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研究背景:中药三七(Panax notoginseng)在中医药记载已有千年历史,自古至今广泛应用于临床,尤其在外科外伤领域具有独特的消肿和抗炎疗效,被誉为“外科金疮圣药”。目前非常热门的中药产品如云南白药和片仔癀,其主要成分实际上都是三七。尽管三七的抗炎消肿疗效得到公认,且我们的课题组在前期的细胞实验研究中发现,三七可以促进中性粒细胞向炎症部位的趋化,并促使激活的炎性中性粒细胞发生凋亡。然而,三七的作用机制和原理仍不清楚。因此,本课题计划使用与人类基因相似度达87%的活体斑马鱼作为实验动物,利用斑马鱼身体透明的特点,观察三七对斑马鱼体内中性粒细胞的生理和病理影响,利用现代研究手段,探究中药三七的作用机制和途径。研究目的:本研究旨在通过使用带有多种特殊荧光标记的斑马鱼幼鱼胚胎作为实验动物模型,实现以下目标:1.探究中药三七对斑马鱼中性粒细胞的表型研究;2.研究三七对斑马鱼中性粒细胞的特异性作用;3.探究三七对斑马鱼中性粒细胞死亡的方式;4.探索三七产生抗炎作用的分子机制或通路;5.确定三七发挥最佳抗炎疗效的治疗浓度,以开发中药三七的新药用治疗场景。三七临床上长期以来广泛应用于治疗各种疾病,尤其是外科疾病中的跌打损伤等。根据中医理论,三七常被用于治疗具有炎症的疾病,如外伤出血、骨折、胸腹刺痛和跌打肿痛。近年来,通过现代技术,对三七的研究逐步揭示了其化学成分和药理活性。植物化学研究确定了三七中的多种生物活性化合物,包括黄酮、皂苷、氨基酸和挥发油等。其中,三七总皂苷(Panax Notoginseng Saponins,PNS)是其主要生物活性成分,是从三七植物根部提取的多种皂苷的混合物,其药理特性已广泛研究。三七已被发现具有强大的抗炎治疗作用,而关于其抗炎作用物质的研究主要基于PNS中的各种成分。同时,直接使用PNS也可有效缓解与炎症相关的疾病。然而,其作用机制仍需进一步研究。目前的证据表明,PNS有望成为治疗炎症及相关疾病的前景药物。由于PNS成分的复杂性以及现有提取工艺的相对落后,还需开展更多研究以充分了解其有效成分、影响治疗的潜在机制,并确定或开发其未来的应用场景,同时确保其安全性。为实现上述目标Colforsin IC50,本研究计划利用带有特殊荧光标记的斑马鱼幼鱼胚胎作为实验动物模型,通过观察斑马鱼中性粒细胞的变化,深入研究三七的作用immune surveillance机制。斑马鱼作为模型生物具有透明胚胎的特点,可清晰观察到三七对中性粒细胞的生理和病理变化。我们将运用现代研究手段,研究三七对斑马鱼中性粒细胞的发生作用表型,以了解其对细胞形态和功能的影响。此外,我们还将探究三七对中性粒细胞的特异性作用,揭示其针对炎症反应的机制。同时,我们将进一步研究三七产生抗炎作用的分子机制或通路,揭示其对炎症信号传导和调控的影响。最后,我们将通过测试不同浓度的三七,确定其在抗炎疗效方面的最佳治疗浓度,以期在临床上开发新的中药三七治疗场景。通过本研究,我们将进一步了解三七的药理作用,为其临床应用提供科学依据。同时,对三七的深入研究有助于扩大中药的应用领域,并为中医药的现代化发展做出贡献。中性粒细胞在人体内占据最丰富的粒细胞类型,约占50%-70%。它们是宿主防御多种传染性病原体(包括病毒、细菌、真菌和原生动物)的首要防线。中性粒细胞的主要功能是吞噬病原体并促进受损组织修复。然而,如果中性粒细胞失调,其参与的浸润和炎症反应机制可能对宿主造成危害。