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目的 探讨重组人血小板生成素注射液(TPO)联合甲泼尼龙琥珀酸钠治疗原IDN-6556分子量发免疫性血小板减少症的效果观察。方法 选取原发免疫性血小板减少症患者86例，随机分为联合组与对照组，各43例。对照组给予甲泼尼龙琥珀酸钠80 mg连续5～7 d,联合组给予TPO 15 000 IU+甲泼尼龙琥珀酸钠80 mg连续5～7 d,血小板上升后调整为泼尼松0.8 mg/kg,记录所有患者的临床疗效。结果 治疗后联合组的总有效率高于对照组(P<0.05);两组治疗后的血小板计数高于治疗前，且联合组增加幅度更大(P<0.05);两组治疗后CD4+与CD25+T淋Regorafenib molecular weight巴细胞比例高于治疗前，且联合组增加幅度更大(P<0.05);两组不良反应发生率比较无差异(P>0.05)。结论 TPO联合甲泼尼龙琥珀酸钠治疗COPD pathology原发免疫性血小板减少症能提高血小板计数，减少出血事件，不会增加不良反应，改善患者免疫功能。

研究背景:衰老不可避免,在个体衰老过程中,身体功能随着时间的推移而逐渐退化,人类的正常衰老与生理过程和解剖结构的稳定性丧失有关,并最终导致身体状态减退和死亡率增加。研究发现,衰老与组织中体细胞突变数量的累积有关。细胞复制在个体进程中广泛存在,个体造血干/祖细胞(Hemopoietic stem and progenitorcells,HSPCs)在复制过程中会出现突变,而这种突变的数量会随着年龄的增长而逐渐积累。其中一些基因突变可促进特定体细胞的克隆性竞争优势和扩张,当这些突变的变异等位基因频率(Variant allele frequency,VAF)≥2%且无严重的细胞减少症或其他血液学疾病时,即被定义为不确定潜能的克隆性造血(Clonal hematopoiesis of indefinite potential,CHIP)。CHIP相关基因如DNMT3a、TET2,均可编码调节DNA甲基化的酶,并在细胞分裂中发挥重要作用。因此,CHIP相关基因突变(以下简称为CHIP突变)会通过干扰DNA甲基化和相关蛋白质的合成过程来扰乱体细胞功能,这些突变的存在往往提示患者预后较差。虽然CHIP与突变相关,具有潜在的恶性转化的风险,但是由于细胞的恶性病变是一个漫长的过程,CHIP向恶性疾病转化需要较长的时间。所以,在大多数CHIP的携带者中,该状态对于机体的主要影响在于所引起的并发症。最近的研究表明,二代测序(Nextgeneration sequencing,NGS)检测到的突变谱证实了DNMT3a、ASXL-1、JAK2、TP53和TET2基因是CHIP最常见的突变基因,这些基因大多参与DNA甲基化和体细胞的增殖过程。急性髓系白血病(Acutemyeloidleukemia,AML)是HSPCs异常克隆性增殖导致的血液系统恶性肿瘤,临床表现及预后具有高度异质性,基因突变是导致其异质性的重要原因。CHIP突变在AML中也经常出现,例如DNMT3a、ASXL-1、JAK2均与AML的不良预后相关。目前AML患者常用的治疗方式包括靶向治疗、免疫治疗、化疗、造血干细胞移植等,其中化疗仍然是最主要的治疗方式。化疗药物尤其是蒽环类药物,可导致严重的心脏相关毒性,包括心肌损伤、射血分数下降等,其中心肌损伤也是抗肿瘤治疗较常见的心血管相关并发症。CHIP与心血管疾病也有较强联系,例如,CHIP可显著增加机体的炎症水平,在内皮损伤中发挥重要作用,还可以增加患者的冠状动脉钙化程度,加剧动脉粥样硬化斑块的进展,对于心力衰竭、主动脉瓣狭窄等疾病均密切相关,严重影响患者预后。综上所述,CHIP突变及AML的化疗均与心血管疾病有一定联系,因此我们提出假设:携带CHIP突变的AML患者在化疗过程中更容易导致心血管危险性增加,为了验证该假设,我们进行了本研究。研究目的:(1)探讨CHIP突变对于AML患者化疗期间心血管风险的预测作用;(2)明确合并CHIP突变AML患者化疗期间心血管风险的表现形式。研究方法:回顾性纳入2020年1月—2020年12月于山东大学齐鲁医院血液内科收治的定期接受化疗的AML患者,并在此期间至少有三次因本病住院化疗经历,根据CHIP突变的有无将患者分为两组,即CHIP组和对照组。采用倾向性评分匹配(propensity score matching,PSM),按1:1 比例匹配CHIP组和对照组。最终统计入组AML患者CHIP组49例,对照组49例。根据患者规律化疗时间,将患者初次化疗时间作为入组时间,初次化疗后的3个月、6个月分别作为两次随访时间点,分别于3次时间点收集患者相关检查结果,比较匹配后两组患者的临床资料差异以及变化。具体如下:收集两组AML患者的年龄、性别、收缩压(Systolic blood pre寻找更多ssure,SBP)、舒张压(Diastolic blood pressure,DBP)、心率(Heart rate,HR)、身体质量指数(Body mass index,BMI)、吸烟史、饮酒史、高血压(High blood pressure,HBP)、糖尿病(diabetes mellitus,DM)、冠心病(Coronary heart disease,CHD)病史。收集实验室检查指标,包括:前白蛋白(Prealbumin,PA)、白蛋白(Albumin,Alb)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterin,LDL-c)、载脂蛋白B(ApolipoproteinB,Apo-B)、脂蛋白a(Lipoprotein,Lp(a))、空腹血糖(Fasting blood-glucose,FPG)、N末端B型利钠肽原(N-terminal B-type natriuretic peptide,NT-proBNP)、肌钙蛋白I(Cardiac troponin 1,cTnI)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB,CK-MB)、钾离子(K+)、镁离子(Mg2+)等指标。