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目的 探讨不同抗菌药物对幽门螺杆菌（Hp）感染合并消化性溃疡的治疗效果及对微生物菌群的影响。方法 选取2021年1月至2022年10月葫芦岛市中心医院收治的400例Hp感染合并消化性溃疡患者作为研究对象，采用随机数字表法将其分为A、B、C、D组，每组100例。所有患者均采用抗菌药物+艾司奥美拉唑+枸橼酸铋钾治疗，其中A组患者予以左氧氟沙星+呋喃唑酮，B组患者予以甲硝唑+阿莫西林，C组患者予以阿莫西林new infections+呋喃唑酮，D组应用克拉霉素+阿莫西林。比较4组患者临床疗效、炎症因子水平、肠道微生物菌群变化、不良反应及Hp清除率。结果 D组治疗有效率高于A、B、C组（P<0.05），但A、B、C组治疗有效率比较差异无统计学意义（P>0.05）。治疗后4组患者白细胞介素-2(IL-2)水平升高，D组高于A、B、C组，C组高于A、B组，C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)Compound C供应商水平降低，D组低于A、B、C组，C组低于A、B组，差异有统计学意义（P<0.05），但A、BNSC 127716价格组比较差异无统计学意义（P>0.05）。治疗后4组患者乳酸杆菌、双歧杆菌以及类杆菌水平升高，D组高于A、B、C组，C组高于A、B组，大肠杆菌及粪肠球菌水平降低，D组低于A、B、C组，C组低于A、B组，差异有统计学意义（P<0.05），但A、B组比较差异无统计学意义（P>0.05）。4组均无严重不良反应发生，A、C、D组不良反应发生率比较差异无统计学意义（P>0.05），但B组不良反应发生率高于A、C、D组（P<0.05）;D组Hp清除率高于A、B、C组（P<0.05），但A、B、C组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 Hp感染合并消化性溃疡采用两种抗生素+艾司奥美拉唑+枸橼酸铋钾治疗具有一定临床疗效，但应用克拉霉素+阿莫西林作为抗菌药物进行治疗疗效更显著，能够有效降低患者炎症因子水平，改善肠道菌群结构，提升Hp清除率，且安全性较高。

目的:随着幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)耐药率的增高,很多根除方案疗效有所下降,而现在人们对根除H.pylori的认识及疗效要求也均提高,因此,迫切需要探索新的治疗药物和方案。目前对含米诺环素(Minocycline,MINO)铋剂四联方案的有效性和安全性还没有共识,本研究通过对比分析含米诺环素与含呋喃唑酮(Furazolidone,FZD)铋剂四联方案初次根除H.pylori的疗效,以探索更加安全有效的四联根除方案。方法:选biogas technology取2021年3月至2022年10月因上消化道不适于济宁市第一人民医院消化内科就诊的H.pylori阳性患者160例,随机分为米诺环素(MINO)组和呋喃唑酮(FZD)组各80例。MINO组:雷贝拉唑20mg bid,米诺环素100mg bid,阿莫西林1g bid,枸橼酸铋钾220mg bid,疗程14天。FZD组:雷贝拉唑20mg bid,呋喃唑酮100mg bid,阿莫西林1g bid,枸橼酸铋钾220mg bid,疗程14天。通过电话或门诊随访记录患者的药物不良反应、临床症状缓解情况、药物依从性及终止治疗4周以上~(13)C-或~(14)C-尿素呼气实验检测结果,分析比较两组方案的根除率、不良反应发生率、药物依从性、症状缓解率、成本效果比及增量成本KD025配制-效果比。