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【摘要】目的探selleck抑制剂讨转化生长因子β_(2)（TGF-β_(2)）高表达对小梁网细胞上皮-间质转化（EMT）的影响及作用机制。方法 取小梁网细胞系分为对照组和TGF-β_(2)诱导组，分别用DMEM培养液和含Radiation oncology不同浓度TGF-β_(2)的DMEM培养液培养，RT-qPCR和Westernblot检测EMT相关指标(a-SMA、VIM、snail)以及TGF-β/Smad信号通Nirogacestat路相关因Smad3、P-Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达水平；划痕实验检测TGF-β_(2)诱导后HTM细胞迁移能力。结果 经TGF-β_(2)诱导后，上皮细胞标志物E-cadherinmRNA和蛋白表达水平明显降低，间质细胞标志物(a-SMA、VIM、snail)mRNA和蛋白表达水平明显升高 (P<0.01)。经TGF-β_(2)诱导后，TGF-β/Smad信号通路相关因子P-Smad3蛋白表达水平显著升高，Smad7的mRNA显著升高，但Smad7蛋白表达水平无显著变化。划痕实验检测结果显示，TGF-β_(2)诱导后HTM细胞迁移能力显著增强。结论TGF-β_(2)可诱导HTM细胞系发生EMT改变，增强细胞迁移能力，其机制可能与激活TGF-β/Smad信号通路有关。

目的 探讨脑小血管病(cerebral small vessel diseases, CSVD)总体负担与复发性缺血性卒中的关系。方法 收集2019年6月-2020年12月期间住院PF-03084014溶解度的临床资料完整的704例急性缺血性卒中患者，对其行CSVD总体负担评分。随访90 d、1年，根据有无卒中复发分为复发组和未复发组，比较两组患者临床资料及影像学资料之间的差异，通过Logistic回归分析复发缺血性卒中的危险因素，通过计算受试者工作特征(ROC)曲线下面积来探索CSVD总体负担对卒中复发的预测价值。结果 随访90 d时，复发组25例(3.55%),未复发组679例(96.45%),两组在年龄、规律服用抗血小板药物情况、脑动脉狭窄、CSVD总体负担、WMH、CMB、腔隙方面均有统计学差异，Logistic回归分析示脑动脉狭窄、CSVD总体负担是卒中复发独立危险因素，规律服用抗血小板药物是其保护因素；随访1年时，复发组100例(14.20%),未复发组604例(85.80%),两组在年龄、高血Integrated Chinese and western medicine压、糖尿病、空腹血糖、服用抗血小板药物情况、服用调脂药物、脑动脉狭窄、CSVD总体负担、WMH、CMB、腔隙方面均有统计学差异，Logistic回归分析显示高血压、糖尿病、脑动脉狭窄、CSVD总体负担、WMH、CMB是卒中复发的独立危险因素，规律服用抗血小板药物是其独立保护因素；ROC曲线结果示：随访90 d AUC=0.823;随访1年，AUC=0.746,CSVD总体负担对90 d、1年卒中复发具有一定的预测价值。结论 CSVD总体负担与复发缺血性卒中存在相关性，CSVD总体负担是复发性缺血性卒中的独立危险因素，可作为未来缺血性卒中复发的预确认细节测指标。