过度激活和不受控制的中性粒细胞浸润可导致炎症和自身免疫性疾病,如急性肺部炎症/损伤、缺血/再灌注损伤、类风湿性关节炎和脓毒症等。新型冠状病毒性肺炎近年来就是由于炎症失控导致肺部炎症渗出和肺实变,最终导致患者呼吸衰竭和死亡。中性粒细胞凋亡是机体平衡的一部分,在老化的中性粒细胞中会被触发,但在特定情况下也可能被诱导。例如,使用血清或抗体刺激病原体吞噬和细胞内杀伤作用会引发一种特定的细胞分化程序,最终导致吞噬作用诱导的细胞死亡(PICD)。由于中性粒细胞凋亡具有抗炎特性,这种机制似乎在感染被清除后促进组织修复方面非常适用。目前,针对这类疾病的治疗通常采用非甾体抗炎药和抗细胞因子疗法。然而,这些疗法在一定程度上会对先天性和适应性免疫系统造成损害,一旦失衡,就可能导致炎症扩散甚至无法控制。因此,需要开发新的治疗策略来清除过量的炎性中性粒细胞。斑马鱼是一种小型硬骨鱼,在过去三十年中逐渐成为炎症研究的关注对象。斑马鱼与人类具有高度的遗传相似性,其基因中超过87%与人类相似。斑马鱼拥有心脏、肝脏、胰腺、肠道等器官,其免疫系统在功能上与人类相似,并具备多个保守的炎症信号通路和免疫细胞类型。这使得斑马鱼成为研究炎症机制的简化模型生物体的理想选择。斑马鱼的造血系统与其他脊椎动物相似,包含多个细胞分化阶段。斑马鱼的胚胎和幼体具有光学透明性,这使得可以进行非侵入性成像研究炎症反应的动态过程。这种特性使得我们能够实时观察炎症的发展和进展。此外,斑马鱼具有快速繁殖的特点,能够产生大量后代,从而使得进行高通量筛选来评估潜在的抗炎化合物或基因修饰成为可能。这有助于确定潜在的药物靶点或指导新疗法的开发。因此,斑马鱼是评估先天免疫反应的宝贵工具,其独特的特征使其成为比啮齿动物模型更优越的选择。在动物研究中,已经有多篇报道关于PNS在缓解炎症方面的作用。然而,PNS中发挥抗炎效果的具体有效分子仍然不清楚,更重要的是,PNS发挥抗炎效果的相关机制也尚未明确,需要进一步的研究。本课题旨在通过对三七特异性诱导斑马鱼中性粒细胞凋亡表型机制的探索,开展与中药物质基础及作用相关的研究方向。我们将结合学科交叉和现代科学技术,全面挖掘三七的抗炎特性的具体分子机制。材料与方法:1.药物处理及动物模型。将受精后72小时(72 hpf)的可标记中性粒细胞的Tg(lyz:Ds Red2)斑马鱼幼鱼分别暴露在0mg/L,5mg/L,10mg/L和15 mg/L的PNS中,6小时后在荧光显微镜下进行观察成像,主要观察中性粒细胞受PNS影响的表型情况。2.PNS对中性粒细胞特异性评价研究。通过使用标记巨噬细胞,胸腺T细胞,造血干细胞的转基因鱼系,评价PNS对除中性粒细胞之外的其他髓系细胞的影响。3.PNS诱导中性粒细胞死亡方式的探究。使用巨噬细胞和中性粒细胞共同标记的转基因鱼系观察单细胞分辨率下PNS诱导中性粒细胞死亡过程。使用细胞自噬,细胞坏死性凋亡等多种细胞死亡抑制剂,观察是否影响PNS诱导的中性粒细胞死亡过程。使用TUNEL染色及Caspase 3活性染色判断PNS诱导中性粒细胞是否通过细胞凋亡途径。4.小分子筛选PNS诱导中性粒细胞凋亡的信号通路探索。使用RNA-seq检测PNS诱导变化的转录组,并分析具有显著变化的基因及信号通路。通过显著变化基因富集的信号通路结合与中性粒细胞凋亡有关的文献调研,使用大量小分子药物对PNS诱导中性粒细胞凋亡的过程进行干预,欲寻找可调控该过程的小分子药物及对应分子信号。5.PNS诱导中性粒细胞凋亡的分子机制研究。使用抗体显色对MAPK13时空表达情况进行探索,并结合蛋白质免疫印迹对MAPK13的蛋白表达水平进行分析。