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目的本研究的目的是设计具有脊髓损伤(SCI)靶向功能的巨噬细胞膜仿生纳米脂质体(M-Lips),使其作为盐酸米诺环素(MH)和硫酸葡聚糖(DS)的药物载体,靶向递送药物跨越血脊髓屏障(BSCB)至损伤组织,发挥抗炎和神经保护作用治疗SCI,促进SCI后运动功能的恢复。方法从小鼠腹腔中提取原代巨噬细胞,使用免疫荧光和流式细胞术对原代巨噬细胞进行验证。通过梯度离心法从原代巨噬细胞中提取原代巨噬细胞膜,使用透射电镜(TEM)观察细胞膜。通过薄膜水化法一步制备了巨噬细胞膜仿生修饰的纳米载药脂质体(MH-DS@M-Lips)。通过TEM,激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)共定位分析,免疫蛋白印迹法,动态光散射(DLS),载药量(DL)测定,包封率(EE)测定,药物释放检测,稳定性检测对MH-DS@M-Lips进行表征。在体外实验中,通过噻唑蓝比色法(MTT)考察MH-DS@M-Lips的生物安全性。通过Transwell模型模拟BSCB验证MH-DS@M-Lips的跨BBAY 73-4506使用方法SCB能力,同时使用此模型研究BV2细胞对MH-DS@M-nanomedicinal productLips的摄取。建立LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型,通过免疫荧光和流式细胞术研究MH-DS@M-Lips的抗炎作用。建立过氧化氢(H_2O_2)诱导的VSselleck抑制剂C4.1细胞凋亡模型,通过免疫荧光和流式细胞术验证MH-DS@M-Lips的神经保护作用。在动物实验中,使用Allen’s打击法构建C57BL/6J小鼠的SCI模型,使用小动物多功能活体荧光成像和组织切片荧光验证MH-DS@M-Lips的SCI靶向能力。通过化学荧光标记,免疫荧光,试剂盒检测,免疫蛋白印迹法,验证MH-DS@M-Lips的降钙离子浓度作用,抗炎作用和神经保护作用,同时,通过免疫荧光,尼氏染色和运动学评价评估MH-DS@M-Lips治疗的SCI小鼠的运动功能恢复情况。结果免疫荧光和流式细胞术验证了原代巨噬细胞的成功提取,并且使用TEM观察到了提取的细胞膜囊泡。在TEM下观察,MH-DS@M-Lips为粒径在140 nm左右的单分散类球形纳米粒。CLSM共定位分析结果表明巨噬细胞膜成功掺入脂质体,免疫蛋白印迹法表明MH-DS@M-Lips继承了巨噬细胞膜的功能蛋白。载药量,包封率,以及药物释放的检测证明了MH-DS@M-Lips的成功制备和MH-DS@M-Lips的缓释作用。DLS表明MH-DS@M-Lips具有良好的稳定性。体外试验中,MH-DS@M-Lips高效的跨越了Transwell模型模拟的BSCB,并且可以被BV2细胞摄取。化学荧光标记,免疫荧光实验和流式细胞术结果显示MH-DS@M-Lips对LPS诱导的RAW264.7细胞有良好的炎症抑制作用,并且MH-DS@M-Lips可以显著性降低H_2O_2诱导的VSC4.1细胞中钙离子浓度的激增,同时降低了活性氧强度,实现神经保护作用。在小鼠体内实验中,小动物多功能活体荧光成像结果显示MH-DS@M-Lips可以跨越BSCB并富集在SCI组织中。免疫荧光,试剂盒检测,化学荧光标记和免疫蛋白印迹法显示,MH-DS@M-Lips有效的抑制了炎症的爆发,降低了损伤部位的钙离子激增,抑制损伤部位氧化应激,实现了神经保护作用。小鼠行为学评价,尼氏染色和免疫荧光结果显示MH-DS@M-Lips有效的促进了SCI小鼠的运动功能恢复。结论研究结果表明,使用薄膜水化法一步制备的MH-DS@M-Lips成功继承了巨噬细胞膜的功能蛋白并实现载药,可以跨越BSCB靶向递送MH和DS至SCI小鼠的损伤组织。到达损伤组织后,MH-DS@M-Lips原位减少了钙离子的激增,并且持续发挥了炎症抑制作用,最终起到神经保护的效果,实现了SCI小鼠的运动功能恢复。因此,MH-DS@M-Lips是一种潜在的治疗SCI的有效策略。