胰腺癌是一种死亡率极高的恶性肿瘤。因其早期诊断困难、侵袭性强、远处转移等特点,患者5年生存率不足10%。当前,临床以盐酸吉西他滨为主的单药或联合化疗方案的疗效不佳,并且新癌症疗法如免疫检查点抑制剂疗法、基因疗法等对胰腺癌基本无效。因此,当下急需探索治疗胰腺癌的新策略新方法。铁死亡是一种不同于细胞凋亡rapid biomarker、焦亡、坏死的细胞死亡形式,能对KRAS突变的胰腺癌细胞产生显著的抑制作用。铁死亡能逆转胰腺癌对传统凋亡类化疗药的耐药性,其与传统化疗联合可以产生显著的协同抑制效果。因此,基于铁死亡-化疗的联合治疗策略为传统疗法治疗不佳的胰腺癌提供一种全新的治疗思路。脂质-介孔二氧化硅纳米粒(lipid-coated mesoporous silica nanoparticle,Lip-MSN)是一种将脂质膜包裹到介孔二氧化硅表面形成的纳米粒。作为联合药物递送载体,Lip-MSN不仅具有介孔二氧化硅与脂质体的优点,还克服了两者的缺点。其内核介孔二氧化硅可以作为内部装载区容纳药物分子,并为整体结构提供支撑骨架来稳定外层的脂质膜;外层的脂质膜可以充当脂溶性药物的装载区,并通过包覆在介孔二氧化硅表面实现内部装载药物的可控释放,提高介孔二氧化硅的生物相容性与胶体稳定性,并且更容易进行靶向分子或刺激响应型材料的功能修饰。RGD肽能特异性结合在整合素αvβ3和αvβ5受体上,而胰腺肿瘤细胞表面(如PANC-1细胞等)以及肿瘤基质中过度表达的纤维蛋白原,纤溶酶原,层粘连蛋白等均含有整合素αvβ3和αvβ5受体。因此,RGD肽可作为靶向胰腺癌的重要配体。本课题设计了一种RGD肽修饰的p H响应型脂质-介孔二氧化硅纳米递送系统来同时包载递送铁死亡诱导剂Erastin(Era)与化疗药盐酸吉西他滨(gemcitabine hydrochloride,hcGEM),以期增强协同抗肿瘤效果,减少药物给药剂量并且降低药物的系统毒性。该递送系统不仅能通过表面修饰的RGD肽主动将药物靶向递送至整合素受体高表达的胰腺肿瘤组织,还能在肿瘤酸性微环境内实现协同治疗药物的p H敏感释放,在降低毒副作用的同时提高药物对胰腺癌细胞的杀伤作用。首先,利用CCK8法考察了不同铁死亡诱导剂联合hcGEM对胰腺癌细胞的协同抑制效果,发现三种铁死亡诱导剂均能不同程度地协同抑制PANC-1细胞以及耐hcGEM的PANC-1细胞(PANC-1/hcGEM)。其中,hcGEM-Era 4:1组能在所有浓度下协同抑制PANC-1细胞与PANC-1/hcGEM细胞,故后续以hcGEM与Era为主药进行处方研究。其次,通过高效液相色谱法建立了hcGEM与Era的含量测定方法。结果显示,hcGEM的浓度在2～250μg/m L内,峰面积与浓度呈线性相关(R~2=1),线性回归方程为A=0.4572 C+0.3902;Era的浓度在2～250μg/m L内,峰面积与浓度呈线性相关(R~2=0.9999),线性回归方程为A=0.3352 C+0.0969。经考察验证,两种药物含量测定方法的专属性、标准曲线、精密度以及提取回收率均符合测定要求,可用于hcGEM与Era两种药物的含量测定及体外释放含量测定,为后续处方研究奠定了良好的实验基础。再次,采用溶胶-凝胶法制备了介孔二氧化硅纳米粒(mesoporous silica nanoparticle,MSN),并通过单因素分析法以MSN粒径作为指标进行了合成工艺的优化,确定了制备的最佳反应条件,即CTAB与TEOS摩尔比为1:5,搅拌速度为600 rpm,反应温度为80°C,反应时间为2 h以及滴加速度为1 m L/min。采用最佳反应条件合成的MSN平均粒径为116.47±0.91 nm,PDI为0.24±0.01。扫描电镜与透射电镜显示,单个MSN粒径为50 nm,形貌呈球形,分散性良好,介孔孔道有序。氮气吸附脱附实验结果提示,该MSN比表面积为745.799 m~2/g,孔容积为0.978cm~3/g,平均孔径为5.687 nm。在此基础上,采用两种薄膜水化法制备了共载hcGEM与Era的RGD修饰的p H敏selleck激酶抑制剂感脂质介孔二氧化硅(hcGEM/Era RGD-Lip-MSN),并通过改变MSN与脂质的投量比以及Era的投入量筛选出以hcGEM与Era最佳协同抑制摩尔比4:1载药的处方。