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目的:应用高分辨血管壁磁共振成像(High-resolution magnetic resonance vessel wall imaging,HR-VWI))、动态对比增强MRI(dynamic contrast enhanced-MRI,DCE-MRI)技术采集伴或不伴神经精神异常的SLE(Neuropsychiatric systemic lupus erythematosus,NPSLE;non-Neuropsychiat ric systemic lupus erythematosus,non-NPSLE)患者的容量转移常数(transfeTalazoparib使用方法r volume transfer constant,K~(trans))和血管内体积分数(intravascular space volume fraction,v_p),比较不同类型的狼疮患者各脑区血脑屏障的渗透参数变化,并结合临床认知量表测量,分析其与认知功能的关系。探讨DCE成像在早期诊治SLE患者中枢神经系统受损的应用价值。通过HR-VWI成像探讨SLE患者中枢神经系统(Central Nervous System,CNS)受损情况。方法:建立SLE患者的纳入和排除标准,收集在河北医科大学第二医院免疫风SARS-CoV2 virus infection湿科住院的29名SLE患者作为研究对象,根据临床表现分为两组:神经精神狼疮患者(NPSLE)11名(n=11),非神经精神性狼疮(non-NPSLE)患者18名(n=18);健康对照组15名(n=15)。采集SLE患者认知功能评分(MMSE及Mo CA量表)及SLEDAI-2000评分。对各组行颅脑MRI平扫、DCE-MRI、HR-VWI平扫及增强扫描。将采集的DCE数据通过2步配准法匹配到AAL图谱,再使用patlak模型对每个感兴趣区内平均信号进行拟合,得出K~(trans)值和v_p值。对获得渗透参数K~(trans)值及v_p值进行统计分析,比较不同组别间参数的不同。比较各组间不同脑区K~(trans)值及v_p值差异,行SLE患者各脑区渗透参数与认知评分的相关性分析。根据HR-VWI扫描结CL 318952细胞培养果统计不同患者颅脑动脉病变程度,并通过量化积分来表示,依次比较其与患者疾病活动、MMSE及Mo CA量表得分的相关性。结果:1.与non-NPSLE组比较,NPSLE组患者认知量表MMSE及Mo CA得分显著下降(p<0.05)。2.三组间K~(trans)值及v_p值的差异比较:1)三组间K~(trans)值差异无显著统计学意义(p>0.05)。2)三组间v_p值差异比较:与健康对照组比较,NPSLE组患者右侧岛叶(30)、左侧前中扣带回(31)、左侧颞横回(79)、右侧颞下回(90)v_p值升高(p<0.05);与non-NPSLE组相比较,NPSLE组患者左侧颞横回(79)、右侧颞下回(90)v_p值升高(p<0.05);与健康对照组相比,non-NPSLE组患者右侧颞下回(90)v_p值升高(p<0.05)。3.NPSLE患者右侧距状裂周围皮层(44)v_p值与指标MMSE值呈正相关(p<0.01)。3.与non-NPSLE组相比,NPSLE组患者SLEDAI-2000评分及血管炎评分更高(p<0.05)。SLE患者血管炎评分与SLEDAI-2000评分呈正相关(p<0.05)。SLE患者血管炎评分与MMSE、Mo CA评分呈负相关(p<0.05)。结论:1.与non-NPSLE组比较,NPSLE组患者存在整体认知水平下降。2.SLE患者白质区域整体血脑屏障通透性越高,认知功能越差。3.SLE患者右侧岛叶、左侧前中扣带回、左侧颞横回、右侧颞下回的v_p增加,提示血容量增多。4.SLE患者在HR-VWI图像上常表现出脑血管炎,且与疾病活动度或神经精神症状严重程度呈正相关。