有机磷阻燃剂(organophosphorus flame retardants,OPFRs)正越来越多地被用于众多行业。然而,OPFRs与环境污染、动物健康风险有关,对多种产业特别是对养殖业有较大影响。2-乙基己基二苯基磷酸酯(2-ethylhexyl diphenyl phosphate,EHDPHP)是一种新兴的、被广泛应用的有机磷阻燃剂,既往研究已证实EHDPHP对鼠类Tumor immunology具有毒性作用,但并未深入研究其毒性损伤机制。目前,没有任何研究评估EHDPHP对禽类的毒性作用。因此,本试验以鸡肝脏作为EHDPHP毒性影响的靶器官,探讨EHDPHP暴露对鸡的毒性作用及其机制。本试验选用90只经预饲养的7日龄海兰白羽蛋鸡,用不同浓度EHDPHP进行灌胃处理,并在试验的第14天、28天和42天采取肝脏进行检测分析。通过鸡临床表现和体重变化检查EHDPHP对鸡生长发育的影响;通过鸡肝脏眼观变化、病理组织学和超微病理学变化观察EHDPHP对鸡肝组织造成的形态结构损伤;通过生化试剂盒检测鸡肝组织内AST、ALT的活性变化,判断更多EHDPHP对鸡肝功能造成的影响;通过检测鸡肝组织内SOD、GSH-Px的活性变化以及MDA的含量变化分析EHDPHP对鸡肝脏氧化应激指标的影响;通过电感耦合等离子体质谱法检测鸡肝组织中铁含量变化,并通过实时荧光定量PCR法和Western Blot法检测铁死亡相关因子(铁代MRTX849抑制剂谢相关因子FTH-1、TFR,铁死亡标志因子GPX4、ACSL4、LOX、COX-2)的表达变化;通过实时荧光定量PCR法、Western Blot法以及ELISA法检测炎症因子(NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α)的表达变化。结果发现,EHDPHP抑制了鸡的生长和发育。剖检、组织病理和超微病理的观察结果清楚地反映了EHDPHP暴露对肝脏造成的损害。具体表现在肝脏体积肿大、呈暗红色;光学显微镜下可见肝脏呈不同程度的淤血、肝窦狭窄、肝板紊乱,肝细胞呈空泡变性、坏死,炎性细胞浸润;透射电镜下可见暴露组鸡肝细胞线粒体萎缩、双分子层膜结构增厚,线粒体嵴减少,部分线粒体嵴消失。生化试剂盒检测结果显示肝组织AST和ALT的活性水平随着EHDPHP灌服剂量的增加而下降(P<0.05)。同时,EHDPHP暴露鸡肝组织中的氧化应激水平随着灌服剂量的增加而显著升高(P<0.05);肝组织的铁含量显著增加(P<0.05),铁死亡相关因子ACSL4、COX-2的m RNA和蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),GPX4的m RNA和蛋白的表达水平显著下降(P<0.05);LOX、TFR的m RNA相对表达显著上调(P<0.05),FTH-1的m RNA相对表达显著下调(P<0.05)。EHDPHP暴露导致肝组织NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA相对表达水平随着灌服剂量的增加而显著增加(P<0.05),p NF-κB/NF-κB的比值以及IL-1β、IL-6、TNF-α的含量显著升高(P<0.05)。上述研究结果表明,EHDPHP可通过氧化应激和铁死亡对鸡肝脏造成损伤,促进炎症因子的合成和分泌,并且影响鸡的生长发育。本研究为EHDPHP暴露的诊断、防制提供科学的试验依据。