结果:MINO组和FZD组在Baricitinib临床试验ITT分析中根除率分别为88.75%和86.25%,在PP分析中根除率分别为92.21%和90.79%,两组间根除率对比差异均无统计学意义(P>0.05);MNIO组和FZD组不良反应发生率分别为16.9%和14.5%,对比差异无统计学意义(P>0.05);MINO组和FZD组患者的药物依从性分别为96.1%和94.7%,对比差异无统计学意义(P>0.05);MINO组和FZD组的临床症状缓解率分别为89.6%和86.8%,对比差异无统计学意义(P>0.05);MINO组和FZD组的成本-效果比分别为3.60和2.21,MINO组较FZD组的增量成本-效果比值为92.39。结论:含米诺环素与含呋喃唑酮铋剂四联方案均可取得令人满意的根除效果,含呋喃唑酮铋剂四联方案更具成本优势,两种方案均为高效、安全、经济的治疗方案,值得在临床推广应用。

目的 探究小檗碱是否能够通过调控核因子(NF)-κB/诱导型一氧化氮合酶/环氧合酶(iNOS-COX)-2信号通路对睡眠剥夺(SD)大鼠认知功能产生影Severe pulmonary infection响。方法 90只大鼠随机分为对照组、睡眠剥夺(SD)组、小檗碱低剂量组[小檗碱-L组，30 mg/(kg·d)]、小檗碱中剂量组[小檗碱-M组，60 mg/(kg·d)]、小檗碱高剂量组[小檗碱-H组，120 mg/(kg·d)]、艾司唑仑组[0.1 mg/(kg·d)],每组各15只，药物处理7 d后通过平台水环境法进行大鼠SD模型构建。通过Morris水迷宫实验和Y迷宫实验检测逃避潜伏期和行为正确率；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组海R428配制马组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-17和血清中S100B、神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达水平；试剂盒检测海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平；Western印迹检测海马组织中NFDorsomorphin临床试验-κB p-p65、iNOS、COX-2蛋白表达水平。结果 与对照组比较，SD组逃避潜伏期，海马组织中TNF-α、IL-6、IL-17、MDA水平，血清中S100B和NSE水平及海马组织中NF-κB p-p65、iNOS、COX-2蛋白水平明显升高，行为正确率和海马组织中SOD、GSH-Px水平明显降低(均P<0.05)。与SD组比较，小檗碱-L、M、H组和艾司唑仑组逃避潜伏期，海马组织中TNF-α、IL-6、IL-17、MDA水平，血清中S100B和NSE水平及海马组织中NF-κB p-p65、iNOS、COX-2蛋白水平均明显降低，行为正确率和海马组织中SOD、GSH-Px水平明显升高(均P<0.05)。小檗碱-H组与艾司唑仑组比较上述指标无明显差异(P>0.05)。结论 小檗碱能够对SD大鼠认知功能产生保护作用，其机制可能与调控NF-κB/iNOS-COX-2信号通路，并减轻炎症和氧化应激损伤有关。

目的:汉化简化版青光眼病人用药自我效能问卷（SVGMSEQ），并检验其信度和效度3-Methyladenine体内。方法:通过直译、回译、文化调试和预调查形成中文版SVGMSEQ。便利抽取重庆市某三级甲等医院157例青光眼病人进行调查，对该问卷进行信度和效度检验。结果:中文版SVGMSEQ由用药依从自我效能量表（10个条目）和滴注眼药自我效能量表（6个条目）2个子量表组成，共计16个条目。2个子量表的Cselleck合成ronbach′s α系数分别为0.924,0.818，折半信度分别为0.892和0.827，重测信度分别为0.842和0.903。中文版SVGMSEQ的量表水平Brain biomimicry内容效度（S-CVI）为0.938，条目水平内容效度（I-CVI）为0.833～1.000；对2个子量表分别进行探索性因子分析均提取1个公因子，累计方差贡献率分别为62.74%和55.01%。结论:中文版SVGMSEQ具有良好的信度和效度，可作为我国青光眼病人用药自我效能的评估工具。