目的 分析显微镜下精索静脉结扎术治疗精索静脉曲张对精浆线粒体功能障碍的影响。方法 选取2020年2月至2021年9月在蠡Navitoclax分子式县医院接受不孕症评估的105例精索静脉曲张不育男性患者，均接受显微镜下精索静脉结扎术。在术前和术后3个月收集两次精液样本，分析精浆线粒体活性、精子核DNA的完整性和线粒体呼吸评估。结果 患者术后3个月Ⅰ级细胞较术前增多，Ⅲ级细胞较术前减少(P<0.05),Ⅱ级细胞和nerve biopsyⅣ级细胞与术前比较无统计学差异(P>0.05);患者术后3个月Ⅰ级KPT-330分子式细胞和Ⅱ级细胞百分比较术前增多，Ⅲ级细胞和Ⅳ级细胞占比较术前减少(P<0.05)。患者术后3个月DNAⅠ级量和Ⅱ级量较术前升高，DNAⅢ级和Ⅳ级量较术前减少(P<0.05)。患者术后3个月的呼吸控制率(RCR)、V3、V4等参数较术前升高(P<0.05)。患者术后3个月的精子浓度、活动精子率、正常形态精子率较术前升高，不活动精子率、血清活性氧代谢物(ROM)和精子脂质过氧化物(LPO)水平较术前降低(P<0.05)。结论 精索静脉曲张患者呈现出更高百分比的DNA断裂细胞和线粒体不活跃的精子，显微镜下精索静脉结扎术能保持精索静脉曲张患者DNA完整性并显著改善精浆线粒体功能障碍。

目的 观察止痒润肤乳对小鼠特应性皮炎（atopic dermatitis, AD）样模型皮损组织中Janus激酶信号转导子和转录激活子（janus kinase-signal transducer and activator of transcription, JAK-STAT）信号转导通路关键细胞因子白细胞介素-4(interleukin-4, IL-4)、γ干扰素（interferon-γ, IFN-γ）表达水平的影响。方法 将50只SPF级BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、糠酸莫米松软膏组、迪高替尼SCH772984临床试验软膏组、止痒润肤乳组，每组10只。采用2,4-二硝基氯苯（2,4-dinitrochlorobenzene, DNCB）溶液诱导AD样反应，实验过程观察小鼠抓挠行为并进行皮损评分，取材后进行HE染色观察皮损组织病理学改变，采用Real-time PCR法和Western blot法分别测定皮损组织中IL-4、IFN-γ的mRNA表达水平和蛋白含量。结果 与空白组相比，模型组小鼠皮损组织IL-4mRNA和蛋白表达量上升（P<0.05）,IFN-γ mRNA和蛋白表达量下降（P<0.05）；与模型组相比，止痒润肤乳组、糠酸莫米松软膏组、迪高替尼软膏组IL-4 mRNA和蛋白表达量减少（P<0.01）,IFN-γ mRNA和蛋白表达量升高（P<0.01）；与糠酸莫米松软膏组相比，止痒润肤乳组IL-4 m RNA和蛋白表达量降低（P<0.01）、IFN-γ mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.01）；PS-341与迪高替尼软膏组相比，止痒润肤乳组IL-4 mRNA和蛋白表达量差异无统计学意义（P>0.05）,IFN-γ mRNA和蛋白表达量升高（P<0.01）。结论 止痒润肤乳biophysical characterization对DNCB诱导的AD样症状有明显疗效，其作用机制可能通过抑制JAK-STAT信号转导通路中关键细胞因子IL-4基因表达、上调IFN-γ基因表达，进而减轻炎症反应来实现的。

研究目的:1、分析不同水平尿白蛋白/肌酐比值的2型糖尿病(T2DM)患者临床特点2、研究2型糖尿病患者尿白蛋白/肌酐比值(UACR)的影响因素3、NN2211细胞培养研究不同水平尿白蛋白/肌酐比值与2型糖尿病慢性并发症相关性,为糖尿病肾病(DN)、糖尿病视网膜病变(DR)等的早期诊治、改善预后提供参考。研究方法:收集2021年11月至2022年05月期间就诊于大理大学第一附属医院和大理州人民医院的T2DM患者424例,其中男性257名;女性167名。收集患者一般资料、生化指标及糖尿病并发症情况。根据患者UACR将患者分为三组:正常UACR组(UACR<30mg/g)、微量UACR组(30mg/g≤UACR<300mg/g)和大量UACR组(UACR≥300mg/g)。正常UACR组275例,微量UACR组113例和大量UACR组36例。应用SPSS25.0软件包分析上述数据。研究结果:1.与正常UACR组相比,大量UACR组的糖尿病病程、高血压病程、体重、FBG、PBG、HbA1c、UA、SBP、DBP、Cr、WBC、NEUT、FIB、GFR、TG明显增高,25-OH-D3、TBIL明显减低。