在该处方下,hcGEM/Era RGD-Lip-MSN的平均粒径为140.57±2.93 nm,PDI为0.22±0.13,Zeta电位为-58.80±0.65 m V;hcGEM的包封率与载药量分别为37.45%与11.05%;Era的包封率与载药量分别为78.96%与4.89%,hcGEM与Era摩尔比为4.13:1。透射电镜显示,hcGEM/Era RGD-Lip-MSN的粒径在70 nm左右,表面覆有脂质膜。体外释放研究结果显示,hcGEM/Era RGD-Lip-MSN在中性释放条件下释放缓慢,在48 h时hcGEM与Era累计释放率分别为30.23%与44.71%;在酸性释放环境下释放初期表现出“突释”效应,在48 h时hcGEM与Era累计释放率分别为86.46%与79.24%,总体释放特性表现出p H响应释放特性,并基本按照hcGEM与Era摩尔比4:1释放。制备的hcGEM/Era RGD-Lip-MSN能包载最佳协同抑制摩尔比4:1的两种药物,体外释放特性满足预期要求,为后续的体内外实验研究奠定了基础。体外实验中,首先采用CCK8法进行了细胞毒性实验。结果显示,空白RGD-Lip-Galunisertib MWMSN对PANC-1细胞几乎无毒性;hcGEM/Era RGD-Lip-MSN处理组,hcGEM RGD-Lip-MSN处理组,hcGEM+Era处理组以及hcGEM处理组的IC_(50)分别为0.4302,1.635,0.3159以及1.327μmol/L。hcGEM/Era RGD-Lip-MSN处理组对PANC-1细胞的抑制效果显著强于hcGEM RGD-Lip-MSN处理组或hcGEM处理组(P<0.05),而与hcGEM+Era处理组相比,两者的细胞抑制率接近。细胞划痕实验结果表明,hcGEM/Era RGD-Lip-MSN处理组对PANC-1细胞的迁移抑制作用显著强于hcGEM处理组或Era处理组(P<0.01),但与hcGEM+Era处理组相比无显著差异(P>0.05)。采用试剂盒对不同药物处理组细胞内的ROS,MDA以及GSH含量进行了检测。结果显示,与hcGEM/Era Lip-MSN处理组相比,hcGEM/Era RGD-Lip-MSN可以显著提高胞内ROS与MDA含量,降低胞内GSH含量(P<0.05)。此外,与DMSO处理组相比,hcGEM能显著提高胞内ROS与MDA含量,降低胞内GSH含量(P<0.05)。Western blot结果显示,与hcGEM/Era Lip-MSN处理组相比,hcGEM/Era RGD-Lip-MSN处理组的胞内GPX4、xCT蛋白含量显著降低(P<0.05)。通过共聚焦显微镜检测了不同处理组细胞对荧光物质的摄取,发现共载水溶性荧光染料罗丹明B与脂溶性荧光染料香豆素6的RGD修饰的脂质介孔二氧化硅纳米粒(Rh B/C6 RGD-Lip-MSN)处理组细胞内的红色荧光强度最强,而绿色荧光强度与游离组相当,说明Rh B/C6 RGD-Lip-MSN可以有效将两种荧光物质靶向递送入PANC-1细胞内。最后,通过流式细胞术检测了不同药物处理组细胞存活情况。结果显示,hcGEM/Era RGD-Lip-MSN处理组的细胞存活率显著低于hcGEM/Era RGD-Lip-MSN+铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)处理组(P<0.01),表明hcGEM/Era RGD-Lip-MSN对PANC-1细胞的增殖抑制作用部分来源于铁死亡,而这种效果可以被铁死亡抑制剂Fer-1抑制。hcGEM/Era RGD-Lip-MSN处理组的细胞存活率显著低于hcGEM/Era Lip-MSN处理组(P<0.05),说明hcGEM/Era RGD-Lip-MSN能更加有效地将hcGEM与Era递送入细胞来发挥更强的增殖抑制效果。体内药效学研究首先通过肿瘤组织块移植的方法建立了胰腺癌皮下移植瘤裸鼠模型,并通过分析裸鼠肿瘤体积大小,重量以及裸鼠体重变化等来评估不同药物制剂的体内抗肿瘤疗效与系统毒性。