最后使用针对MAPK13下游蛋白的小分子药物进行干预,验证是否符合MAPK13所调控的信号通路。6.诱导炎性中性粒细胞凋亡产生最佳抗炎作用的PNS治疗浓度的探索。通过斑马鱼切尾炎症模型中发现PNS能够在低浓度下诱导炎症中性粒细胞向炎症部位趋化迁移和促进凋亡的表型,并通过LPS进一步探索PNS特异性诱导中性粒细胞凋亡的可能应用前景。结果:1.中性粒细胞死亡的速度随PNS的浓度增高而加快,PNS浓度越高,中性粒细胞死亡越快。2.PNS只对中性粒细胞有特异性作用,而对其他髓系细胞,如对巨噬细胞、胸腺T细胞和造血干细胞的数量、形态无明显影响。3.PNS诱导中性粒细胞内源性死亡后伴有巨噬细胞吞噬作用,且PNS诱导的中性粒细胞死亡不能被细胞自噬及细胞坏死抑制剂所阻止。TUNEL和Caspase 3活性活体染色在PNS诱导中性粒细胞过程中呈阳性。4.PNS使MAPK13(p38δ)特异性在中性粒细胞中表达。并且使用MAPK13下游的PKD1和PTEN蛋白的小分子抑制剂也可以干扰PNS诱导中性粒细胞凋亡的过程。5.低浓度PNS能够特异性促进斑马鱼切尾炎症模型中中性粒细胞向炎症尾部趋化迁移和尾部炎症部位被激活的炎性中性粒细胞的凋亡,而对正常中性粒细胞不发生效应。结论:1.PNS可以特异性诱导中性粒细胞发生死亡;2.死亡方式为凋亡;3.PNS处理可以特异性诱导中性粒细胞内p3Dehydrogenase抑制剂8δ蛋白表达上调并激活,然后通过调控其下游PKD1和PTEN的活化与功能的信号通路来参与中性粒细胞凋亡;4.低浓度PNS(5mg/L)可以快速并特异性诱导中性粒细胞向炎症部位趋化迁移和诱导被激活(炎性)中性粒细胞发生凋亡,PNS为5mg/L浓度是能发挥最佳抗炎作用。

近年来,半花菁染料因具有优异selleck HPLC的光物理性能,被科研人员广泛用于荧光探针的设计。但传统半花菁染料仍存在较明显的溶剂化效应、发射波长较短、光稳定性差等问题,在生物细胞微环境的检测以及细胞器靶向定位的应用方面存在局限性。针对以上问题,本论文合成了具有减弱溶剂化效应的新型半菁荧光探针,主要工作内容如下:(1)以富电子的联噻吩基团作为低极性电子供体单元,吲哚啉碘鎓盐、喹啉碘鎓盐作受体单元及线粒体靶向基团,基于Knoevenagel反应合成粘度荧光探针BT-Qu((E)-2-(2-([2,2′-bithiophen]-5-yl)vinyl)-1-ethylquinolin-1-ium)和BT-In((E)-2-(2-([2,2′-bithiophen]-5-yl)vinyl)-1,3,3-trimethyl-3H-indol-1-ium)。基于强的分子内电荷转移作用,BT-Qu和BT-In最大发射波长分别为604 nm和614 nm,在水中的Stokes位移分别为154 nm和112 nm。相对于大多数含有氨基、羟基的粘度探针,BT-Qu和BT-In具有较弱的溶剂化效应,大大提高探针对粘度的检测灵敏度。由于具有经典的D-π-A结构,探针对粘度具有选择性强、快速响应(<1s)、光稳定性好、p H应用范围宽(4-9)等特点。细胞成像表明,两种探针具有低毒性和良好此网站的细胞膜透性,成功用于监测He La细胞和L929细胞线粒体中外源刺激引起的炎症过程中粘度的变化。更重要的是,两种探针可用于检测癌细胞铁死亡过程的粘度变化,成为探索炎症和铁死亡过程中线粒体粘度的有效工具。