2.DBP(b=9.632,t=2.426,P=0.028)、FBG(b=27.324,t=2.277,P=0.02Decitabine价格3)、HbA1c(b=20.769,t=2.249,P=0.025)、UA(b=1.00,t=2.855,P=0.014)、NLR(b=6.484,t=1.544,P=0.014)为UACR的影响因素,差异有统计学意义(P<0.05)。3.大量UACR组DR、DPN、糖尿病颈动脉病变发病率明显高于微量UACR组和正常UACR组。4.UACR对DR(OSulfonamides antibioticsR=1.667,95%CI 1.067-2.605,P=0.025),糖尿病颈动脉病变(OR=2.173,95%CI 1.343-3.516,P=0.002)的影响具有统计学意义(P<0.05)。UACR为DR、DN、糖尿病颈动脉病变的独立影响因素。研究结论:1.大量UACR组患者糖尿病、高血压病程更长、SBP、DBP、FBG、PBG、HbA1c、APOA、UA、NLR、FIB、NEUT、WBC水平更高,25-OH-D3水平更低。2.病程、DBP、FBG、HbA1c、UA、NLR为UACR的影响因素。25-OH-D3为UACR的保护性因素。3.UACR水平是DR、糖尿病颈动脉病变发生的危险因素。

目的：通过网络药理学的技术和方法，筛选何首乌相关化学成分映射获悉更多肝损伤作用靶点，构建何首乌成分-靶点-肝损伤网络图，探讨何首乌致肝损伤的作用机制。方法：通过TCMID、TCMGenDIT数据库及综合已报道文献检索何首乌化学成分，从中药系统药理学分析平台(TCMSP)、BATMAN-TCM数据库筛选并获取成分对应靶点；通过DrugBank、DisGeNET、Gene Cards多数据库联合检索肝损伤靶点，整合分析antibiotic-induced seizures交集靶点建立STRING蛋白交互关系，利用Cytoscape 3.7.1软件构建成分-靶点-肝损伤可视化网络；通过DAVID数据库对交集靶点基因功能(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果：共筛选收集何首乌化学成分38个，成分靶点307个，肝损伤靶点6140个，成分与肝损伤交集靶点252个，GO生物功能富集分析共涉及838个，KEGG通路富集分析为111条，预测其涉及肝损伤作用机制通路主要包括cAMP信号通路、MAPK信号通路、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、HIF-1信号通路、药物代谢-细胞色素P450、TNF信号通路、PI3K-Akt信号通路、NOD样受体信号PR-171采购通路、Toll样受体信号通路、Wnt信号通路。结论：进一步阐释了何首乌多成分、多靶点、多通路共同作用的特点，为解析何首乌致肝损伤作用机制研究提供新思路和新方向。

研究目的:kalirin-7(Guanine nucleotide exchange factor kinase-7,Kal-7)作为调节中枢神经突触可塑性的关键因子,通过与不同突触后蛋白结合参与神经细胞的生长、发育、营养支持和脑神经递质(Brain neurotransmitter,BNT)调控,维持大脑兴奋与抑制平衡并与多种神经退行性疾病密切相关。诸多文献表明,运动通过降低氧化应激、炎症和细胞凋亡,改善慢性非传染性疾病,如心梗心脏功能;还可增加大脑皮层,前额叶和海马等区域Kal-7蛋白表达,改善脑梗患者神经炎症、神经元坏死程度和海马萎缩等。通过梳理Kal-7与神经退行性疾病及其运动干预新近文献,归纳其可能的作用机制,为进一步阐释运动防控神经退行性疾病的可能机制,寻找运动防治该类疾病的手段与方法及其靶标筛选提供思路。研究方法:通过文献查找法查阅PubMed、知网和必应搜索,以输入”Kal-7″、”Exercise”、”Neurodegenerative disease”等关键词查阅相关文献114篇,并对其中的发现和主要观点结论进行梳理总结。研究结果:(1)kalirin属于Rho鸟嘌呤核苷酸交换因子(Guanine nucleotide exchange factor,GEF)亚类,最早在弥漫性B细胞淋巴瘤中发现,主要分布在大脑、肠道、心脏、脂肪、肾上腺及肾脏、脾脏和肝脏等器官组织。