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目的 筛选铁死亡相关长链非编码RNA(ferLncRNA)构建风险评分模型，并进行肺腺癌患者的生存预测。方法 通过相关性分析、癌组织-癌旁组织差异分析，获得差异表达的铁死亡相关LncRNA(DEferlncRNA),使用配对算法获得DEferlncRNA pairs。利用LASSO Cox筛选与生存相关DEferlncRNA pairs,多因素Cox回归分析并构建风险评分模型；计算ROC曲线的AUC值评估模型。利用单因素和多因素Cox回归分析风险评分是否具有独立预后价值；分析生存时间、临床病理特征和化疗疗效等在高、低风险组获悉更多之间的差别。结果 相关性分析获取512个ferlndiABZI STING agonistcRNA,差异分析获得53个DEferlncRNA,配对算法获得1243个DEferlncRNA pairs。LASSO Cox分析获得40个与生存相关DEferlncRNA pairs,多因素分析得到17个DEferlncRNA pairs构建风险评分模型；模型的AUC为0.776。单因素和多因素分析提示风险评分可作为肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD)的独立预后因素。患者化疗药物敏感性、TNM分期、临床分期、生存时间和生存状态在高、低风险组之间差异有统计学意义。结论 利用DEferlncRNA构建的肺腺癌风let-7 biogenesis险评分模型，可为预测肺腺癌患者预后提供依据。此外，低风险评分患者对化疗药物敏感，将为肺腺癌患者临床治疗提供参考。

目的：探讨冬凌草甲素(Ori)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)的保护作用。方法：取15只小鼠，随机分为对照组、造模组(DSS组)、治疗组(Ori组),每inappropriate antibiotic therapy组5只小鼠。DSS组和Ori组小鼠均以DSS溶液灌胃，Ori组小鼠于实验第7天开始每日腹腔注射Ori溶液，观察3组小鼠体重、疾病活动指数(DAI)评分、结肠长度、病理变化，并检测结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)、沉默信息调节因子(Sirt1)及核因子(NF)-κB水平变化。结果：与对照组相比，DSS组和Ori组小鼠均出现体重下降、SB431542价格DAI评分增高、结肠缩短、MPO水平升高、Sirt1表达受抑制、NF-κB表达水平升高(P<0.05,P<0.01)并出现病理学炎症表现。Ori组与DSS组相比较，小鼠体重下降较少、DAI评分较低、结肠缩短较少、MPO水平升高较低，Sirt1表达受抑制较低、NF-κB表达水平升高较少(P<0.05,P<0Cobimetinib化学结构.01),病理学炎症表现较轻。结论：Ori对DSS诱导的小鼠UC具有保护作用。

①课题来源与背景：氧化应激是骨质疏松的一个独立危险因素,氧化还原调控因子FoxO1通过上调过氧化氢酶、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)等抗氧化酶的水平在骨骼内稳态中发挥基础性的调节作用。葛根素作为天然的抗氧化剂,能够通过其抗氧化活性起到骨保护作用。因此,阐明葛根素在抗骨质疏松氧化应激损伤中的作用和分子机制具有重要的临床意义。②研究目的与意义：探讨葛根素通过Sirt1/FoxO1信号通路对破骨细胞生成、活性的影响,阐明葛根素抗骨吸收效应的分子机制,为临床上应用葛根素防治骨质疏松提供新的科学依据。③主要论点与论据：(1) 较准确地确定氧化还原调控因子FoxO1在破骨细胞生成、功能中的作用并阐明相关的分子机制,为骨质疏松的防治提出新的途径,即针对氧化应激的抗骨质疏松治疗。