结果显示,hcGEM+Era给药组的肿瘤体积显著小于hcGEM给药组或Era给药组(P<0.05),说明hcGEM联合Era应用可以显著提高肿瘤抑制效果。hcGEM/Era RGD-Lip-MSN给药组的肿瘤体积显著小于hcGEM+Era给药组(P<0.05),并且hcGEM/Era RGD-Lip-MSN给药组的裸鼠体重逐渐增加而hcGEM+Era给药组的裸鼠体重下降明显(P<0.05),说明hcGEM/Era RGD-Lip-MSN共递送hcGEM与Era可以提高两药的肿瘤抑制效果,降低药物的毒副作用。hcGEM/Era RGD-Lip-MSN给药组的肿瘤体积始终略小于hcGEM/Era Lip-MSN给药组,说明hcGEM/Era RGD-Lip-MSN给药组的肿瘤抑制效果略优于hcGEM/Era Lip-MSN给药组。因此,hcGEM/Era RGD-Lip-MSN共递送hcGEM与Era可以在降低药物毒副作用的同时提高两药的肿瘤抑制效果。以上所有研究结果表明,本课题设计的hcGEM/Era RGD-Lip-MSN能同时包载递送铁死亡诱导剂Era与化疗药hcGEM,并通过联合不同的细胞死亡机制,RGD靶向递送以及p H敏感释放等设计在降低两药毒副作用的同时提高药物的肿瘤抑制效果,为基于铁死亡-化疗联合治疗策略的纳米递送系统研究提供数据参考。

光作为一种自然界常见的现象,对于生物和化学系统的调控有着重要影响。近年来,许多新型的光活性分子作为一种智能触发器被应用于生物医学应用中。光活性分子通过其独特的官能团结构吸收特定波长的光能,激活某些光化学反应,进而产生一系列的分子结构的改变,使其表现出特定的功GSK J4浓度能。相比于其他环境刺激(如p H,温度,离子强度),光照具有独特的优势,包括光源安全清洁,无需添加其它试剂,可以实现远程的时空操控。钌配合物分子是一种常见的光活性分子,其具有光脱笼的特性,该分子经常被应用在凝胶、药物释放和表面改性等方面。本文设计了一类新型的钌配合物两亲分子,该分子在光激活后会释放具有催化活性的小分子。利用这个特性,在人工细胞中设计构建了一种人工光受体介导的信号通路,该通路在合成细胞中具有光收集、光化学能量转换、信号传输和放大的功能整合,最终通过液-液相分离导致原细胞亚组化。设计的关键就是这种钌配合物两亲分子,它作为膜锚定感光体,将可见Biogenic resource光转化为化学信息,并通过扩散运动在脂质膜上传递信号。通过将受体介导的光导寻找更多与生物识别和酶级联反应耦合,发展了原细胞信号编码的布尔逻辑门。论文发展了一种模拟光受体细胞的最小细胞模型,该模型可以将光能转换为细胞内反应,并为复杂代谢和信号通路的信息流的模块化控制铺平了道路。此外,钌配合物分子具有一定的表面活性,具有光响应的表面活性和分子组装能力。利用这一特性,实现了光致破乳、光致液滴解体以及光致超分子纤维化等。

【目的】牛病毒性腹泻病毒（BVDV）是引起牛病毒性腹泻-黏膜病的关键病毒。BVDV的结构蛋白Erns可在病毒感染的初期削弱宿主的免疫防御，引发牛群炎症反应。核苷selleck BYL719酸寡聚化结构域样受体（NOD）热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）炎症小体是NOD样受体(NLRs)家族重要成员，调控炎症性疾病的发生发展，同时激活的NC59LRP3炎症小体能够引起宿主细胞焦亡，进而诱发级联放大的炎症反应。但BVDV Erns蛋白在BVDV感染诱发炎症反应的分子机制尚不清楚。