中枢神经系统Kal-7是突触可塑性的关键因子,在大脑认知相关区域(额叶、海马、纹状体等)高度表达,与神经发育密切相关。Kal-7结构各区域可结合多种蛋白发挥作用,其N端Sec14p样结构域,可与磷脂酰肌醇-3-磷酸互作,随后的9个重复结构可与亨廷顿关联蛋白1、肽基甘氨酸α酰胺化单加氧酶、ADP核糖基化因子6、精神分裂症破坏蛋白1、诱导型一氧化氮合酶等蛋白结合。GEF1域(DH-PH结构域)通过脑源性神经营养因子参与树突棘形态调节。Kal-7独有的C端PDZ相互作用段可与多种PDZ结构域蛋白互作,调节膜蛋白和细胞骨架肌动蛋白的信号转导。同时Kal-7可通过神经递质和神经营养因子共同维持大脑兴奋性与抑制性突触传递之间的平衡,在神经元突触调节、树突棘可塑性和认知行为变化以及神经营养和保护中发挥重要介导作用。(2)神经退行性疾病是指因神经元和(或)其髓鞘丧失累积所致的功能障碍,如阿尔茨海默病、帕金森病、抑郁症、亨廷顿病和精神分裂症等,属于老年性疾病,其发病率逐年增高,严重危害人类健康和生活质量,其发病原因未完全阐明。近年来发现中枢氧化应激、炎症等引起的树突、树突棘及其突触可塑性损害,是神经退行性疾病发生发展的核心环节。在阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)中Kal-7通过多巴胺(Dopamine,DA)系统或通过兴奋性神经递质谷氨酸系统间接影响DA的Tofacitinib作用释放关联精神分裂症,且通过拮抗5-羟色胺(5-Hydroxytryptamine,5-TH)受体维持突触兴奋与抑制的动态平衡,发挥抗抑郁作用。Kal-7水平升高可减少AD中Aβ肽聚集而成的斑块的过度积累,恢复成熟培养的亨廷顿病(Huntington’s disease,HD)皮质神经元中谷氨酸能突触的数量,改善AD和HD的发生发展。此外Kal-7表达变化也与癫痫发生发展有关,但Kal-7与癫痫的具体因果关系尚缺乏进一步报道。以上研究均表明,Kal-7功能的丧失与神经退行性疾病的密切相关,这很可能是Kal-7特定的突变,修饰和翻译过程错误而导致的。(3)运动是改善抑郁症等神经退行性疾病广泛应用的非药物处方。有研究发现,运动可缓解慢性不可预测应激模型(Chronic unpredictable mild stress,CUMS)大鼠抑郁样行为。大鼠自主轮转运动可调节生长激素的表达水平,诱导海马神经发生、神经元活化和增加海马CA3区树突棘密度,运动促进PSD-95与其下游Kal-7和Rac家族小GTP酶1 (Rac family small GTPase 1,Rac1)信号通路结合,参与应激后的神经元突触重塑,运动介导了Kal-7参与的有益神经可塑性。抑郁症患者脑脊液中5-TH及其代谢产物5-羟吲哚乙酸显著减少,Kal-7是调节树突棘结构与功能的关键因子,而运动可提高大鼠脑内5-TH水平,增加Kal-7蛋白表达,影响与之联系的BNT分泌与传递,改善BNT紊乱等引起的精神类疾病。合理的运动锻炼可增加Kal-7表达,通过改善突触微环境,抑制神经炎症发展,发挥神经保护作用。神经营养因子支持神经可塑性,促进神经元生长、分化和存活。因此,运动改善认知与各类神经营养因子关系密切,运动通过升高相关神经营养因子水平可预防神经退行性疾病。研究结论:不同类型的神经退行性疾病均伴随突触功能障碍、神经可塑性变化、BNT分泌和兴奋与抑制失衡、神经细胞缺乏营养支持等病理过程,其中Kal-7扮演着重要角色。运动作为改善神经退行性疾病的防控手段,与其他药物治疗相比early antibiotics,经济实惠、方便简单、灵活个性化。运动不仅可以改善心血管等慢性疾病,还可促进中枢kal-7表达改善神经突触可塑性和脑部疾病导致的学习记忆退化,改善神经退行性疾病。运动训练可作为针对神经Regorafenib退行性疾病防治和康复的有效手段,其应用可适当减少患者的药物使用和经济负担。