(2) 探讨葛根素通过Sirt1/FoxO1信号通路对破骨细胞生成、活性以及凋亡的影响,阐明葛根素发挥抗骨吸收效应的分子机制,为葛根素的临床应用提供新的理论依据和研究基础。④创见与创新：在本课题中我们利用RNA干扰技术对FoxO1进行基因沉默,建立FoxO1-siRNA转Pathologic staging染RAW264.7细胞,采用RANKL诱导RAW264.7细胞形成破骨细胞,深入研究葛根素发挥抗骨吸收效应的分子机制,这在以往几乎没有被研究过,是一项全新的研究。本课题的实施将揭示葛根素在发挥骨保护作用中对破骨细胞的影响及其相关的分子机制,为临床上应用葛根素防治骨质疏松提供新的视角和科学理论依据。⑤社会经济效益,存在的问题：本项目阐明葛根素通过上调 FoxO1 的蛋白表达水平和转录活性,发挥其抗氧 化作用,进而抑制 RANKL 诱导的 RAW264.7 细胞向破骨细胞的分化。氧化还原调 控因子 FoxO1 是葛根素发挥抑制骨吸收效应的关键靶点。本研究将为临床上应用 葛根素防治骨质疏松提供新的视角和科学理论依据。本项目相关研究结果仅进行了体外细胞实验,研究结论有Proteases抑制剂一定的局限性,尚需进一步的体内实验研究以验证此结论。⑥历年获奖情况：无。⑦成果简介要向社会公开： 本项目通过RANKL和H2O2对RAW264.7细胞诱导破骨细胞氧化应激模型,观察葛根素对破骨细胞的影响,阐明葛根素通过上调FoxO1的蛋白表达水平和转录活性,发挥其抗氧化作用,进而抑制RANKNSC125066半抑制浓度L诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞的分化。氧化还原调控因子FoxO1是葛根素发挥抑制骨吸收效应的关键靶点。本研究将为临床上应用葛根素防治骨质疏松提供新的视角和科学理论依据。发表论文一篇。

研究背景甲状腺自身抗体(anti-thyroid autoantibodies,ATA)是甲状腺自身免疫性疾病autoimmune thyroid disease,AITD)的标志性抗体,其中甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibodies,TPOAb)和甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody,TgAb)在临床中被广泛应用。甲状腺与女性生殖系统密切相关,甲状腺功能障碍显著影响女性生育力。以ATA阳性为特征的甲状腺自身免疫(thyroid autoimmunity,TAI)被认为是甲状腺功能减退的主要原因。甲状腺功能正常的ATA阳性对辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)的影响目前尚存在争议。既往研究发现多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者中ATA阳性率高于一般人群。PCOS是育龄期女性最常见的妇科内分泌疾病之一,其临床特征主要为雄激素过高的临床和/或生化表现、稀发排卵或无排卵、卵巢多囊样改变。PselleckCOS严重影响女性生育健康,且可造成不孕,需依靠生活方式改善、诱导排卵等手段达到生育目的,部分PCOS患者甚至需借助ART完成生育愿望,而ATA对PCOS患者的ART结局是否存在影响尚不清楚。目的探索ATA阳性对PCOS人群行体外授精(in vitro fertilization,IVF)/卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)后冻融胚胎移植(frozen embryo transselleck抑制剂fer,FET)妊娠结局及母儿并发症的影响。研究方法回顾性纳入2019年6月-2022年10月在山东大学附属生殖医院行第一周期IVF/ICSI后首次FET的PCOS患者。