目的 基于RAS同源基因家族成员相关激酶(ROCK)/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)4信号通路探究刺芒柄花素对2型糖尿病大鼠内质网应激损伤及肾功能的影响。方法 SPF级健康8周龄雄性C57BL/6大鼠60只，随机分为5组，各12只，健康组、模型组、刺芒柄花素低、中、高组，除健康组外均建立2型糖尿病大鼠模型，刺芒柄花素低组、刺芒柄花素中组、刺芒柄花素高组分别给予20、40、100 mg/kg刺芒柄花素灌胃，其余组别灌胃等体积生理盐水。采用自动生化分析仪测定肾功能指标。苏木素-伊红(HE)染色与Masson染色观察大鼠肾组织病形态。TUNEL检测肾小管上皮细胞凋亡。免疫组化检测RAS同源基因家族成员(Rho)A、NOX4、ROCK阳性表达。Western印迹检测内质网应激相关蛋白表达。结果 HE染色结果显示：健康组肾脏组织结构正常；模型组肾小球有一定程度萎缩，组织结构排列不均匀，并且有肿胀、脱落现象、还存在空泡样变性、鲍曼囊腔扩，而经过刺芒柄花素干预后，上述情况有所改善，且呈现出明显的剂量依赖性。Masson染色结果显示：健康组肾组织正常；模型组肾小球、肾小管基底膜增厚，产生空泡样病变，肾间质胶原纤维沉积明显；在经过刺芒柄花素干预后上述状况明显改善，且呈现出明显的剂量依赖性。健康组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著低于模型组(P<0.05)。模型组24 h MAUImidazole ketone erastin化学结构、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoMG132体内实验剂量A、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素低组(P<0.05)。刺芒柄花素低组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素中组(P<0.05)。刺芒柄花素中hip infection组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素高组(P<0.05)。结论 刺芒柄花素可能是通过调控Rho/ROCK/NOX4信号通路抑制了2型糖尿病大鼠内质网应激，改善肾功能，对肾脏起保护作用。

环磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate,cAMP)由三磷酸腺苷在腺苷酸环化酶的催化下环化而成,作为第二信使广泛存在于生物体内,对各项代谢活动起着重要的调节作用确认细节。在微生物细胞内,ATP不仅是cAMP的直接前体物质,同时为细胞代谢活动正常运行提供能量。因此,适时提高胞内ATP水平有利于增强cAMP的发酵性能。本文以实验室筛选并保藏的节杆菌(Arthrobacter sp.CCTCC 2013431)为生产菌株,通过外源添加低聚磷酸盐,提高胞内ATP水平,增强cAMP发酵性能。利用转录组测序等技术,从不同维度分析低聚磷酸盐促进cAMP发酵合成的生理机制,并提出基于补救途径和ATP高效供给的cAMP高产发酵工艺。具体研究成果如下所示:(1)通过摇瓶实验发现24 h添加2 g/L-broth六偏磷酸钠可以显著提高cAMP的产量,最大达到2.82 g/L,与空白批次相比提高69.88%。