【目的】收集并对比系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)妊娠患者与健康妊娠孕妇的妊娠结局,分析SLE合并妊娠患者的临床特征、实验室检查结果及药物使用情况,研究妊娠期间SLE活动的特点及对妊娠结局的影响,找出影响SLE患者发生不良妊娠结局的危险因素,以便加强对SLE患者孕期的指导及管理,改善其妊娠结局。【方法】收集昆明医科大学第二附属医院2013年至2022年确诊为妊娠合并SLE并在我院生产的患者的临床资料,并通过电话随访上述患者的子代新生儿狼疮(Neonatal lupus,NL)及先天性心脏传导阻滞(Congenital heart block,CHB)的情况,同时在我院随机选取200例同期的非SLE孕妇作为对照组进行回顾性分析,比较SLE合并妊娠患者与健康妊娠孕妇的妊娠结局,分析SLE妊娠患者的临床特点及不良妊娠结局的危险因素。采用t检验、U检验、卡方检验或Fisher确切概率法进行统计学分析,使用多因素二元Logistic逐步回归分析确定SLE妊娠患者不良妊娠结局的危险因素,P<0.05表示差异有统计学意义。【结果】1.本研究共纳入341例孕妇妊娠情况,其中SLE合并妊娠患者141例,健康妊娠孕产妇200例。经对比分析发现,SLE患者在住院天数、剖宫产率方面明显高于健康孕产妇,而终止妊娠孕周明显小于健康孕产妇。此外,SLE患者不良妊娠结局包括妊娠合并子痫前期(PreeclampHereditary cancersia,PE)、妊娠丢失、妊娠合并高血压、妊娠期血小板减少、白细胞减少、妊娠期贫血、淋巴细胞减少、妊娠合并低蛋白血症、妊娠期间24小时尿蛋白>0.5g、胎儿脐动脉血流比值升高、羊水过少、胎儿生长受限(Fetal growth restriction,FGR)、早selleck激酶抑制剂产、胎儿低出生体重及新生儿窒息等方面均存在差异。2.SLE妊娠病例中,SLE病情活动组有40例(28.37%),病情稳定组有101例(71.6EPZ-6438化学结构3%)。13例为妊娠期初发SLE,有不良妊娠史者84人。有24例(17.02%)妊娠丢失,成功分娩117例中顺产36例(30.77%),剖宫产81例(69.23%),早产38例(32.48%),低出生体重儿56例(48.74%),PE 19例(13.48%)。SLE活动组住院天数明显长于SLE稳定组,终止妊娠孕周亦小于SLE稳定组。SLE活动组在妊娠期间发生血小板减少、PE、妊娠丢失、新发狼疮肾炎(Lupus nephritis,LN)、低蛋白血症的风险明显高于SLE稳定组。3.绝大多数SLE患者在妊娠期间均会服用激素、羟氯喹或免疫抑制剂控制病情,其中SLE活动组与SLE稳定组在服用激素>15mg/d,羟氯喹及阿司匹林3方面有统计学差异,服用激素>15mg/d的患者人数SLE活动组明显多于SLE稳定组,SLE稳定组孕期口服羟氯喹比例高于SLE活动组。而本研究中5例患者妊娠期间自行停药,最终3例患者出现妊娠丢失,2例妊娠期间病情活动。4.利用多因素Logistic逐步回归模型分析妊娠期发生先兆子痫、妊娠丢失、早产及低出生体重儿的危险因素。其中低出生体重儿的独立危险因素是妊娠期间发生PE(OR=7.569,95%CI:1.532-37.408,P=0.013);妊娠丢失的独立危险因素是患者来自农村(OR=3.944,95%CI:1.306-11.915,P=0.015)、抗ds DNA抗体阳性(OR=4.352,95%CI:1.313-14.417,P=0.016)、抗心磷脂抗体阳性(OR=3.434,95%CI:1.277-9.235,P=0.015);早产的独立危险因素是既往LN(OR=35.064,95%CI:4.149-296.333,P=0.001)、流产次数≥2次(OR=3.352,95%CI:1.312-8.561,P=0.011);PE的独立危险因素包括SLE活动(OR=34.241,95%CI:6.040-194.108,P<0.001)、狼疮抗凝物阳性(OR=6.707,95%CI:1.420-31.689,P=0.016)。【结论】1.SLE合并妊娠患者发生不良妊娠结局的风险较健康孕产妇明显升高。2.SLE患者妊娠期间出现病情活动时发生不良妊娠结局的风险将进一步升高,部分患者为妊娠期间初发SLE,需提高医生的识别能力。3.SLE患者妊娠丢失的独立危险因素是患者来自农村、抗心磷脂抗体阳性及抗ds DNA抗体阳性;PE的独立危险因素包括狼疮抗凝物阳性及妊娠期间SLE病情活动;早产的危险因素是既往LN及流产次数≥2次,低出生体重儿的危险因素是妊娠合并PE。4.妊娠合并SLE是高危妊娠,需要风湿科医师和产科医师共同进行妊娠监督,在此过程中患者的依从性也至关重要。