甲状腺功能正常且ATA阳性PCOS患者为研究组(ATA阳性组),甲状腺功能正常且ATA阴性PCOS患者为对照组(ATA阴性组),比较两组的妊娠结局及母儿并发症情况,包括临床妊娠率、早期流产率、早产率、巨大儿、低出生体重儿等。同时在ATA阳性组中根据促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)水平分为两组,正常低TSH水平组的范围为0.27uIU/mLinfection (neurology)性组的母儿并发症包括早产、妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)、巨大儿等均无统计学差异。对ATA阳性组进行亚组分析发现TSH正常范围内其水平高低对妊娠结局无显著影响。结论甲状腺自身抗体TgAb和/或TPOAb阳性会增加PCOS女性IVF/ICSI的早期流产风险,对其他妊娠结局和母儿并发症无明显影响。在TgAb和/或TPOAb阳性情况下,正常范围内的TSH水平对妊娠结局无影响。

目的 该研究的目的是探究植物来源的橄榄苦苷对GDM小selleck激酶抑制剂鼠的作用及相confirmed cases关机制。方法 构建GDM小鼠模型，腹腔注射橄此网站榄苦苷（10 mg·kg~(-1)·d~(-1)），记录体质量和血糖水平。通过ELISA和RT-qPCR检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平来评估GDM小鼠的炎症水平，通过Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路的活化，通过比较产仔数和出生体质量来分析妊娠结局。结果 橄榄苦苷可以减轻GDM小鼠体质量的升高，并有效降低血糖，恢复胰岛素敏感性。橄榄苦苷治疗还可以降低氧化应激和炎症水平，激活GDM小鼠肝脏组织中的AMPK信号通路，并且橄榄苦苷治疗显著改善了小鼠妊娠结局。结论 橄榄苦苷可以有效缓解GDM症状并改善模型小鼠的妊娠结局，这种效果是通过减弱由AMPK信号通路介导的氧化应激和炎症来实现的。

近年来全球老龄化进程加快,老年性骨质疏松症(SOP)发病率逐年增加,严重影响老年人的生活质量乃至寿命,发生骨折后给社会带来巨额的医疗支出与社会负担,已成为重要的公共卫生问题。我国大部分SOP患者就医较晚,开始治疗时骨量严重不足。双膦酸盐是目前治疗SOP最常用的药物,通过抑制骨吸收发挥作用,虽然可以防止进一步的骨质流失,但不能逆转已丢失的骨量。同时对于SOP这种低转换型骨质疏松症,骨吸收水平已不高,使得双磷酸盐类药物的效果有限。临床应用的促骨形成药物为肽类与单抗类,目前只用于已骨折患者的骨折恢复和极低骨量患者的短期治疗。由于不良反应,治疗周期被严格限制在24个月内。因此,开发促进骨形成小分子药物,提升SOP临床治疗效果至关重要。骨形态发生蛋白2(BMP-2)是一种有效的骨诱导细胞因子,其主要生物学功能是诱导未分化的骨髓间充质干细胞分化为软骨和新骨。此前,课题组证明一类苯并呋喃类结构通过上调BMP-2促进骨形成,在SAMP-6小鼠、糖皮质激素诱导的骨质疏松大鼠和去卵巢大鼠中证明其疗效和安全性。构效关系研究表明,6-甲氧基苯并呋喃母体核是最优的母体核,通过提高水溶性和代谢稳定性提升药效的策略是有效的。本论文中,首先使用老龄C57和SAMP-6小鼠模型研究了代表性化合物125对SOP的治疗和预防作用,明确其临床应用价值。之后使用scRNA-seq分析,确定了 125通过BMP-2上调加速骨转换和增加成骨细胞比例的机制。最后我们设计合成了 28个未见文献报道的新衍生物,在斑马鱼骨质疏松模型上评估了构效关系(SAR),明确了不同的末端基团和连接体对活性的影响,完善了这类化合物的SAR。多浓GDC-0973采购度斑马鱼骨质疏松药效模型研究中,衍生物1-9的疗效显著优于125与阳性对照药物特Mediated effect立帕肽。通过老龄C57小鼠活体、离体CT与骨切片系统评价药效,初步的成药性研究显示1-9具有长期口服用药的可能。1-9未来可以作为小分子促骨形成药物候选物继续研究,也可以作为化学生物学工具深入促骨形成机制研究。本购买BMS-354825研究推动了 SOP药物发展。