(2)在上述工作基础上,以联三噻吩作为低极性电子供体单元,nanoparticle biosynthesis苯并噻唑碘鎓盐、喹啉碘鎓盐作为受体单元,基于Knoevenagel反应合成DNA荧光探针TT-Tz((E)-2-(2-([2,2′:5′,2”-terthiophen]-5-yl)vinyl)-3-ethylbenzo[d]thiazol-3-ium)和TT-Qu((E)-2-(2-([2,2′:5′,2”-terthiophen]-5-yl)vinyl)-1-ethylquinolin-1-ium)。联三噻吩使探针具有更大的共轭结构和刚性平面,一方面减弱了溶剂化效应。另一方面,基于强分子内电荷转移作用,两种探针最大发射波长拓展到近红外光区,分别为684 nm和688 nm,在水中Stokes位移为Δλ_1=172 nm,Δλ_2=200 nm,长波长发射及大Stokes位移可有效降低背景干扰,提高细胞成像分辨率。TT-Tz和TT-Qu能够实现对ct-DNA的特异性识别,具有灵敏度(检测限为20.6 n M和2.09 n M)高、p H应用范围宽(p H=4-9)、光稳定性好、抗干扰能力强等特点。通过磷酸盐与探针相互作用实验和DNA热变性实验,证明当DNA小于1当量时,与探针以静电作用结合为主;当DNA浓度大于1当量时,与探针以嵌插作用结合为主。细胞成像实验证明,探针TT-Tz和TT-Qu具有低毒性及良好的生物膜透性,应用于线粒体中DNA成像检测。

目的：探讨总胆汁酸/血小板对乙型肝炎病毒（HBV）相关肝纤维化的诊断价值。方法：选择海南医学院第一附属医院2021年2月～2022年12月感染科收治160例慢性HBV感染患者，根据其肝活检的肝纤维化程度分为两组Antiviral bioassay：显著性肝纤维化组、非显著性肝纤维化组，对比观察两组总胆汁酸/血小板情况及其与肝纤维化的LY294002 IC50相关性，并以及其他无创性肝纤维化诊断模型给予效能评价。结果：（1）与非显著性肝纤维化组比较，显著性肝纤维化组总胆汁酸水平升高，血小板水平下降，总胆汁酸/血小板的水平明显升高，差异都具有统计学意义（P<0.05）。（2）血小板随着肝纤维化程度的增加而降低，总胆汁酸随着肝纤维化程度的增加而增加，总胆汁酸/血selleckchem GSK J4小板随着肝纤维化程度的增加而增加。（3）总胆汁酸/血小板、APRI、FIB-4、弹性成像在诊断肝纤维化程度的曲线下面积分别为0.69、0.57、0.56、0.68。结论：总胆汁酸/血小板对HBV相关肝纤维化的诊断效能不亚于其他肝纤维化诊断方法，且无创、简单、便捷，值得临床进一步推广验证。

铁是地球含量最为丰富的元素,为微生物、植物、动物和人类等生命体所必需,对生命维护至关重要;铁离子介导的氧化压力是生命起源的原始动力.铁是血红蛋白、过氧化氢酶和过氧化物酶等众多关键蛋白和酶的活性成分.铁离子是氧化还原体系不可缺少的因子,在新陈代谢、生物催化、呼吸链电子传递、氧气运输、能量维持、免疫调控等方面都发挥重要作用.铁不仅是生命延续的必需元素,也是细胞程序性坏死-铁死亡的必要组分.铁稳态失衡是贫血、血色病、肿瘤、心脑血管疾病、糖尿病等众多疾病发生的关键病因.靶向调Hepatic angiosarcoma控铁离子稳态已成为防治众多重大疾病的有效策略,并有临床新药广泛使用.随着科学与技术的迅猛发展,铁离子对生命与健康的意义远比人类预测的更深远和复杂.近年铁死亡被广泛持续关注,成为全球生命医学十大热点之一.铁死亡和铁代谢的科学研究范式呈现出交叉性、多样化、多领域及集成购买Panobinostat式发展态势.