目的：观察丹参注射液联合阿司匹林肠溶片、替格瑞洛片治疗急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）经皮冠状动脉介入术（PCI）后患者的效果。方法：选取2022年10月至2023年4月该院收治的80例STEMI PCINSC 119875 MW术后患者进行前瞻性研究，按照随机数字表法将其分为研究组与对照组各40例。对照组采用阿司匹林肠溶片联合替格瑞洛片治疗，研究组在对照组基础上加用丹参注射液治疗，比较两组临床疗效、心功能指标[左心室射血分数（LVEF）、左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室收缩末期内径（LVESD）]水平、血清C反应蛋白（CRP）水平、血清氨基末端脑钠肽前体（NT-proBNP）水平和肾功能指标[血肌酐、血清Immune defense胱抑素C、肾小球滤过率]水平。结果：研究组治疗总有效率为92.50%，明显高于对照组的72.50%，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后，研究组LVEF水平和肾小球滤过率高于对照组，LVEDD、LVESD、CRP、NT-proBNP、血肌酐、血清胱抑素C水平低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：丹参注射液联合阿司匹林肠溶片、替格瑞洛片治疗STEMI PCI术后患者Cobimetinib小鼠可提高治疗总有效率，改善心功能指标和肾功能指标水平，降低血清CRP、NT-proBNP水平，效果优于阿司匹林肠溶片联合替格瑞洛片治疗。

背景:放射治疗是肿瘤治疗的基石之一。在肿瘤的全程管理中,约50%-70%的恶性肿瘤患者需要放射治疗的介入,其中接近一半的患者以根治性放疗为目的。放射治疗主要通过电离辐射(Ionizing radiation,IR)的形式诱导肿瘤细胞DNA损伤进而发挥抗肿瘤效应。IR介导的DNA损伤可分为直接损伤和间接损伤。直接损伤即射线通过光子直接攻击DNA分子导致的DNA损伤,约占放疗介导的总体DNA损伤的20%-Ipatasertib生产商30%;间接损伤即IR首先作用于细胞内水分子使其发生电离作用并形成一系列氧自由基,后者继而作用于DNA分子导致的氧化性DNA损伤,约占放疗介导的总体DNA损伤的70%-80%。因此,放疗介导的DNA损伤大部分是氧化性损伤。氧化性损伤的特征是包含一系列不同类型的DNA损伤形式。根据不同损伤之间的距离,大致可将氧化性损伤分为孤立型损伤和成簇型损伤。孤立型损伤主要包括单个的异常碱基损伤、无碱基位点(又称为AP位点)以及单链断裂(Single strand break,SSB)等。由于互补的DNA链上存在完整的模版,因此孤立型损伤可以被相对应的修复模式精准修复,不会对基因组的完整性造成威胁。与之相反,成簇型损伤又被称为复杂型损伤,由不同类型且距离较近(通常定义为10bp以内)的孤立型损伤构成。由于损伤组成形式复杂,细胞内缺乏与之对应的修复模式,目前机体对成簇型损伤的修复机制仍不清楚。深入研究成簇型损伤的修复机制,有助于为设计新的治疗策略和增加肿瘤细胞对放疗的敏感性提供新的思路。在IR介导的各种DNA损伤形式中,AP位点这种损伤形式尤其值得关注。其一,IR可以直接攻击DNA分子产生AP位点;其二,IR可通过氧自由基作用于DNA分子造成异常碱基修饰,后者经过DNA糖基化酶处理后亦可以形成AP位点。因此,AP位点是IR作用后DNA损伤的重要组成部分。碱基切除修复(Base excision repair,BER)通路是修复孤立AP位点的主要通路。脱嘌呤/脱嘧啶脱氧核糖核酸内切酶1(Apurinic/apyrimidinic endo-deoxyribonuclease 1,APE1)是该通路中启动AP位点修复的关键限速酶。APE1通过识别孤立AP位点并在其DNA骨架的5’端进行切割,产生一个SSB的中间产物,进而促进BER通路下游信号分子的招募,完成对该孤立型损伤的修复。本课题组长期致力于研究DNA损伤修复对多个肿瘤生物学行为的影响及其相关分子机制,特别对APE1在肿瘤发生发展以及耐药中的作用进行了广泛的探索。