目的 分析依诺肝素联合胰岛素治疗中度重症高脂血症型急性胰腺炎的安全性。方法 选取2021年6月—2023年6月南京鼓楼医院集团宿迁CL13900生产商医院（徐州医科大学附属宿迁医院）133例中度重症高脂血症型急性胰腺炎患者，利用最新统Y-27632体内实验剂量计学软件生成随机序列后将其分为观察组（n=65）和对照组（n=68）。观察组采用依诺肝素联合Disease biomarker胰岛素治疗，对照组给予胰岛素治疗。观察比较两组患者治疗效果。结果 治疗后，观察组各项凝血指标均优于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组症状缓解时间较对照组更短，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后，观察组三酰甘油水平（4.62±2.42）mmol/L低于对照组，差异有统计学意义（t=12.061,P<0.05）。结论 依诺肝素联合胰岛素治疗能够降低中度重症高脂血症型急性胰腺炎患者血脂水平、改善凝血功能，对血小板计数无明显影响，且不增加出血相关不良事件。

目的:肿瘤是犬常发疾病之一,尤其随着年龄的增长,在体内环境和外界环境的影响下,发病率呈正向升高。医院一般在手术切除可见肿块物后,持续进行药物抗癌,定期复查观察;无法对肿瘤的性质准确判断,以及对肿瘤是否发生转移、复发等预后情况进行评估。目前,国内在宠物临床诊疗中对于肿瘤的病理诊断依据尚不完善,缺乏充足的临床资料。本研究对乌鲁木齐及周边县市动物医院采集来的犬肿瘤样本为实验对象,利用HE染色、PAS糖原染色、Masson三色染色进行鉴别诊断,确定肿瘤类型。从而发现各肿瘤组织之间的共性与不同,掌握组织与肿瘤发生之间的联系,为临床诊治提供更加丰富的数据。方法:对采集到的临床肿瘤病例统计其品种、年龄、性别及发病部位等相关信息,分析肿瘤的发病特点。利用HE染色技术对犬肿瘤样本切片进行病理学诊断分析,确定肿瘤类别和性质。同时结合Masson三色染色、PAS糖原染色以及免疫组化染色方法对犬肿瘤进一步鉴别诊断,从而得到准确的病理学诊断结果,为宠物医师的临床治疗和预后提供一定的指导意义。结果:(1)犬肿瘤发病特点分析;根据采集到的66例样本分析可得,犬肿瘤发病率较高的组www.selleck.cn/products/ag-221-enasidenib织部位是乳腺组织、皮肤组织。雌性犬的发病率明显高于雄性犬,其中乳腺肿瘤的发病率较高且均为雌性犬,而其他肿瘤的发病并无明显的性别偏向。犬肿瘤从成年期开始发病,在壮年期和老年期达到高峰,提示犬肿瘤发病有低龄化趋势。发病品种以泰迪犬最多,其次为中华田园犬、博美犬等,这与人们的饲养环境与偏好息息相关。(2)肿瘤的分类与定性;采集到的66例临床病例之中,良性肿瘤有23例,恶性肿瘤有43例,良性肿瘤中来源于皮肤组织的肿瘤占比最多,有12例;恶性肿瘤中以来源于乳腺组织的肿瘤占比最多,共有24例。(3)特殊染色方法的应用;Masson染色能够区别染色纤维组织、肌纤维组织和胶原纤维组织,对纤维组织肿瘤和平滑肌肿瘤的鉴别诊断具有重要意义。PAS糖原染色能够清晰地表达组织中是否Surgical antibiotic prophylaxis有糖原物质的存在,但在本研究中缺乏鉴别诊断意义。P53抑癌基因提示组织细胞瘤变,癌胚抗原(CEA)提示细胞向周围组织发生侵袭和转移。结论:在202MG132小鼠2至2023年间,共在乌鲁木齐、昌吉、石河子及库尔勒等地的动物医院共收集肿瘤66例。研究发现犬类动物中发病率最高的是乳腺肿瘤和皮肤肿瘤。生长高发时期在壮年期和老年期,成年期和高龄期相对较少。高发品种为泰迪、博美、串串等中小型犬,随着犬体型的增大,发病率逐渐递减。本次研究涉及的66例肿瘤病例中,良性肿瘤仅有23例,恶性肿瘤有43例,恶性肿瘤的发病率明显要高于良性肿瘤。病理组织学诊断容易诊断特征较为明显的肿瘤组织,但对于成分较为复杂的组织,仍然需要借助各类特殊染色方法辅助诊断。