雷公藤红素和雷公藤内酯甲是中药雷公藤的主要三萜活性成分， 具有抗肿瘤、抗炎及免疫抑制等药理活性， 是雷公藤相关中药制剂发挥临床疗效的物质基础。通过解析活性成分生源途径， 优化基因元件并利用“细胞工厂”异源获取将是未来“低成本、高效率”获得雷公藤中三萜活性成GDC-0068分的有效途径。CYP712Ks是参与雷公藤木栓烷型和齐墩果烷型三萜骨架修饰的第一个细胞色素P450酶， 发挥C-29位羧基化功能， 可催化木栓酮生成美登木酸， 催化β-香树Informed consent素生成3-表卡通酸。本研究以四条多功能TwCYP712K1/2/3/5为研究对象， 利用酿酒酵Talazoparib体内母体内功能表征， 明确其催化功能及底物选择偏好性; 通过同源建模和分子对接， 明确蛋白与底物结合空间结构， 进而对蛋白活性口袋内差异氨基酸进行互相突变， 阐明决定催化功能和底物结构选择的关键氨基酸。本研究共构建了63个突变体元件， 解析了影响TwCYP712Ks羧基化功能的氨基酸位点， 特别是揭示了影响TwCYP712K2对齐墩果烷型和木栓烷型三萜底物选择性的关键氨基酸， TwCYP712K2~(F127I)与TwCYP712K2~(A227T)突变体将导致产物比例发生逆转。本研究以同源蛋白比对及相互突变的方式对TwCYP712Ks四条蛋白进行半理性设计， 阐明多个决定蛋白催化功能的氨基酸位点， 获得系列活性提升或改变的突变体， 为雷公藤三萜活性成分的生物合成提供丰富的催化元件， 并初步解析了C-29位羧基化机制。

该研究以湘Coroners and medical examiners红薹1号红菜薹（XHT1H,R）和义农50天菜心（YN50T,G）为研究对象，采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）技术对2种菜薹类黄酮类物质进行检测，并采用主成分分析、热图分析和正交偏最小二乘-判别分析等方法对红菜薹和菜心代谢组学进行分析，筛选差异代谢物。主成分分析发现，两种菜薹化合物含量的分布具有明显差异。正交偏最小二乘-判别分析结果表明，两种菜薹中共鉴定到170种差异类黄酮类代谢物，包括56种黄酮醇类、38种花青素类、VX-661研究购买32种黄酮类等代谢物。其中，花青素中包括25种矢车菊素类糖苷，6种飞燕草素糖苷，3种芍药花素苷，3种牵牛花素苷，且红菜薹比菜心中含量高的差异倍数前十的代谢物中，有6种为矢车菊素。该研究从代谢组学角度分析了不同菜薹类黄酮成分差异，推测矢车Y-27632研究购买菊素、飞燕草素、芍药花素和牵牛花素与红菜薹的色泽有关，其结果为进一步研究菜薹茎部色泽的形成机制和色素的利用提供参考。

目的：探究寿胎丸合四君子汤加减在肾脾两虚型早期复发性流产患者中的应用效果。方法：选取2019biosilicate cement年8月至2022年8月收治的确诊为肾脾两虚型早期复发性流产患者64例，按照随机数字表法分为对照组和观察组，各32例。对照组采用低分子肝素和地屈孕酮片治疗selleck HPLC，观察组在对照组基础上加用寿胎丸合四君子汤治疗。对比两组临床疗效、中医证候积分、购买Panobinostat凝血功能、血清激素水平和保胎成功率。结果：观察组治疗总有效率高于对照组（P<0.05）；治疗后两组中医证候积分均降低，且观察组低于对照组（P<0.05）；治疗后两组维蛋白原（FIB）和D-二聚体（D-D）水平降低，凝血酶原活动时间（APTT）时间延长，且观察组FIB和D-D水平低于对照组，APTT长于对照组（P<0.05）；治疗后两组孕酮（PROG）和血清绒毛膜促性腺激素（β-HCG）水平均升高，且观察组高于对照组（P<0.05）；观察组保胎成功率高于对照组（P<0.05）。结论：寿胎丸合四君子汤加减治疗肾脾两虚型早期复发性流产患者疗效确切，利于改善凝血功能，降低中医证候积分，提高血清激素水平，且保胎成功率高。