在7 L发酵罐上进行发酵实验,发现添加六偏磷酸钠批次的cAMP产量达到3.64 g/L,与空白批次相比提高33.82%,细胞活性与呼吸强度均得到显著提高。对糖代谢、能量代谢以及cAMP合Medication use成途径中相关基因转录水平分析发现,葡萄糖激酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、细胞色素氧化酶、聚磷酸盐酶、腺苷酸环化酶和过氧化氢酶等编码基因转录水平显著上调,表明六偏磷酸钠激活了一条独立于电子传递链之外的ATP合成途径,强化氧化磷酸化过程,强化了磷酸戊糖途径的代谢通量,为cAMP的合成提供了充足的前体物质。同时,核苷酸分解途径相关酶编码基因的转录水平大幅降低,副产物的合成受到抑制。此外,六偏磷酸钠显著提高了胞内还原酶以及与细胞壁/膜合成相关基因的转录水平,提高了细胞抗氧化能力,维持了细胞正常形态和功能。(2)探究氧化胁迫条件下低聚磷酸盐促进cAMP发酵合成的生理机制。通过摇瓶实验确定24 h添加15 mg/L-broth甲萘醌可以诱导节杆菌产生中度氧化胁迫现象,在7 L发酵罐上进行添加甲萘醌与低聚磷酸盐发酵实验。结果表明,六偏磷酸钠有效缓解了由甲萘醌引起的氧化胁迫现象,清除了细胞内大量活性氧,丙二醛含量也显著降低,添加甲萘醌与六偏磷酸钠批次菌体浓度、cAMP产量恢复到与空白相当的水平。此外,通过扫描电子显微镜观察发现,与空白相比,24 h添加15 mg/L甲萘醌条件下,各培养阶段菌体均出现不同程度的断裂。偶合添加甲萘醌与六偏磷酸钠时,菌体形态无明显断裂,优于空白和添加甲萘醌批次,表明六偏磷酸钠能够有效保护细胞膜,减少氧化损伤,为cAMP合成提供了良好环境。(3)提出了基于补救途径和ATP高效供给的cAMP发酵工艺。添加次黄嘌呤激活补救途径可以显著提高cAMP发酵性能,但存在发酵周期缩短、菌体浓度低,cAMP产量提高幅度小的问题。分析结果表明,次黄嘌呤诱导节杆菌产生大量活性氧,形成氧化胁迫条件,维持氧化还原平衡和正常代谢消耗大量能量,不利于cAMP的合成。提出了六偏磷酸钠与次黄嘌呤偶合添加的cAMP发酵工艺,cAMP产量达到7.25 g/L,与仅添加次黄嘌呤批次相比提高了111.99%,菌体浓度与cAMP合成速率也得到显著提高。对胞内活性氧与丙二醛水平和节杆菌Z-VAD-FMK细胞形态分析发现,六偏磷酸钠有效缓解了由次黄嘌呤引起的氧化胁迫现象,显著降低了胞内活性氧与丙二醛含量,维持细胞正常形态,为cAMP合成提供了有利条件。

目的 探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对卵巢早衰（POF）的治疗作用及其机制。方法 将22只清洁级雌性SD大鼠接受环磷酰胺腹腔注射，连续注射14 d，构建POF模型，POF大鼠模型建立成功后，对其中11只POF大鼠注射生理盐水作为对照组（POF组），其余11只通过尾静脉移植培养状态良好的hUCMSCs(POF+MSCs组)，分别在第2天、第10天和第18天安乐处死两组大鼠并进行psychiatric medication心脏采血，最后收集血清进行蛋白芯片检测和生物信息学分析。结果 与POF组相比，hUC-MSCs治疗后第2天，Liraglutide抑制剂促炎因子白细胞介素（IL）-2、IL-6和IL-2Rα表达均上调（P均<0.05）；治疗后第10天，促炎因子IL-2Rα表达下调（P<0.05）；治疗后第18天，促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-1β表达均下调（P均<0.05）。与hUC-MSCs治疗后第2天相比，hUC-MSCs治疗后第18天，促炎因子γ干ABT-263配制扰素（IFNG）、TNF-α和IL-1β表达均下调（P均<0.05），并且在GO富集分析的生物学过程中涉及调控炎症相关通路的变化；在KEGG富集分析的结果中，与炎症相关的主要信号通路JAK-STAT也有显著富集，提示hUC-MSCs在体内可能通过JAK-STAT信号通路来抑制促炎因子，从而改善炎性反应。结论 hUC-MSCs进入体内后可能通过JAK-STAT信号通路改善炎性反应，进而改善POF的卵巢功能。