因此,我们提出“铁科学(Ferrology)”,它是一门以铁元素为生命核心要素的新兴交叉新学科.该学科体Empagliflozin抑制剂系主要探索铁离子驱动生命起源及生命全过程的科学规律,并系统性研究涵盖铁离子从“分子-细胞-个体-群体”多层次到“全生命周期、多维度、跨物种间”个性及共性规律.本文介绍与讨论了铁科学的定义、研究范畴及未来方向.铁科学的界定将引领铁相关研究的范式变革,相信这一新兴学科体系的构建将极大推动铁研究诸多领域交叉融合,并不断向广度及深度推进,为防控疾病维护人类健康提供科学支撑.

目的本研究的目的是设计具有脊髓损伤(SCI)靶向功能的巨噬细胞膜仿生纳米脂质体(M-Lips),使其作为盐酸米诺环素(MH)和硫酸葡聚糖(DS)的药物载体,靶向递送药物跨越血脊髓屏障(BSCB)至损伤组织,发挥抗炎和神经保护作用治疗SCI,促进SCI后运动功能的恢复。方法从小鼠腹腔中提取原代巨噬细胞,使用免疫荧光和流式细胞术对原代巨噬细胞进行验证。通过梯度离心法从原代巨噬细胞中提取原代巨噬细胞膜,使用透射电镜(TEM)观察细胞膜。通过薄膜水化法一步制备了巨噬细胞膜仿生修饰的纳米载药脂质体(MH-DS@M-Lips)。通过TEM,激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)共定位分析,免疫蛋白印迹法,动态光散射(DLS),载药量(DL)测定,包封率(EE)测定,药物释放检测,稳定性检测对MH-DS@M-Lips进行表征。在体外实验中,通过噻唑蓝比色法(MTT)考察MH-DS@M-Lips的生物安全性。通过Transwell模型模拟BSCB验证MH-DS@M-Lips的跨BBAY 73-4506使用方法SCB能力,同时使用此模型研究BV2细胞对MH-DS@M-nanomedicinal productLips的摄取。建立LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型,通过免疫荧光和流式细胞术研究MH-DS@M-Lips的抗炎作用。建立过氧化氢(H_2O_2)诱导的VSselleck抑制剂C4.1细胞凋亡模型,通过免疫荧光和流式细胞术验证MH-DS@M-Lips的神经保护作用。在动物实验中,使用Allen’s打击法构建C57BL/6J小鼠的SCI模型,使用小动物多功能活体荧光成像和组织切片荧光验证MH-DS@M-Lips的SCI靶向能力。通过化学荧光标记,免疫荧光,试剂盒检测,免疫蛋白印迹法,验证MH-DS@M-Lips的降钙离子浓度作用,抗炎作用和神经保护作用,同时,通过免疫荧光,尼氏染色和运动学评价评估MH-DS@M-Lips治疗的SCI小鼠的运动功能恢复情况。结果免疫荧光和流式细胞术验证了原代巨噬细胞的成功提取,并且使用TEM观察到了提取的细胞膜囊泡。在TEM下观察,MH-DS@M-Lips为粒径在140 nm左右的单分散类球形纳米粒。CLSM共定位分析结果表明巨噬细胞膜成功掺入脂质体,免疫蛋白印迹法表明MH-DS@M-Lips继承了巨噬细胞膜的功能蛋白。载药量,包封率,以及药物释放的检测证明了MH-DS@M-Lips的成功制备和MH-DS@M-Lips的缓释作用。DLS表明MH-DS@M-Lips具有良好的稳定性。体外试验中,MH-DS@M-Lips高效的跨越了Transwell模型模拟的BSCB,并且可以被BV2细胞摄取。