APE1是高等真核生物细胞中发挥核酸内切酶活性的主要分子,其行使胞内约95%的核酸内切酶活性,在维持基因组的稳定性等方面发挥着不可或缺的作用。既往我们通过分子病理实验证明了APE1在多种肿瘤组织中高表达,并与肿瘤的恶性程度相关。同时,国内外同行的研究亦表明APE1表达升高与肿瘤细胞对治疗的抵抗相关。因此,APE1被认为是一种极具前景的抗肿瘤分子靶点。目前,针对孤立AP位点的修复已经比较清楚。然而,APE1是否参与伴有AP位点的成簇型损伤的修复以及相关的修复机制目前仍不清楚。理论上,如果成簇型损伤中两个相邻损伤病灶包含AP位点,且二者位于相对DNA链上时,APE1能够识别并切割这两个邻近病灶中的AP位点,并诱导一个DNA双链断裂(Double strand break,DSB)的中间产物生成。DSB是细胞内最致命的DNA损伤类型,是决定肿瘤细胞对放射治疗敏感性的关键因素。因此,如果APE1可将成簇型损伤转化为DSB,那么APE1活性增高应该可以增加肿瘤细胞对放射治疗的敏感性。然而,既往多项研究显示,APE1参与促进放射治疗的抵抗,与该假设相悖。综上所述,IR作用后,APE1在修复成簇型损伤中还存在不确定的、未被揭示的复杂功能。本研究旨在探索IR等氧化性损伤作用后,APE1是否会通过对成簇型损伤中AP位点的处理参与DSB的形成和修复以及相关分子机制,以期为克服肿瘤对放射治疗的抵抗提供新的思路。方法:1.APE1促进IR作用后早期时相DSB的形成:使用慢病毒介导的sh RNA在人宫颈癌细胞系(He La和Si Ha)中建立APE1敲低阴性对照(APE1 Negative control,APE1NC)细胞株和APE1敲低(APE1 Knock down,APE1 KD)细胞株。利用时间梯度和剂量梯度的免疫印迹实验检测IR作用后0-8小时内,APE1对DSB分子标记物—γH2AX激活的影响。利用彗星实验测量IR作用后1小时APE1对SSB和DSB产量的影响。通过APE1的小分子抑制剂预处理细胞,使用免疫印迹实验检测APE1的核酸内切酶活性和氧化还原调节活性对IR作用后1小时γH2AX激活的影响。2.APE1介导的早期时相DSB经历了有效的修复:利用克隆形成实验检测IR作用后APE1对细胞生存的影响。利用微核形成实验评估APE1在IR作用后对基因组不稳定性的影响。利用大跨度时间梯度的免疫印迹实验检测IR作用后APE1对γH2AX激活的影响,以评估APE1介导的早期时相DSB的修复进程。使用叔丁基过氧化氢(Tert-butyl hydroperoxide,TBHP)模拟IR介导的氧化性损伤,通过时间梯度的免疫荧光Integrated Chinese and western medicine和彗星实验检测APE1在TBHP作用后对DSB形成和修复的影响。3.APE1通过激活非同源末端连接(Non-homologous end-joining,NHEJ)通路促进早期时相DSB的修复:在IR和TBHP作用后,利用免疫印迹和免疫共沉淀实验检测APE1对DNA损伤反应(DNA damage response,DDR)通路关键激酶DNA-PK_(cs)和ATM激活的影响。通过免疫荧光检测53BP1核焦点的动态变化和染色质成分分离实验检测NHEJ通路关键蛋白在染色质上的募集差异,评估APE1在氧化性损伤后对NHEJ通路激活的影响。4.APE1通过维持NHEJ通路中Artemis蛋白的稳定性促进宫颈癌细胞对氧化性损伤的抵抗:通过q RT-PCR实验检测APE1对Artemis m RNA表达水平的影响。利用免疫印迹实验检测APE1对Artemis蛋白表达和稳定性的影响。通过免疫共沉淀检测APE1对Artemis泛素化的影响。使用免疫组化评估宫颈癌临床样本中APE1和Artemis蛋白表达的相关性,以及二者与宫颈癌根治性放化疗后疗效的关系。5.联合抑制APE1和DDR激酶的活性可在氧化性损伤后发挥协同增敏作用:通过体外细胞实验和体内移植瘤模型分析在获悉更多IR等氧化性损伤作用后,联合抑制APE1和DDR关键激酶ATM的活性,对宫颈癌细胞凋亡和移植瘤生长的影响。结果1.APE1促进IR作用后早期时相DSB的形成:在IR作用后早期时相(约1小时内),相比于APE1 KD细胞,APE1 NC细胞内γH2AX的激活水平和DSB的产量明显较高。抑制APE1的氧化还原活性不影响γH2AX的激活水平,抑制APE1的核酸内切酶活性可以显著降低γH2AX的激活水平。