研究背景:中药三七(Panax notoginseng)在中医药记载已有千年历史,自古至今广泛应用于临床,尤其在外科外伤领域具有独特的消肿和抗炎疗效,被誉为“外科金疮圣药”。目前非常热门的中药产品如云南白药和片仔癀,其主要成分实际上都是三七。尽管三七的抗炎消肿疗效得到公认,且我们的课题组在前期的细胞实验研究中发现,三七可以促进中性粒细胞向炎症部位的趋化,并促使激活的炎性中性粒细胞发生凋亡。然而,三七的作用机制和原理仍不清楚。因此,本课题计划使用与人类基因相似度达87%的活体斑马鱼作为实验动物,利用斑马鱼身体透明的特点,观察三七对斑马鱼体内中性粒细胞的生理和病理影响,利用现代研究手段,探究中药三七的作用机制和途径。研究目的:本研究旨在通过使用带有多种特殊荧光标记的斑马鱼幼鱼胚胎作为实验动物模型,实现以下目标:1.探究中药三七对斑马鱼中性粒细胞的表型研究;2.研究三七对斑马鱼中性粒细胞的特异性作用;3.探究三七对斑马鱼中性粒细胞死亡的方式;4.探索三七产生抗炎作用的分子机制或通路;5.确定三七发挥最佳抗炎疗效的治疗浓度,以开发中药三七的新药用治疗场景。三七临床上长期以来广泛应用于治疗各种疾病,尤其是外科疾病中的跌打损伤等。根据中医理论,三七常被用于治疗具有炎症的疾病,如外伤出血、骨折、胸腹刺痛和跌打肿痛。近年来,通过现代技术,对三七的研究逐步揭示了其化学成分和药理活性。植物化学研究确定了三七中的多种生物活性化合物,包括黄酮、皂苷、氨基酸和挥发油等。其中,三七总皂苷(Panax Notoginseng Saponins,PNS)是其主要生物活性成分,是从三七植物根部提取的多种皂苷的混合物,其药理特性已广泛研究。三七已被发现具有强大的抗炎治疗作用,而关于其抗炎作用物质的研究主要基于PNS中的各种成分。同时,直接使用PNS也可有效缓解与炎症相关的疾病。然而,其作用机制仍需进一步研究。目前的证据表明,PNS有望成为治疗炎症及相关疾病的前景药物。由于PNS成分的复杂性以及现有提取工艺的相对落后,还需开展更多研究以充分了解其有效成分、影响治疗的潜在机制,并确定或开发其未来的应用场景,同时确保其安全性。为实现上述目标Colforsin IC50,本研究计划利用带有特殊荧光标记的斑马鱼幼鱼胚胎作为实验动物模型,通过观察斑马鱼中性粒细胞的变化,深入研究三七的作用immune surveillance机制。斑马鱼作为模型生物具有透明胚胎的特点,可清晰观察到三七对中性粒细胞的生理和病理变化。我们将运用现代研究手段,研究三七对斑马鱼中性粒细胞的发生作用表型,以了解其对细胞形态和功能的影响。此外,我们还将探究三七对中性粒细胞的特异性作用,揭示其针对炎症反应的机制。同时,我们将进一步研究三七产生抗炎作用的分子机制或通路,揭示其对炎症信号传导和调控的影响。最后,我们将通过测试不同浓度的三七,确定其在抗炎疗效方面的最佳治疗浓度,以期在临床上开发新的中药三七治疗场景。通过本研究,我们将进一步了解三七的药理作用,为其临床应用提供科学依据。同时,对三七的深入研究有助于扩大中药的应用领域,并为中医药的现代化发展做出贡献。中性粒细胞在人体内占据最丰富的粒细胞类型,约占50%-70%。它们是宿主防御多种传染性病原体(包括病毒、细菌、真菌和原生动物)的首要防线。中性粒细胞的主要功能是吞噬病原体并促进受损组织修复。然而,如果中性粒细胞失调,其参与的浸润和炎症反应机制可能对宿主造成危害。过度激活和不受控制的中性粒细胞浸润可导致炎症和自身免疫性疾病,如急性肺部炎症/损伤、缺血/再灌注损伤、类风湿性关节炎和脓毒症等。新型冠状病毒性肺炎近年来就是由于炎症失控导致肺部炎症渗出和肺实变,最终导致患者呼吸衰竭和死亡。中性粒细胞凋亡是机体平衡的一部分,在老化的中性粒细胞中会被触发,但在特定情况下也可能被诱导。例如,使用血清或抗体刺激病原体吞噬和细胞内杀伤作用会引发一种特定的细胞分化程序,最终导致吞噬作用诱导的细胞死亡(PICD)。