【方法】为进一步探索Erns蛋白对BVDV感染激活NLRP3炎症小体诱发细胞焦亡的影响，构建了BVDV Erns蛋白的真核表达质粒pCMV-HA-Erns，过表达BVDV Erns蛋白，检测BVDV感染细胞中NLRP3炎症小体组分（半胱氨酸蛋白酶（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和NLRP3）、IL-1β的mRNA转录水平和蛋白表达水平，以及细胞死亡调节蛋白（GSDMD）的基因表达和蛋白剪切情况，并通过扫描电镜观察BT细胞膜成孔及BTmicrobial remediation细胞内容物释放情况，以分析Erns蛋白诱导BT细胞产生细胞焦亡。【结果】Erns蛋白能够显著引起NLRP3炎症小体活化进而激活Caspase-1，活化的Caspase-1一方面切割GSDMD，形成有活性的GSDMD-N端并在BT细胞膜形成孔洞，释放内容物，诱导BT细胞发生细胞焦亡，另一方面活化的Caspase-1切割pro-IL-1β，形成有活性的IL-1β，并释放到BT细胞外，引起BT细胞上清中IL-1β水平上升。【结论】系统解析了BVDV Erns蛋白激活NLRP3炎症小体介导细胞焦亡的产生，对疫苗及治疗药物的研制具有重要指导意义。

研究背景脓毒症是急诊科常见且高病死率的疾病,发病早期单核巨噬细胞活化并释放炎症因子,募集中性粒细胞形成胞外陷阱网捕获并杀死病原菌。炎症过激时免疫细胞大量死亡并释放损伤相关分子模式导致多脏器功能障碍,是脓毒症早期死亡的重要原因;大量免疫细胞死亡还引发持续免疫抑制,继发二次感染是中后期的主要死因。近年,细胞因子风暴的治疗措施降低了脓毒症早期病死率,但临床尚缺乏干预免疫细胞死亡的有效方法。第一部分 脓毒症早期临床特征和预后危险因素的分析研究目的建立脓毒症单病种数据库,分析不同预后组患者疾病早期临床特征的差异,筛选不良预后的独立危险因素,重点关注免疫细胞数量变化与患者预后的相关性,为疾病早期精准评估脓毒症病情和预后提供依据。研究方法获取伦理审批,制定受试者纳入和排除标准,采集入组患者临床数据,包括生理指标、感染部位、检验结果、疾病评分和90 d预后情况。采用Luminex和ELISA技术检测患者血浆内炎症因子、趋化因子、细胞凋亡和焦亡分子的含量。比较不同预后组患者疾病早期临床特征的差异,Logisitic和COX回归分析死亡的独立危险因素,最后借助受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC)评估临床指标的预测效能。研究结果(1)与存活FUT-175半抑制浓度组相比,脓毒症死亡患者疾病早期外周单核细胞计数和百分比均显著降低,SOFA 评分(Sequential Organ Failure Assessment)、入室心率、呼吸频率、血浆中乳酸、谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)的含量均显著升高。(2)Logisitic和COX回归分析均提示脓毒症早期单核细胞比例降低和血乳酸升高是不良预后的独立危险因素;ROC曲线提示单核细胞比例的预测效能较好。(3)脓毒症时血浆炎症因子(TNF-α)、趋化因子(CCL2)、凋亡分子(BAX)和焦亡分子(GSDMD)均升高,抗凋亡分子(BCL2)降低,死亡组变化均更显著。研究结论疾病早期外周单核细胞比例降低和乳酸水平升高是脓毒症患者死亡的独立危险因素,死亡组患者血浆内凋亡和焦亡分子含量较存活组和健康组均显著增高。第二部分PBMCs高通量测序揭示脓毒症早期免疫细胞主要死亡模式研究目的基于脓毒症早期患者外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC)高通量测序,分析不同类型免疫细胞主要死亡模式及其与预后的相关性。研究方法健康者、存活组和死亡组患者PBMCs进行转录组测序,筛选组间差异基因并进行功能富集,重点探究免疫细胞死亡信号通路的变化。qRT-PCR和Western blotting验证差异基因转录和翻译水平的表达情况;电镜观察不同预后组免疫细胞的形态和结构;流式细胞计数分析免疫细胞凋亡和坏死比例并比较组间差异。单细胞测序(sc-RNA seq)揭示脓毒症早期不同类型免疫细胞的主要死亡模式,重点关注参与固有免疫反应的单核细胞和中性粒细胞。