家禽养殖中常见的鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)引起的急性呼吸系统疾病,被感染鸡主要出现咳嗽、喘鸣、啰音等临床症状,其气管、肺脏、肾脏等靶器官也呈现相应病变。IBV短时间内即可在鸡群中扩散、传播并变异,因此IB被认为是家禽养殖中的重要疫病之一。锦灯笼为茄科酸浆属植物,性寒,归肺经,具有清热解毒、利咽喉之功效,现代研究发现其中的黄酮类、甾体类和甾醇类等多种成分还具有抗炎、抗氧化等作用。本研究制备锦灯笼提取物,首先通过鸡胚肾细胞(Chicken embryo kidney cells,CEK细胞)体外试验探索了锦灯笼提取物对IBV的抑制作用,随后从组织损伤角度结合炎症等相关指标,通过体内试验综合研究了锦灯笼提取物对IB的预防和治疗作用,为研究和开发中药防治家禽呼吸系统疾病提供新的思路和方法。为了探究锦灯笼提取物对CEK细胞中IBV增殖的抑制作用,本试验测得自然条件下IBV M41株的鸡胚半数感染量(50%egg infectious dose,EID_(50))为10~(-7.625)/0.1 m L,醇提Pidnarulex NMR得到锦灯笼提取物,并采用细胞增殖-毒性法(Cell Counting Kit-8,CCK-8)筛选出作用于CEK细胞的最佳用药浓度为400μg/m L。本研究将培养24 h后的CEK细胞随机分为对照组、模型组和锦灯笼组,每个分组设置4个平行,向CEK细胞中添加400μg/m L锦灯笼提取物后,加入50μL IBV病毒液,培养72 h后收集细胞,采用q PCR检测方法对细胞中IBV(IBV-N)载量和炎症相关因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)转录水平进行测定。试验结果表明:(1)添加400μg/m L锦灯笼提取物可以抑制CEK细胞中IBV增殖;(2)添加400μg/m L锦灯笼提取物可以抑制IBV导致的CEK细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α因子的上调。为了探究锦灯笼提取物对IB的预防作用,本研究将40只17日龄海兰褐鸡随机分为对照组、模型组、1 g/kg锦灯笼组和3 g/kg锦灯笼组。试验鸡于感染IBV前开始灌服相应剂量锦灯笼提取物,每次给药间隔12 h,连续给药96 h,试验期间测定试验鸡体温、体重,并于试验结束后观察组织病变,检测IBV载量以及炎症相关指标。试验结果表明:(1)观sociology medical察Nirogacestat小鼠试验鸡气管、喉头、肺脏和肾脏组织病理切片,发现1 g/kg和3 g/kg锦灯笼提取物均可缓解其损伤,3 g/kg锦灯笼提取物的效果更显著;(2)1 g/kg和3 g/kg锦灯笼提取物对IBV导致的体温升高均有抑制作用,3 g/kg锦灯笼提取物效果较显著;(3)3 g/kg锦灯笼提取物显著影响试验鸡的增重;(4)检测试验鸡肺脏和肾脏组织中IBV-N转录水平,发现3 g/kg较1 g/kg锦灯笼提取物抑制IBV增殖的作用更为显著;(5)1 g/kg和3 g/kg锦灯笼提取物均可显著下调试验鸡血清中IL-6和TNF-α水平,并上调IL-10水平;(6)1g/kg和3 g/kg锦灯笼提取物均可下调试验鸡肺脏和肾脏中TNF-α水平,3 g/kg锦灯笼提取物效果更为显著。