C-H键活化被称为有机化学界的“圣杯”,一直是有机化学的研究热点。近年来越来越多的化学家开始关注远程C-H键的活化,同时,随着自由基化学的兴起,通过自由基诱导的远程C-H键活化被广泛研究。自由基诱导的远程C-H键活化主要通过分子内氢迁移(HAT)过程来实现,其中大部分是由氮中心自由基和氧中心自由基诱导引发的。而产生氮、氧中心自由基通常需要苛刻的反应条件或者预制复杂的底物分子。由碳中心自由基诱导的远程C-H键活化,由于反应前后化合物键能差距太小,分子内氢转移过程通常难以实现,成功实例较少。为此,我们开发出C-H键活化接力策略(CHAR):即PLX5622使用方法在温和的有氧条件下产生碳中心自由基,随后迅速与氧气偶联,产生过氧自由基中间体从而诱导分子内HAT,活化合适位点的C-H键,产生目标自由基,经后续反应得到官能化的产物,从而实现自由基诱导的远程C-H键活化。本论文主要利用C-H键活化接力策略,高效的合成了一系列吡咯衍生物,为自由基远程C-H键活化以及吡咯的合成和官能化提供了新方法。PCI-32765体外1、通过对4-溴三苯胺六氯锑酸盐(TBPA)反离子的利用,结合C-H键活化接力策略(CHAR)成功实现了对脯氨酸酯类化合物远程C-H键的活化,合成了一系列氯代吡咯衍生物,为促进反离子参与的反应提供了新路径。该反应具有良好的官能团耐受性,可兼容多种活性官能团,并且反应可以放大至克级Antiretroviral medicines,可用于氯代吡咯的大规模合成。2、结合上一部分的工作内容,使用溴化铜作为氧化剂和溴原子供体,利用C-H键活化接力策略(CHAR),成功实现了脯氨酸酯的脱氢芳构化和远程C-H键的溴化,以良好的产率和高选择性得到了 一系列4-溴代吡咯衍生物,为高选择性的远程C-H键活化拓展了新方式。3、利用TBPA/O2的引发体系,通过添加醋酸铜(Cu(OAc)2),高效的实现了吡咯、吲哚和其它富电子芳烃的C-H键氯化。该反应表明TBPA可以作为一种新型的氯化试剂参与到氯代芳烃及氯代杂芳烃的高效合成。

癌症在治疗过程中新发展的策略有光疗、免疫疗法、放射疗法、化学动力学疗法等,它们可以有效地与传统疗法相结合而进一步提高癌症的治疗疗效。其中,化学动力学疗法(Chemodynamic Therapy,CDT)具有毒副作用小、易操作、不产生肿瘤耐药性等优点,它的主要治疗机制是在肿瘤微环境内通过芬顿或类芬顿反应将癌细胞内高水平的H_2O_2转化为高毒性的·OH去杀伤癌细胞。然而,肿瘤细胞内H_2O_2浓度不足和还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的过表达等缺陷而导致CDT的疗效并不理想。因此,为解决上述问题,设计功能纳米药物用于细胞内H_2O_2供给、GSH消耗和促进·OH产生以提高CDT疗效将尤为重要。本论文以纳米金属有机配合物(Metal-organic complexes,MOC)为基础成功构建了两种具有靶向协同治疗作用的纳米载药体系,该纳米载药体系不仅可以用于增强CDT的治疗疗效,而且将CDT与化学疗法(Chemotherapy,CT)相结合,提高对肝癌的抗癌活性。主要研究结果如下:(1)甘露糖修饰的镱基二茂铁纳米载药体系的构建及抗癌活性研究1,1′-二茂铁甲酸和氯化镱通过溶剂热法合成具有p H响应的纳米载体Fc-MOFTGF-beta/Smad抑制剂s,通过π-π堆积和氢键作用负载抗癌药物多柔比星(Doxorubicin,DOX)得到纳米粒子DOX@Fc-MOFs,甘露糖衍生物(Mann)通过电荷相互作用修饰在DOX@Fc-MOFs的表面形成纳米粒子DOX@Fc-MOFs-Mann。