研究结果(1)转录组测序提示脓毒症患者PBMCs较健康组的差异基因在细胞凋亡信号通路中富集,凋亡焦亡分子(BID和CASP4/5)上调,抑凋亡基因BCL2下调,死亡组变化更显著。(2)与存活组比较,死亡组患者免疫细胞凋亡和坏死比例显著增高;细胞核皱缩和异染色质边集征象明显;胞内凋亡分子(BAX和Caspase3)显著增多,抗凋亡分子BCL2减少。(3)单细胞测序显示脓毒症早期免疫细胞的差异基因在不同死亡信号通路中均有富集。中性粒细胞在坏死、坏死性凋亡和焦亡信号通路中最显著;单核细胞在凋亡、自噬和铁死亡中最显著。研究结论脓毒症早期外周免疫细胞内凋亡分子上调、凋亡信号通路显著激活、凋亡比例增高并呈现典型凋亡形态学变化,且死亡组更显著;单细胞测序揭示脓毒症时单核细胞内凋亡信号通路变化较显著。第三部分肝脏枯否细胞凋亡与脓毒症病情严重程度此网站的相关性研究目的通过细胞实验和动物实验,探索脓毒症时组织巨噬细胞(肝脏枯否细胞)的凋亡情况及其与病情严重程度的相关性。研究方法采用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS,200 ng/ml)处理小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞开展体外实验,分析脓毒症时巨噬细胞的凋亡情况。流式细胞计数分析细胞的凋亡率;透射电镜分析细胞形态和结构的变化;qRT-PCR和Western blotting检测不同处理组凋亡基因转录和翻译水平的变化。利用雄性C57BL/6小鼠构建脓毒症动物模型,分为假手术组和疾病组,疾病组(轻症和重症)进行盲肠结扎穿刺(Cecum Ligation and Puncture,CLP)。术后观察小鼠一般状态并进行疾病评分,24 h处死并采样。Luminex和ELISA检测小鼠血浆内炎性因子和凋亡分子含量;肝肺组织切片苏木精-伊红(HE)染色并进行病理评分;免疫荧光染色分析枯否细胞的凋亡率;qRT-PCR和Western blotting检测肝组织中凋亡分子的表达变化。研究结果(1)LPS处理后RAW264.7细胞的凋亡比例显著升高;胞核内异染色质边集,核周间隙增宽;胞内凋亡分子BAX和Caspase3显著上调,抗凋亡基因BCL2下调。(2)CLP术后小鼠毛发蓬松,活动减少,疾病评分显著增高;肝肺组织炎性浸润和细胞凋亡显著增多;肝组织细胞内凋亡基因(BAX和Caspase3)显著升高,抗凋亡基因BCL2降低。(3)与轻症组比较,重症组小鼠血浆炎症分子(TNF-α、IL-6)、凋亡分子(BAX)和肝酶(ALT和AST)含量均上调,且枯否细胞凋亡率显著增高。研究结论脓毒症时肝脏巨噬(枯否)细胞凋亡显著增多,且与病情严重程度相关。第四部分ADAR1抑制巨噬细胞过度凋亡改善脓毒症预后的调控机制研究目的基于测序结果和课题组前期双链RNA腺苷脱氨酶1(Adenosine deaminase RNA 1,ADAR1)研究基础,深入探讨巨噬细胞凋亡的调控机制,寻找新的干预靶点。研究方法软件预测结合位点并进行核糖核蛋白-免疫共沉淀(RNP-IP)实验,分析ADAR1与miRNA-122直接结合并进行Ato I编辑;双萤光素酶实验探究miRNA-122与BCL2A1的靶向关系。使用ADAR1腺病毒、ADAR1特异性小干扰RNA(si-ADAR1)转染RAW 264.7细胞,特异性过表达或敲除ADAR1;使用miRNA-122 mimic、miRNA-122 inhibitor转染细胞,过表达或抑制miRNA-122。流式细胞计数分析转染后细胞的凋亡比例;透射电镜观察不同处理组细胞形态和结构的变化;免疫荧光标记分析细胞内凋亡分子的表达量;qRT-PCR和Western blotting分别检测ADAR1、miRNA-122、BAX、BCL2A1a在转录和翻译水平的表达变化。