研究发现,试验鸡灌服3 g/kg锦灯笼提取物对IB具有较好的预防作用,本次试验对试验感染IBV,并注射细菌脂多糖(LPS)升高试验鸡体温,进一步探究锦灯笼提取物对IB的治疗作用。将30只17日龄海兰褐鸡随机分为对照组、模型组和锦灯笼(3g/kg)组,试验鸡滴鼻点眼IBV 60 h时腹腔注射LPS,随后灌服锦灯笼提取物,每次给药间隔12h,连续给药72 h,试验期间观察试验鸡临床症状,测定体温、体重,并于试验结束后观察组织病理变化,测定IBV载量及炎症相关指标。试验结果表明:(1)锦灯笼提取物可缓解试验鸡临床症状并减轻气管、喉头、肺脏与肾脏组织的病变;(2)锦灯笼提取物可抑制IBV和LPS引起的试验鸡体温升高;(3)锦灯笼提取物可显著影响试验鸡的增重。(4)锦灯笼提取物可以抑制试验鸡肺脏和肾脏中IBV增殖;(5)锦灯笼提取物可以下调试验鸡血清中IL-6和TNF-α水平,上调IL-10水平;(6)锦灯笼提取物可以抑制试验鸡肺脏和肾脏中TNF-α因子上调。综上所述,CEK细胞中添加400μg/m L锦灯笼提取物,可在体外水平抑制IBV增殖;给试验鸡灌服1 g/kg和3 g/kg锦灯笼提取物,均可体内水平预防IB;灌服3 g/kg锦灯笼提取物可以缓解试验鸡临床症状,减轻组织病理变化,下调体温,抑制IBV增殖及调控炎症水平,从而发挥治疗作用。研究结果表明,锦灯笼提取物防治IB效果显著,为治疗家禽呼吸系统疾病提供了一种可选的药物。

目的 观察针刀联合整脊手法治疗胃食管反流病（GERD）的疗效。方法 选择2022年1月—2023年6月在厦门市中医院推拿科门诊就诊的GERD患者80例，采用随机数字表法分Cells & Microorganisms为对照组和观察组各40例，对照组采用常规药物（奥美拉唑肠溶胶囊、枸橼酸莫沙必利片）治疗；观察组采用针刀联合整脊手法治疗，2组疗程均为8周。比较2组治疗前后GSK1349572使用方法反流性疾病问卷（RDQ）评分、血清胃泌素（GAS）、胃动素（MTL）、血管活性肽（VIP）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮合成酶（NOS）水平的变化以及2组疗效。结果 与治疗前比较，2组治疗后RDQ评分均较治疗前降低（P<0.05），血清GAS、MTL、SOD水平均升高（P<0.05），血清VIP、MDA、NOS水平降低（P<0.05）；与对照组比较，观察组上述指标均改善更明显（P<0.05）；观察组总有效率95.00%，高于对照组77.更多50%(P<0.05)。结论 针刀联合整脊手法治疗GERD疗效优于常规西药治疗，可调节胃肠激素水平、改善氧化应激状态。

1目的:2022年11月流行病调查的研究数据显示,中国糖尿病患者人数超1.4亿,其中95%是2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者,居世界首位。糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是T2DM最严重的并发症之一,是导致慢性肾脏疾病发展的主要病因。DN早期肾小球的病理改变以肾小球基底膜的厚度增加、肾小球体积的代偿性肥大以及系膜基质扩张为主,随后出现肾小球硬化、肾小球滤过率下降等,临床可检测到蛋白尿。足细胞是保证滤过功能稳定的重要组成成员,足细胞受损与蛋白尿的发生直接相关。桦褐孔菌(Inonotus obliquus,chaga)是一种药用真菌,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、降血糖等多种药理作用。我们的前期工作表明,桦褐孔菌具有降低T2DM大鼠的血糖血脂、减少蛋白尿的药效作用。我们推测,桦褐孔菌对以上指标、尤其是蛋白尿的改善作用,与保护T2DM所致的足细胞损伤相关。