达下降,CB1R蛋白表达明显上升(PGDC-0973核磁<0.05),捏脊后8d组FAAH、MAGL蛋白表达下降,CB1R、CB2R蛋白表达明显上升(P<0.05),其余各组较模型组比较无明显差异(P>0.05)。8、免疫组化法:1)与空白组比较,模型组CB1R光密度值明显降低(P<0.05),CB2R光密度值无明显差异(P>0.05)。2)与模型组比较,捏脊后4d组和捏脊后8d组CB1R光密度值明显上升(P<0.05),其余各组无明显差异(P>0.05);各组CB2R光密度值较模型组比较均无明显差异(P>0.05)。结论1、VPA自闭症大鼠存在自发性活动减少、重复刻板动作症状严重、探索欲降低以及焦虑障碍为主的ASD样症状。2、以28d为1个疗程的捏脊干预可提高VPA自闭症大鼠自发性活动量、缓解刻板动作、提高探索欲以及减少焦虑样行为的产生,且这种治疗效果在捏脊结束后的第4-8d达到最大,随后开始减弱,但仍可持续到捏脊结束后的第16d。3、捏脊疗法的持续效应很有可能是通过上调VPA自闭症大鼠海马区CB1R蛋白表达,下调FAAH和MAGL蛋白,调节内源性大麻素系统实现的。