最后,通过动物实验验证ADAR1/miRNA-122/BCL2A1调控巨噬细胞凋亡影响脓毒症小鼠预后的机制,治疗组(CLP+OE-ADAR1)小鼠CLP术后经尾静脉注射ADAR1腺病毒。研究结果(1)抑制ADAR1后,RAW264.7细胞内凋亡分子(BAX和Caspase3)上调,BCL2A1a下调,凋亡率显著增高,可见典型凋亡形态;过表达ADAR1呈相反变化。(2)RNP-IP证实ADAR1Streptococcal infection结合并编辑miRNA-122;双萤光素酶报告提示miRNA-122靶向调控BCL2A1,过表达miRNA-122,BCL2A1a显著降低,细胞凋亡率增高,抑制 miRNA-122 时 BCL2A1a 升高。(3)ADAR1 通过 miRNA-122/BCL2A1 通路,降低枯否细胞凋亡减轻肝脏损伤,提高CLP小鼠存活率。研究结论ADAR1可通过miRNA-122/BCL2A1通路抑制枯否细胞凋亡,减轻肝脏损伤,提高脓毒症存活率。综上,临床调查发现脓毒症早期单核细胞减少是不良预后的危险因素,高通量测序提示脓毒症时单核细胞凋亡增多,死亡组更显著。动物和细胞实验证实脓毒症早期巨噬(枯否)细胞凋亡增多,且与病情严重程度相关,并揭示ADAR1可通过miR-122/BCL2Al信号通路抑制枯否细胞过度凋亡,减轻肝损伤降低病死率。总之,本研究证实脓毒症早期单核巨噬细胞凋亡与预后相关,并找到新的干预靶点。

目的 探究不同预冷温度对采后甜樱桃果实生理品质的影响，找出最适宜的预冷温度，进而推动甜樱桃产业化发展。方法 本实验分别将采Hereditary PAH后甜樱桃分别预冷至15、12、9、6、3、0℃后回温至室温，以不进行预冷处理为对照组，比较6种处理方式果实预冷和回温过程中的温度变化，并分别测定回温前后果实的色差、呼吸强度及乙烯释放量、硬度、可溶性固形物（TSS）、风味、感官评价，总酚、类黄酮、花色苷、维生素C(Vc)、可溶性蛋白、Dinaciclib丙二醛（MDA）含量以及超氧阴离子产生速率（O_2~-）。结果不同预冷温度均可较好地保持果实外观及风味，能够降低甜樱桃果实呼吸强度与乙烯释放量，抑制果实TSS、MDA含量和O_2~-产生速率的上升，延缓甜樱桃果实硬度的下降，从而保持甜樱桃果实的外观品质，且有利于维持甜樱桃果实中的Vc、可溶性AG-221采购蛋白和花色苷含量，以0℃预冷效果最佳，感官评分最高。结论 预冷能够有效维持甜樱桃果实采后的品质，达到增加甜樱桃果实经济价值的作用。

随着市场对优质高档果品需求的增加,果实的外观质量愈来愈受到人们的关注,优质高档苹果倍受人们的青睐,MS-275 molecular weight果形作为苹果的重要外观性状很大程度上决定了其市场经济价值和果农的收益。为探究调控苹果果形指数的内在机制,本研究采集大量的‘紫红1号’和‘嘎拉’苹果杂交后代群体中长果和扁果,测定其发育期内长、扁果主要内源激素CTK、IAA和GA的含量。研究发现长、扁果中内源GA含量差异最大,且赤霉素的主要成分是GA_3。因此,以‘嘎拉’苹果为试材,于盛花期开始喷施50 mg·L~(-1)、250mg·L~(-1)、500 mg·L~(-1)不同浓度的赤霉素GA_3,通过测定果实发育期果形指数变化和成熟后果实硬度、果皮类黄酮、花青苷、可溶性糖、可滴定酸等指标的变化,探讨外源赤霉素GA_3在不降低果实综合品质的基础上提高果形指数的最佳浓度,并经实时荧光定量技术测定内源GA合成途径中关键酶的基因表达量,分析提高果形指数的内在原因,主要分析结果表明:1.喷施不同浓度的外源GA_3,促进了果肉细胞伸长,增大了果形指数,且T2处理各时期的果形指数最大,即250 mg·L~(-1)的处理效果最好;果实硬度T1>T2>CK>T3,果实花selleck HPLC青苷含量T2>T3>T1>CK,果实类黄酮含量T2>T3>T1>CK,果实可滴定酸含量T1>T3>T2>CK,果实可溶性糖含量T2>CK>T3>T1。