化学荧光标记,免疫荧光实验和流式细胞术结果显示MH-DS@M-Lips对LPS诱导的RAW264.7细胞有良好的炎症抑制作用,并且MH-DS@M-Lips可以显著性降低H_2O_2诱导的VSC4.1细胞中钙离子浓度的激增,同时降低了活性氧强度,实现神经保护作用。在小鼠体内实验中,小动物多功能活体荧光成像结果显示MH-DS@M-Lips可以跨越BSCB并富集在SCI组织中。免疫荧光,试剂盒检测,化学荧光标记和免疫蛋白印迹法显示,MH-DS@M-Lips有效的抑制了炎症的爆发,降低了损伤部位的钙离子激增,抑制损伤部位氧化应激,实现了神经保护作用。小鼠行为学评价,尼氏染色和免疫荧光结果显示MH-DS@M-Lips有效的促进了SCI小鼠的运动功能恢复。结论研究结果表明,使用薄膜水化法一步制备的MH-DS@M-Lips成功继承了巨噬细胞膜的功能蛋白并实现载药,可以跨越BSCB靶向递送MH和DS至SCI小鼠的损伤组织。到达损伤组织后,MH-DS@M-Lips原位减少了钙离子的激增,并且持续发挥了炎症抑制作用,最终起到神经保护的效果,实现了SCI小鼠的运动功能恢复。因此,MH-DS@M-Lips是一种潜在的治疗SCI的有效策略。

有机磷阻燃剂(organophosphorus flame retardants,OPFRs)正越来越多地被用于众多行业。然而,OPFRs与环境污染、动物健康风险有关,对多种产业特别是对养殖业有较大影响。2-乙基己基二苯基磷酸酯(2-ethylhexyl diphenyl phosphate,EHDPHP)是一种新兴的、被广泛应用的有机磷阻燃剂,既往研究已证实EHDPHP对鼠类Tumor immunology具有毒性作用,但并未深入研究其毒性损伤机制。目前,没有任何研究评估EHDPHP对禽类的毒性作用。因此,本试验以鸡肝脏作为EHDPHP毒性影响的靶器官,探讨EHDPHP暴露对鸡的毒性作用及其机制。本试验选用90只经预饲养的7日龄海兰白羽蛋鸡,用不同浓度EHDPHP进行灌胃处理,并在试验的第14天、28天和42天采取肝脏进行检测分析。通过鸡临床表现和体重变化检查EHDPHP对鸡生长发育的影响;通过鸡肝脏眼观变化、病理组织学和超微病理学变化观察EHDPHP对鸡肝组织造成的形态结构损伤;通过生化试剂盒检测鸡肝组织内AST、ALT的活性变化,判断更多EHDPHP对鸡肝功能造成的影响;通过检测鸡肝组织内SOD、GSH-Px的活性变化以及MDA的含量变化分析EHDPHP对鸡肝脏氧化应激指标的影响;通过电感耦合等离子体质谱法检测鸡肝组织中铁含量变化,并通过实时荧光定量PCR法和Western Blot法检测铁死亡相关因子(铁代MRTX849抑制剂谢相关因子FTH-1、TFR,铁死亡标志因子GPX4、ACSL4、LOX、COX-2)的表达变化;通过实时荧光定量PCR法、Western Blot法以及ELISA法检测炎症因子(NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α)的表达变化。结果发现,EHDPHP抑制了鸡的生长和发育。剖检、组织病理和超微病理的观察结果清楚地反映了EHDPHP暴露对肝脏造成的损害。具体表现在肝脏体积肿大、呈暗红色;光学显微镜下可见肝脏呈不同程度的淤血、肝窦狭窄、肝板紊乱,肝细胞呈空泡变性、坏死,炎性细胞浸润;透射电镜下可见暴露组鸡肝细胞线粒体萎缩、双分子层膜结构增厚,线粒体嵴减少,部分线粒体嵴消失。生化试剂盒检测结果显示肝组织AST和ALT的活性水平随着EHDPHP灌服剂量的增加而下降(P<0.05)。