通过SEM、TEM、DLS等试验观察到纳米粒子DOX@Fc-MOFs-Mann的平均粒径大约为275±15 nm,并且具有不规则的类雪花状的空间结构,对DOX的负载率达到9.3%。细胞外实验研究表明,该纳米粒子在p H=5.0的环境中经过48 h大约有70%的药物可以释放;并且在H_2O_2存在的条件下可有效地产生·OH。细胞内实验显示:与HL7702细胞相比,纳米粒子能够主动靶向Hep G2细胞,实现抗癌药物的靶向递送和胞内弱酸性环境刺激响应药物释放;二茂铁参与芬顿反应催化胞内H_2O_2转化为高毒性的·OH;细胞毒性分析显示该纳米粒子具有较好的生物相容性且肝癌细胞在经过48 h孵育后只有20%的存活率,有效提高了CDT的疗效,实现了CDT与CT联合治疗。(2)HA修饰的p H/GSH双响应铜基三唑纳米载药体系的构建及抗癌活性研究在溶剂热条件下过氧化氢酶(CAT)抑制剂3-氨基-1,2,4-三唑(3-AT)和Cu~(2+)通过配位作用合成Cu-MOF作为核,使用双[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物在Cu-MOF表面生长有机硅(SMON)外壳,通过电荷作用和氢键作用负载DOX及靶向配体透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)获得功能性纳米粒子Cu-MOF@SMON/DOX-HA。通过SEM、TEM、DLS和紫外等实验观察到纳米粒子Cu-MOF@SMON/DOX-HA呈粒径大约为300±15 nm的规则棒状结构,并且DOX的负载率高达27.5%。细胞外实验研究表明:该纳米粒子具有明显Canagliflozin纯度的p H/GSH刺激响应性,在p H=5.0且有GSH存在的条件下经过48 h大约有80%的药物可以释放,能够高效的消耗GSH并产生·OH。细胞内实验结果显示:Cu-MOF@SMON/DOX-HA能够主动靶向肝癌细胞并且在癌细胞内有效降解并释放DOX、3-AT、SMON和Cu~(2+)。SMON和Cu~(2+)可以大量消耗胞内GSH,从而启动类芬顿反应产生高毒性的·OH;3-AT有效抑制CAT的活性,进而促进类芬顿反应效率,实现癌细胞内的氧化还原平衡被打破,成功诱导肝癌细胞发生铁死亡。细胞毒性实验分析显示Cu-MOF@SMON/DOX-HA具有良好的生物相容性且孵育肝癌细胞48 h后只有8%的存活率,为提高CDT疗效实现联合治疗提供了一种高效的途径。综上所述,本论文基于纳米MOC构建了两种肿瘤微环境响应的纳米载药体系,用于提高CDT疗效,成功实现CDT与CT联合用于提高对肝癌的抗癌活immune proteasomes性。该纳米载药体系为构建功能MOC用于抗癌双模式联合研究提供新策略。

自噬相关蛋白基因13(autophagy-related gene 13,atg13)在细胞自噬的发生过程中发挥着关键作用。然而,其在激活干扰素α(interferon-α,IFN-α)的过程中所发挥的作用却尚未阐明。基于对atg13基因的物种特异性的遗传特征,本研究选取人源atg13基因及人源胚胎肾细胞系(human embryonic kidney cell line,HEK 293T)作为研究atg13基因过表达与目标细胞中如何激活IFN-α信号通路的实验平台。结果表明,atg13基因在刺激IFN-α产生的能力方面明显强于其激活IFN-β的活性Bucladesine纯度。虽然atg13基因与IFN信号通路中的不同信号分子(MyD88,IKKα,TRAF6和IRF7)在转录及翻译水平上均有不同程度的相关性,但atg13基因过表达从而激活IRF7的磷酸化是IFN-α产生的关键因素。此外,ATG13蛋白与干扰素刺激应答原件(interfeSB431542体外ron-stimulated response ele ment,ISRE)的强烈互作也是atg13基因过表达Oncologic care激活IFN-α产生的重要环节。