综上所述,喷施250 mg·L~(-1)外源GA_3有利于提高果果形指数和果实综合品质。2.喷施不同浓度外源GA_3,可提高果实内源GA合成途径中关键酶CPS、KO、KAO和GA3ox的表达量。CPS作为内源GA在原生质体中合成的关键酶,其表达量T2>T3>CK>T1,T2处理与其他处理相比差异显著;KO、KAO是内源GA在内质网中合成的关键酶,KO的表达量T2>T3>CK>T1,KAO的表达量T1>T2>T3>CK,T2处理介于其他处理之间,但与CK相比差异显著;GA3ox是内源GA合成最后一步的关键酶,其表达量T2>T3>T1>CK,T2处理与CK相比差异极显著。综上所述,T2处理能显著提高果实内源GA合成酶基因的表达量,进而提adult medicine高‘嘎拉’苹果果形指数。

目的：探讨活血化瘀中药丹红注射液通过抑制铁死亡保护大鼠脑缺血损伤机制。方法：雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、丹红组（丹红注射液，0.72 mL/kg）、阳性药组（金纳多注射液，0.45 mL/kg）。通过大脑中动脉闭塞（MCAO）法制备脑缺血模型，术后24 h进行指标检测。神经功能评分检测神经功能；TTC法检测脑梗死率；苏木素-伊红染色和尼氏染色观察大脑皮层组织形态；生化检测组织铁（Fe）含量及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、超氧化物歧化酶（SOD）活性；oxalic acid biogenesisRselleckchem INCB28060T-qPCRLorlatinib抑制剂、Western Blot分别检测溶质载体家族7成员11(SLC7A11)抗体、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)、转铁蛋白受体（TFR1）抗体、转铁蛋白（TF）mRNA和蛋白表达量。结果：与模型组比较，丹红组脑梗死率和神经功能评分显著降低（P<0.01,P<0.05），病理学改变减轻，Fe含量显著下降（P<0.01）,GSH-PX、SOD活性显著增加（P<0.01）,SLC7A11、GPX4 mRNA和蛋白相对表达量显著增加（P<0.01,P<0.05）,TF、ACSL4 mRNA和蛋白及TFR1 mRNA相对表达量显著减少（P<0.01,P<0.05）。结论：活血化瘀中药可能通过抑制铁死亡抗脑缺血。

目的 探讨双硫仑/铜(DSF/Cu)诱导肝癌细胞铁死亡的作用机制。方法 采用DSF/Cu 0、0.5、1.0、1.5、2.0和4.0μmol/L处理人肝癌细胞株Huh7,CCK-8法检测细胞活力，激光共聚焦显微镜观察细胞内脂质过氧化物和谷胱甘肽(GSH)水平的变化，流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平，Western blot和实时荧光定量PCR检测铁死亡相关基因谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白和mRNA表达。结果 随着DSF/Cu浓度的升高，细胞活力逐渐降低(P<0.0commensal microbiota5)。与DSF/Cu 0μmol/L比较，DSF/Cu处理细胞后，脂质过氧化物积累，细胞内ROS水平升高。与DSF/Cu 0μmKD025浓度ol/L比较，DSF/Cu 2.0μmol/L能够下调细胞GPX4蛋白和mRNA的表达(P<0.05),降低细胞GSH水平(P<0.05)。铁死亡抑制剂去铁胺能够部分恢复DSF/Cu抑制的细胞活力(P<0.05)。结论 DSF/Cu可抑制肝癌DNA Methyltransferas抑制剂细胞活力，并通过抑制GPX4表达来诱导肝癌细胞发生铁死亡。