同时,EHDPHP暴露鸡肝组织中的氧化应激水平随着灌服剂量的增加而显著升高(P<0.05);肝组织的铁含量显著增加(P<0.05),铁死亡相关因子ACSL4、COX-2的m RNA和蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),GPX4的m RNA和蛋白的表达水平显著下降(P<0.05);LOX、TFR的m RNA相对表达显著上调(P<0.05),FTH-1的m RNA相对表达显著下调(P<0.05)。EHDPHP暴露导致肝组织NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA相对表达水平随着灌服剂量的增加而显著增加(P<0.05),p NF-κB/NF-κB的比值以及IL-1β、IL-6、TNF-α的含量显著升高(P<0.05)。上述研究结果表明,EHDPHP可通过氧化应激和铁死亡对鸡肝脏造成损伤,促进炎症因子的合成和分泌,并且影响鸡的生长发育。本研究为EHDPHP暴露的诊断、防制提供科学的试验依据。

雷公藤红素和雷公藤内酯甲是中药雷公藤的主要三萜活性成分， 具有抗肿瘤、抗炎及免疫抑制等药理活性， 是雷公藤相关中药制剂发挥临床疗效的物质基础。通过解析活性成分生源途径， 优化基因元件并利用“细胞工厂”异源获取将是未来“低成本、高效率”获得雷公藤中三萜活性成GDC-0068分的有效途径。CYP712Ks是参与雷公藤木栓烷型和齐墩果烷型三萜骨架修饰的第一个细胞色素P450酶， 发挥C-29位羧基化功能， 可催化木栓酮生成美登木酸， 催化β-香树Informed consent素生成3-表卡通酸。本研究以四条多功能TwCYP712K1/2/3/5为研究对象， 利用酿酒酵Talazoparib体内母体内功能表征， 明确其催化功能及底物选择偏好性; 通过同源建模和分子对接， 明确蛋白与底物结合空间结构， 进而对蛋白活性口袋内差异氨基酸进行互相突变， 阐明决定催化功能和底物结构选择的关键氨基酸。本研究共构建了63个突变体元件， 解析了影响TwCYP712Ks羧基化功能的氨基酸位点， 特别是揭示了影响TwCYP712K2对齐墩果烷型和木栓烷型三萜底物选择性的关键氨基酸， TwCYP712K2~(F127I)与TwCYP712K2~(A227T)突变体将导致产物比例发生逆转。本研究以同源蛋白比对及相互突变的方式对TwCYP712Ks四条蛋白进行半理性设计， 阐明多个决定蛋白催化功能的氨基酸位点， 获得系列活性提升或改变的突变体， 为雷公藤三萜活性成分的生物合成提供丰富的催化元件， 并初步解析了C-29位羧基化机制。

该研究以湘Coroners and medical examiners红薹1号红菜薹（XHT1H,R）和义农50天菜心（YN50T,G）为研究对象，采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）技术对2种菜薹类黄酮类物质进行检测，并采用主成分分析、热图分析和正交偏最小二乘-判别分析等方法对红菜薹和菜心代谢组学进行分析，筛选差异代谢物。主成分分析发现，两种菜薹化合物含量的分布具有明显差异。正交偏最小二乘-判别分析结果表明，两种菜薹中共鉴定到170种差异类黄酮类代谢物，包括56种黄酮醇类、38种花青素类、VX-661研究购买32种黄酮类等代谢物。其中，花青素中包括25种矢车菊素类糖苷，6种飞燕草素糖苷，3种芍药花素苷，3种牵牛花素苷，且红菜薹比菜心中含量高的差异倍数前十的代谢物中，有6种为矢车菊素。该研究从代谢组学角度分析了不同菜薹类黄酮成分差异，推测矢车Y-27632研究购买菊素、飞燕草素、芍药花素和牵牛花素与红菜薹的色泽有关，其结果为进一步研究菜薹茎部色泽的形成机制和色素的利用提供参考。