目的：通过Meta分析系统评价将富血小板血浆（Platelet rich plasma,PRP）运用于面部年轻化疗法的安全性vaccines and immunization和有效性。方法：用计算机从多个数据库中全面搜索使用PRP对面部年轻化进行治疗相关的随机对照实验，对有关论文进行筛查、评估和信息提取后，再使用PF-6463922Rev Man此网站 5.3软件，对新纳入的论文进行Meta分析。结果：共甄选出了16篇符合纳入规范标准的研究论文，共包括了945例就医者，并根据诊断结果进行了Meta分析，研究结果表明，试验组与对照组相比，在面部色斑/斑点[MD=-6.05,95%CI(-9.16,-2.94)]、面部水分[MD=6.19,95%CI(1.67,10.72)]和就医者满意度[OR=0.17,95%CI(0.08,0.37)]、改善疗效情况[OR=0.13,95%CI(0.06,0.25)]、不良反应发生率[OR=0.29,95%CI(0.17,0.50)]方面，差异有显著统计学意义（P<0.01）。结论：经Meta分析，将PRP应用于面部可改善皮肤情况，提高就医者满意度和治疗效果，减少不良反应发生率，但未来仍需大规模、多中心的试验进一步证实。

目的 探讨甲状腺激素相关指标在诊断自身免疫性甲状腺疾病中的应用。方法 选择2022年6—12月广州市第一人民医院收治的70例自身免疫性甲状腺疾病患者，作为疾病组，70例非自身免疫性甲状腺疾病患者，作为非疾病组，另外选择同期70名健康体检者作为对照组。采用化学发光法测定所有受检对象的促甲状腺素受体抗体（TRAb）、促甲状腺激素（TSH）、抗甲状腺球蛋白抗体（ATG）、甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）；比较各组上述指标水平与阳性检出率。以临床诊断结果为“金标准”，比较各指标单独与联KD025使用方法合检测诊断自身免疫性甲状腺疾病的应用效能。结果 疾病组TSH、TPOAb、TRAb、ATG水平均明显高于非疾病组和对照组[TSH(mU/L):5.52±1.08比4.43±1.07、2.12±0.85,TPOAb(kU/L):68.24±10.79比30.29±6.39、20.77±3.thyroid autoimmune disease83,TRAb(U/L):3.69±0.52比1.03±0.31、0.58±0.15,ATG(kU/L):339.65±30.15比45.28±8.17、22.17±3.90，均P<0.05]，且非疾病组明显高于对照组（均P<0.05）。疾病组的TSH、TPOAb、TRAb、ATG阳性检出率均明显高于非疾病组与对照组[TSH:78.57%(55/70)比52.86%(37/70)、10.00%(7/70),TPOAb:81.43%(57/70)比45.71%(32/70)、10.00%(7/70),TRAb:70.00%(49/70)比50.00%(35/70)、7.14%(5/70),ATG:65.71%(46/70)比42.86%(30/70)、15.71%(11Gefitinib小鼠/70)，均P<0.05]，且非疾病组明显高于对照组（均P<0.05）。TSH、TPOAb、TRAb、ATG联合检测诊断自身免疫性甲状腺疾病的准确度、敏感度、阴性预测值分别为87.86%、90.00%、89.55%，均明显高于各指标单项检测；各指标单独与联合检测的特异度和阳性预测值比较差异无统计学意义。结论 与各指标单独检测比较，TSH、TPOAb、TRAb、ATG联合检测对自身免疫性甲状腺疾病的诊断效能更高，有助于为疾病诊断提供数据参考，值得在临床推广。