由于中性粒细胞凋亡具有抗炎特性,这种机制似乎在感染被清除后促进组织修复方面非常适用。目前,针对这类疾病的治疗通常采用非甾体抗炎药和抗细胞因子疗法。然而,这些疗法在一定程度上会对先天性和适应性免疫系统造成损害,一旦失衡,就可能导致炎症扩散甚至无法控制。因此,需要开发新的治疗策略来清除过量的炎性中性粒细胞。斑马鱼是一种小型硬骨鱼,在过去三十年中逐渐成为炎症研究的关注对象。斑马鱼与人类具有高度的遗传相似性,其基因中超过87%与人类相似。斑马鱼拥有心脏、肝脏、胰腺、肠道等器官,其免疫系统在功能上与人类相似,并具备多个保守的炎症信号通路和免疫细胞类型。这使得斑马鱼成为研究炎症机制的简化模型生物体的理想选择。斑马鱼的造血系统与其他脊椎动物相似,包含多个细胞分化阶段。斑马鱼的胚胎和幼体具有光学透明性,这使得可以进行非侵入性成像研究炎症反应的动态过程。这种特性使得我们能够实时观察炎症的发展和进展。此外,斑马鱼具有快速繁殖的特点,能够产生大量后代,从而使得进行高通量筛选来评估潜在的抗炎化合物或基因修饰成为可能。这有助于确定潜在的药物靶点或指导新疗法的开发。因此,斑马鱼是评估先天免疫反应的宝贵工具,其独特的特征使其成为比啮齿动物模型更优越的选择。在动物研究中,已经有多篇报道关于PNS在缓解炎症方面的作用。然而,PNS中发挥抗炎效果的具体有效分子仍然不清楚,更重要的是,PNS发挥抗炎效果的相关机制也尚未明确,需要进一步的研究。本课题旨在通过对三七特异性诱导斑马鱼中性粒细胞凋亡表型机制的探索,开展与中药物质基础及作用相关的研究方向。我们将结合学科交叉和现代科学技术,全面挖掘三七的抗炎特性的具体分子机制。材料与方法:1.药物处理及动物模型。将受精后72小时(72 hpf)的可标记中性粒细胞的Tg(lyz:Ds Red2)斑马鱼幼鱼分别暴露在0mg/L,5mg/L,10mg/L和15 mg/L的PNS中,6小时后在荧光显微镜下进行观察成像,主要观察中性粒细胞受PNS影响的表型情况。2.PNS对中性粒细胞特异性评价研究。通过使用标记巨噬细胞,胸腺T细胞,造血干细胞的转基因鱼系,评价PNS对除中性粒细胞之外的其他髓系细胞的影响。3.PNS诱导中性粒细胞死亡方式的探究。使用巨噬细胞和中性粒细胞共同标记的转基因鱼系观察单细胞分辨率下PNS诱导中性粒细胞死亡过程。使用细胞自噬,细胞坏死性凋亡等多种细胞死亡抑制剂,观察是否影响PNS诱导的中性粒细胞死亡过程。使用TUNEL染色及Caspase 3活性染色判断PNS诱导中性粒细胞是否通过细胞凋亡途径。4.小分子筛选PNS诱导中性粒细胞凋亡的信号通路探索。使用RNA-seq检测PNS诱导变化的转录组,并分析具有显著变化的基因及信号通路。通过显著变化基因富集的信号通路结合与中性粒细胞凋亡有关的文献调研,使用大量小分子药物对PNS诱导中性粒细胞凋亡的过程进行干预,欲寻找可调控该过程的小分子药物及对应分子信号。5.PNS诱导中性粒细胞凋亡的分子机制研究。使用抗体显色对MAPK13时空表达情况进行探索,并结合蛋白质免疫印迹对MAPK13的蛋白表达水平进行分析。最后使用针对MAPK13下游蛋白的小分子药物进行干预,验证是否符合MAPK13所调控的信号通路。6.诱导炎性中性粒细胞凋亡产生最佳抗炎作用的PNS治疗浓度的探索。通过斑马鱼切尾炎症模型中发现PNS能够在低浓度下诱导炎症中性粒细胞向炎症部位趋化迁移和促进凋亡的表型,并通过LPS进一步探索PNS特异性诱导中性粒细胞凋亡的可能应用前景。结果:1.中性粒细胞死亡的速度随PNS的浓度增高而加快,PNS浓度越高,中性粒细胞死亡越快。2.PNS只对中性粒细胞有特异性作用,而对其他髓系细胞,如对巨噬细胞、胸腺T细胞和造血干细胞的数量、形态无明显影响。3.PNS诱导中性粒细胞内源性死亡后伴有巨噬细胞吞噬作用,且PNS诱导的中性粒细胞死亡不能被细胞自噬及细胞坏死抑制剂所阻止。TUNEL和Caspase 3活性活体染色在PNS诱导中性粒细胞过程中呈阳性。