目的：探究寿胎丸合四君子汤加减在肾脾两虚型早期复发性流产患者中的应用效果。方法：选取2019biosilicate cement年8月至2022年8月收治的确诊为肾脾两虚型早期复发性流产患者64例，按照随机数字表法分为对照组和观察组，各32例。对照组采用低分子肝素和地屈孕酮片治疗selleck HPLC，观察组在对照组基础上加用寿胎丸合四君子汤治疗。对比两组临床疗效、中医证候积分、购买Panobinostat凝血功能、血清激素水平和保胎成功率。结果：观察组治疗总有效率高于对照组（P<0.05）；治疗后两组中医证候积分均降低，且观察组低于对照组（P<0.05）；治疗后两组维蛋白原（FIB）和D-二聚体（D-D）水平降低，凝血酶原活动时间（APTT）时间延长，且观察组FIB和D-D水平低于对照组，APTT长于对照组（P<0.05）；治疗后两组孕酮（PROG）和血清绒毛膜促性腺激素（β-HCG）水平均升高，且观察组高于对照组（P<0.05）；观察组保胎成功率高于对照组（P<0.05）。结论：寿胎丸合四君子汤加减治疗肾脾两虚型早期复发性流产患者疗效确切，利于改善凝血功能，降低中医证候积分，提高血清激素水平，且保胎成功率高。

C-H键活化被称为有机化学界的“圣杯”,一直是有机化学的研究热点。近年来越来越多的化学家开始关注远程C-H键的活化,同时,随着自由基化学的兴起,通过自由基诱导的远程C-H键活化被广泛研究。自由基诱导的远程C-H键活化主要通过分子内氢迁移(HAT)过程来实现,其中大部分是由氮中心自由基和氧中心自由基诱导引发的。而产生氮、氧中心自由基通常需要苛刻的反应条件或者预制复杂的底物分子。由碳中心自由基诱导的远程C-H键活化,由于反应前后化合物键能差距太小,分子内氢转移过程通常难以实现,成功实例较少。为此,我们开发出C-H键活化接力策略(CHAR):即PLX5622使用方法在温和的有氧条件下产生碳中心自由基,随后迅速与氧气偶联,产生过氧自由基中间体从而诱导分子内HAT,活化合适位点的C-H键,产生目标自由基,经后续反应得到官能化的产物,从而实现自由基诱导的远程C-H键活化。本论文主要利用C-H键活化接力策略,高效的合成了一系列吡咯衍生物,为自由基远程C-H键活化以及吡咯的合成和官能化提供了新方法。PCI-32765体外1、通过对4-溴三苯胺六氯锑酸盐(TBPA)反离子的利用,结合C-H键活化接力策略(CHAR)成功实现了对脯氨酸酯类化合物远程C-H键的活化,合成了一系列氯代吡咯衍生物,为促进反离子参与的反应提供了新路径。该反应具有良好的官能团耐受性,可兼容多种活性官能团,并且反应可以放大至克级Antiretroviral medicines,可用于氯代吡咯的大规模合成。2、结合上一部分的工作内容,使用溴化铜作为氧化剂和溴原子供体,利用C-H键活化接力策略(CHAR),成功实现了脯氨酸酯的脱氢芳构化和远程C-H键的溴化,以良好的产率和高选择性得到了 一系列4-溴代吡咯衍生物,为高选择性的远程C-H键活化拓展了新方式。3、利用TBPA/O2的引发体系,通过添加醋酸铜(Cu(OAc)2),高效的实现了吡咯、吲哚和其它富电子芳烃的C-H键氯化。该反应表明TBPA可以作为一种新型的氯化试剂参与到氯代芳烃及氯代杂芳烃的高效合成。