环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,c GMP)是重要的第二信使,参与调节肾脏多种生理过程。肾脏损伤与c GMP降低直接相关,提高c GMP水平可以有效缓解肾脏损伤。c GMP水平的高低与一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性和磷酸二酯酶(phosphodiesterase,KD025 molecular weightPDE)活性密切相关,其中PDE5抑制剂,如己酮可可碱,目前已用于治疗DN患者,且具有可靠的临床疗效。基于桦褐孔菌改善T2DM大鼠血糖血脂、减少蛋白尿的前期工作基础,本研究将进一步探讨桦褐孔菌经NOS-c GMP-PDE5信号通路改善T2DM大鼠足细胞损伤、减少蛋白尿的作用机制。其中对NOS三个亚型的研究,即内皮型(e NOS)、诱导型(i NOS)、神经型(n NOS),将使我们进一步了解不同亚型可能对c GMP水平发挥不同作用的特点。2方法:2.1 T2DM模型大鼠的建立及实验分组5周龄的SD雄性大鼠为实验对象。喂养普通食物的大鼠为正常对照(normal control,NOR)组;模型组(DN)采用高脂肪饮食(high-fat diet,HFD)喂养持续8周后一次性腹腔注射链脲佐菌素35 mg/kg,一周内,连续测量3次随机血糖(RBG),其结果均>16.7 mmol/L判定为T2DM造模成功,模型组继续喂养HFD。药物组在HFD基础上,bone biology分别使用50和100 mg/kg(DN+Ⅰ和DN+Ⅱ)的桦褐孔菌进行干预8周,实验总计17周。2.2桦褐孔菌对T2DM大鼠糖脂代谢紊乱的影响动物饲养结束后,对所有大鼠进行生化指标测定,其中包括:体重,肾脏重量,随机血糖,总胆固醇,甘油三酯,空腹胰岛素,空腹血糖。2.3桦褐孔菌对T2DM大鼠肾脏功能的改善作用(1)通过生化分析仪和试剂盒检测血肌酐,尿肌酐,24h-尿蛋白,尿素氮。(2)将大鼠肾脏组织进行切片,采用过碘酸希夫染色,光镜下观察各组大鼠切片肾小球、系膜等的形态变化,利用K-Viewer软件测量肾小球直径,Image-Pro plus软件测量肾小球系膜区和毛细血管簇面积,根据公式计算系膜基质相对面积。2.4桦褐孔菌对T2DM大鼠足细胞损伤的改善作用(1)通过电镜观察各组大鼠足细胞的形态、肾小球基底膜的平均厚度和肾小球基底膜的长度及基底膜上裂隙孔的数,通过RADIUS图像分析软件测量得到,根据公式计算足突宽度。(2)分别通过反转录-聚合酶链反应和免疫印迹法观察足细胞标志物Nephrin、WT-1的m RNA和蛋白表达,判断足细胞的损伤情况。2.5桦褐孔菌调节T2DM大鼠的糖脂代谢紊乱及肾脏足细胞损伤的机制研究(1)采用Elisa试剂盒检测大鼠第8周、13周、17周的血清c GMP的水平。(2)采用Elisa试剂盒检测第17周大鼠肾组织中c GMP的水平。(3)采用PCR和WB法检测各组大鼠肾脏的一氧化氮合酶的三种亚型:内皮型(e NOS)、诱导型(i NOS)、神经型(n NOS),和PDE5 m RNA和蛋白的表达水平。3结果:3.1桦褐孔菌改善T2DM大鼠的糖脂代谢紊乱(1)在第8、13和17周,DN组的体重明显高于NOR组(P<0.01)。第17周用药组的体重明显比DN组的体重减轻(P<0.05)。DN组的肾脏重量和肾脏系数明显高于NOR组(P<0.01),与DN组相比,DN+I组和DN+II组的肾脏重量和肾脏系数明显降低(P<0.01)。(2)第17周DN组的空腹血糖明显高于第8周DN组(P<0.001),DN+I组和DN+II组在的空腹血糖水平明显低于DN组(P<0.001)。第8、13和17周DN组的总胆固醇和甘油三酯均显著高于NOR组(P<0.05)。与第8周相比,第13周和17周DN组的总胆固醇和甘油三酯水平都显著增加(P<0.01)。