2.APE1介导的早期时相DSB经历了有效的修复:克隆形成实验结果显示APE1促进了宫颈癌细胞对IR的抵抗。微核形成实验结果显示IR作用后,上述APE1介导的早期时相DSB在修复96小时后并未转化为更多的微核。DSB修复进程分析显示,与IR和TBHP作用后1小时相比,APE1 NC细胞内DSB水平在IR和TBHP作用后24小时显著降低,而APE1 KD细胞内DSB水平在IR和TBHP作用后24小时显著升高。以上结果说明APE1介导的早期时相DSB经历了有效的修复。3.APE1通过激活NHEJ通路促进DSB的修复:在IR和TBHP作用后,APE1显著促进了NHEJ通路关键激酶DNA-PK_(cs)的激活。APE1显著促进了NHEJ通路核心分子Ku70、Ku80、DNA-PK_(cs)、Artemis、DNA Ligase 4向染色质的募集。APE1显著促进了53BP1核焦点在DSB损伤位点的形成。4.APE1通过维持NHEJ通路中Artemis蛋白的稳定性促进宫颈癌细胞对氧化性损伤的抵抗:在APE1敲低的宫颈癌细胞和基因鼠中,Artemis的蛋白表达水平显著降低,但m RNA水平不受影响。敲低APE1导致Artemis泛素化水平升高,抑制蛋白酶体活性可以明显恢复Artemis蛋白在APE1 KD细胞中的表达。同时APE1和Artemis的蛋白表达在宫颈癌患者的临床样本中具有强烈的正相关性(相关系数=0.747,P<0.01)。Artemis的蛋白表达水平与行根治性放化疗宫颈癌患者的疗效相关,Artemis高表达和低表达患者的中位生存时间是47个月对比24个月(P=0.002)。在APE1 KD细胞中回补Artemis可以部分挽救敲低APE1对氧化性损伤的敏感性。5.联合抑制APE1和DDR激酶的活性可在氧化性损伤后发挥协同增敏作用:体内细胞实验和体外移植瘤实验显示在氧化性损伤作用下,联合抑制APE1和ATM活性可显著增加细胞的凋亡水平和抑制移植瘤的生长。结论1.APE1通过其核酸内切酶活性及时促进成簇型损伤向DSB转化的过程,是为NHEJ通路提供可识别的DSB末端的关键步骤,后者进而激活NHEJ修复通路,导致肿瘤细胞对IR的抵抗。2.APE1通过维持Artemis蛋白的稳定性促进NHEJ通路对DSB的修复。3.敲低APE1导致大量复制相关的晚期时相DSB的累积,联合抑制APE1和DDR关键激酶ATM可在IR等氧化性损伤作用下发挥协同增敏作用。

目的：探讨姜黄素对长期高盐诱导的高血压大鼠下丘脑室旁核的影响，并探讨其作用机制。方法：选取健康雄性Dahl大鼠60只，体质量（180±10）g，随机分为4组，每组15只AZD9291作用，分别为正常饮食对照组（含0.3%NaCl）、正常饮食给药组（0.3%NaCl+姜黄素150 mg·kg~(-1)·d~(-1)）、高血压组（含8%NaCl）以及高血压治疗组（8%NaCl+姜黄素150 mg·kg~(-1)·d~(-1)）。采用无创大鼠尾动脉监测系统测量每组大鼠血压变化。经姜黄素连续灌胃6周后，采用戊巴比妥钠麻醉大鼠，然后处死大鼠提取下丘脑室旁核组织和血浆，采用RT-PCR、ELISA、免疫荧光检测下丘脑室旁核中NAD(P)H氧化酶亚基NOX2、NOX4、过氧化物歧化酶（SOD-1）、Toll样受体（toll-like receptor,TLR4）、髓样分化因子（myeloid differentiation factor 88,MyD88）、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、MCP-1及IL-10指标的RNA及细胞水平，采用DHE法检测下丘脑室旁核活性氧NSC 127716价格簇的变化。结果：高盐饮食组大鼠经过6周姜黄素干预后平均动脉血压明显降低[6周时：（125+7）mmHg比（153+6）mmHg,P<0.05]；长期高盐饮食组大鼠经姜黄素干预后NOX2、NOX4、TLR4、MyD88、INon-cross-linked biological meshL-6、IL-1β、MCP-1及ROS水平明显较高盐饮食组降低（P<0.05），而SOD-1和IL-10表达明显较高盐饮食组升高（P<0.05）。结论：姜黄素能够改善长期高盐诱导的高血压大鼠血压，其机制可能与改善下丘脑室旁核中氧化应激和炎症细胞因子有关。