4.PNS使MAPK13(p38δ)特异性在中性粒细胞中表达。并且使用MAPK13下游的PKD1和PTEN蛋白的小分子抑制剂也可以干扰PNS诱导中性粒细胞凋亡的过程。5.低浓度PNS能够特异性促进斑马鱼切尾炎症模型中中性粒细胞向炎症尾部趋化迁移和尾部炎症部位被激活的炎性中性粒细胞的凋亡,而对正常中性粒细胞不发生效应。结论:1.PNS可以特异性诱导中性粒细胞发生死亡;2.死亡方式为凋亡;3.PNS处理可以特异性诱导中性粒细胞内p3Dehydrogenase抑制剂8δ蛋白表达上调并激活,然后通过调控其下游PKD1和PTEN的活化与功能的信号通路来参与中性粒细胞凋亡;4.低浓度PNS(5mg/L)可以快速并特异性诱导中性粒细胞向炎症部位趋化迁移和诱导被激活(炎性)中性粒细胞发生凋亡,PNS为5mg/L浓度是能发挥最佳抗炎作用。

近年来,半花菁染料因具有优异selleck HPLC的光物理性能,被科研人员广泛用于荧光探针的设计。但传统半花菁染料仍存在较明显的溶剂化效应、发射波长较短、光稳定性差等问题,在生物细胞微环境的检测以及细胞器靶向定位的应用方面存在局限性。针对以上问题,本论文合成了具有减弱溶剂化效应的新型半菁荧光探针,主要工作内容如下:(1)以富电子的联噻吩基团作为低极性电子供体单元,吲哚啉碘鎓盐、喹啉碘鎓盐作受体单元及线粒体靶向基团,基于Knoevenagel反应合成粘度荧光探针BT-Qu((E)-2-(2-([2,2′-bithiophen]-5-yl)vinyl)-1-ethylquinolin-1-ium)和BT-In((E)-2-(2-([2,2′-bithiophen]-5-yl)vinyl)-1,3,3-trimethyl-3H-indol-1-ium)。基于强的分子内电荷转移作用,BT-Qu和BT-In最大发射波长分别为604 nm和614 nm,在水中的Stokes位移分别为154 nm和112 nm。相对于大多数含有氨基、羟基的粘度探针,BT-Qu和BT-In具有较弱的溶剂化效应,大大提高探针对粘度的检测灵敏度。由于具有经典的D-π-A结构,探针对粘度具有选择性强、快速响应(<1s)、光稳定性好、p H应用范围宽(4-9)等特点。细胞成像表明,两种探针具有低毒性和良好此网站的细胞膜透性,成功用于监测He La细胞和L929细胞线粒体中外源刺激引起的炎症过程中粘度的变化。更重要的是,两种探针可用于检测癌细胞铁死亡过程的粘度变化,成为探索炎症和铁死亡过程中线粒体粘度的有效工具。(2)在上述工作基础上,以联三噻吩作为低极性电子供体单元,nanoparticle biosynthesis苯并噻唑碘鎓盐、喹啉碘鎓盐作为受体单元,基于Knoevenagel反应合成DNA荧光探针TT-Tz((E)-2-(2-([2,2′:5′,2”-terthiophen]-5-yl)vinyl)-3-ethylbenzo[d]thiazol-3-ium)和TT-Qu((E)-2-(2-([2,2′:5′,2”-terthiophen]-5-yl)vinyl)-1-ethylquinolin-1-ium)。联三噻吩使探针具有更大的共轭结构和刚性平面,一方面减弱了溶剂化效应。另一方面,基于强分子内电荷转移作用,两种探针最大发射波长拓展到近红外光区,分别为684 nm和688 nm,在水中Stokes位移为Δλ_1=172 nm,Δλ_2=200 nm,长波长发射及大Stokes位移可有效降低背景干扰,提高细胞成像分辨率。TT-Tz和TT-Qu能够实现对ct-DNA的特异性识别,具有灵敏度(检测限为20.6 n M和2.09 n M)高、p H应用范围宽(p H=4-9)、光稳定性好、抗干扰能力强等特点。通过磷酸盐与探针相互作用实验和DNA热变性实验,证明当DNA小于1当量时,与探针以静电作用结合为主;当DNA浓度大于1当量时,与探针以嵌插作用结合为主。细胞成像实验证明,探针TT-Tz和TT-Qu具有低毒性及良好的生物膜透性,应用于线粒体中DNA成像检测。