与DN组相比,DN+I组在第13周和第17周的总胆固醇和甘油三酯水平较低,但仅在甘油三酯水平上可以看到显著差异(P<0.05),DN+II组在第13、17周的总胆固醇和甘油三酯水平明显下降(P<0.05)。(3)在第8周,DN组、DN+I组和DN+II组的空腹胰岛素和胰岛素抵抗指数均明显高于NOR组(P<0.05)。在第17周,DN组的空腹胰岛素与NOR组相比明显下降(P=0.002)。在第17周,与DN组相比,空腹胰岛素水平仅在DN+II组明显增加(P<0.05)。在第17周,DN组的胰岛素抵抗指数明显高于第8周的DN组和第17周的NOR组(P<0.001)。与DN组相比,DN+I组和DN+II组的胰岛素抵抗指数明显下降(P<0.01)。3.2桦褐孔菌改善T2DM大鼠的肾脏功能(1)第17周,DN组血肌酐、尿素氮和24h-尿蛋白的水平均显著高于NOR组和第13周的DN组(P<0.05)。DN组的尿肌酐水平和计算得到的肌酐清除率明显低于NOR组(P<0.001和P=0.015)。与DN组相购买Galunisertib比,DN+I组和DN+II组的血肌酐、尿素氮、24h-尿蛋白和尿肌酐都有明显改善(P<0.05),肌酐清除率水平仅在DN+II组有明显改善(P=0.005)。(2)与NOR组相比,DN组的肾小球直径和系膜基质相对面积明显增加(P<0.001)。与DN组相比,桦褐孔菌干预8周后,DN+I组和DN+II组的上述肾脏病理改变均有明显的降低(P<0.05)。3.3桦褐孔菌改善T2DM大鼠的足细胞损伤(1)与NOR组相比,DN组的肾小球基底膜厚度和足突宽度明显增加(P<0.001)。与DN组相比,两个桦褐孔菌治疗组对改善以上病理变化有明显效果(P<0.001)。(2)PCR和WB结果显示,与NOR组相比,DN组的Nephrin、WT-1 m RNA和蛋白水平显著降低(P<0.01),桦褐孔菌干预8周后,与DN组相比,DN+I组和DN+II组的Nephrin、WT-1表达水平均显著升高(P<0.01)。3.4桦褐孔菌升高T2DM大鼠的肾脏组织和血清中的c GMP水平Elisa结果显示,第13周和第17周,DN组的血清c GMP水平显著低于NOR组(P<0.01),DN组的肾组织c GMP也有下降趋势,但无统计学差异。与DN组相比,DN+I组和DN+II组在第13周和第17周的血清c GMP水平明显增加(P<0.001),肾组织c GMP水平仅在DN+II组显著增加(P<0.05)。3.5桦褐孔菌升高T2DM大鼠肾脏组织e NOS、n NOS,降低i NOS和PDE5 m RNA和蛋白水平(1)PCR结果显示,与NOR组相比,DN组的e NOS m RNA明显下降(P<0.01),i NOS和PDE5 m RNA水平明显增加(P<0.01),n NOS m RNA水平无统计学差异。(2)WB结果显示,与NOR组相比,DN组的e NOS和n NOS蛋白表达水平无统计学差异,i NOS和PDE5蛋白表达水平明显上升(P<0.01)。与DN组相比,DN+I组和DN+II组中e NOS和n NOS表达水平均显著增加(P<0.05),i NOS表达显著下降(P<0.05),PDE5的表达水平仅在DN+II组有统计学差异(P<0.05)。4结论:(1)桦褐孔菌可改善HFD/STZ诱导的T2DM大鼠的高血糖、高血脂及胰岛素抵抗。(2)桦褐孔菌可改善T2DM大鼠的蛋白尿、GBM增厚及足细胞的足突融合,并增加足细胞特异性标志物Nephrin、WT-1的表达。(3)桦褐孔菌可增加T2DM大鼠血液及肾脏组织中的c GMP水平,并且这个作用与增加e NOS、n NOS,降低i NOS、PDE5表达相关。综上,我们认为,桦褐孔菌通可通过改善T2DM大鼠的糖脂代谢紊乱、增加c GMP水平,发挥保护T2DM大鼠的肾脏足细胞,从而降低蛋白尿的作用。