收集超声心动图结果,包括:舒张末期左室内径(Left ventricular end diastolic diameter,LVEDD)、室间隔厚度(Interventricular septal,IVS)、左室后壁厚度(Left ventricular posterior wall,LVPW)、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、二尖瓣口舒张早期峰值血流速度E与二尖瓣环室间隔侧舒张早期运动速度e’的比值(E/e’)等。所获得的数据采用SPSS 26.0软件进行统计学分析。研究结果:(1)两组AML患者的中位年龄为54岁,与对照组相比,CHIP组(53.94±14.47 vs 54.55±14.8,p>0.05)平均年龄较大,但两组患者年龄差异无统计学意义。与对照组相比,CHIP组的BMI(25.77±4.53vs24.12±3.48,p<0.05)较低,但是CHD患病率(2.04%vs 12.24%,p<0.05)、DM患病率(2.04%vs 16.33%,p<0.05)均较高,差异具有统计学意义。对照组与CHIP组患者在首次化疗时身高、体重、HBP病史、化疗药物种类与剂量、单位体表面积化疗药物浓度、SBP、DBP、HR、LVEDD、IVS、LVPW、LVEF、E/e'、NT-proBNP、cTnI、CK-MB、FPG、TC、LDL-c、Apo-B、Lp(a)、Alb、PA、K+、Mg2+、心脏相关用药情况均无统计学差异。(2)采用重复测量方差分析,分析两组患者临床检查指标随时间变化的差异。随着时间的推移,两组患者血清Alb浓度(p<0.01)与TC浓度(p<0.01)均逐渐升高,组间差异(p>0.05)无统计学意义。与对照组相比,CHIP组Mg2+浓度较低(p<0.01),且CHIP组患者血中Mg2+浓Belnacasan半抑制浓度度随时间延长逐渐降低,对照组在初次化疗后3个月(T1)Mg2+浓度降低,在初次化疗后6个月(T2)Mg2+浓度升高,且CHIP组与对照组之间差异具有统计学意义(p<0.05)。(3)用T1时收集的临床指标数值减去T0时收集的临床指标数值,所得结果为相应指标的△值。以HBP、DM、CHD、BMI为协变量进行协变量方差分析,与对照组相比,CHIP组△CK-MB(-0.11±0.52vs.0.13±0.90,p<0.01)升高,差异具有统计学意义,且与HBP病史(p<0.01)、DM病史(p<0.01)、CHD病史(p<0.01)及BMI(p<0.01)均具有相关性。与对照组相比,CHIP组△K+(0.13±0.60vs.-0.28±0.53,p<0.01)变化量较大,差异具有统计学意义,与HBP病史(p<0.01)、DM病史(p<0.01)、CHD病史(p<0.01)及BMI(p<0.001)相关,且CHIP组△K+为负值。(4)以上述方法所获得的△值作为因变量,以T0时的检查结果作为自变量进行多元线性回归分析,所得结果如下。△LVEDD 多元线性回归方程如下:△LVEDD=0.322 × JAK2+0.250 ×LVEDD;△IVS 多元线性回归方程如下:△IVS=0.219×JAK2+0.436×E/e'+0.215×IVS-0.192×Apo-B;△LVPW 多元线性回归方程如下:△LVPW=0.296×JAK2+0.279×LVPW+0.502×E/e'+0.213 LVEF-0.226× Apo-B;△LVEF 多元线性回归方程如下:△LVEF=0.294 × E/e'+0.223 ×LVPW+0.213 ×LVEF+0.203 ×Apo-B-0.297 ×JAK2-0.218 ×NT-proBNP-0.014 ×蒽环类。△NT-proBNP 多元线性回归方程如下:△NT-proBNP=0.227 ×DNMT3a+0.536×NT-proBNP;△cTnI 多元线性回归方程如下:△cTnI=0.187×(ASXL-l)+0.357 ×CHD;△CK-MB 多元线性回归方程如下:△CK-MB=0.162 ×LVEDD+0.840×CK-MB+0.415×Lp(a)+0.641 ×cTnI-0.211 ×E/e'。△Alb 多元线性回归方程如下:△Alb=0.166 ×HR-0.151 ×E/e'-0.681 ×Alb-0.197×FPG;△TC 多元线性回归方程如下:△TC=0.185×JAK2-0.181 ×BMI-0.238×Alb-0.344×Apo-B;△Apo-B 多元线性回归方程如下:△Apo-B=0.175×吸烟史-0.339×CHD-0.329×Apo-B-0.245×Mg2+;△Lp(a)多元线性回归方程如下:△Lp(a)=0.231 ×TET2+0.337×CHD-0.243×Apo-B;△FPG 多元线性回归方程如下:△FPG=0.186×DM+0.898×FPG-0.121 ×LVEF-0.148×蒽环类;△K+多元线性回归方程如下:△K+=0.169×CHD-0.195×JAK2-0dilation pathologic.174×E/e’-0.157×FPG-0.642×K+;△Mg2+多元线性回归方程如下:△Mg2+=0.187×K+-0.215×NT-proBNP-0.671 ×Mg2+。结论:(1)CHIP基因突变与AML患者化疗过程中的心血管危险因素升高相关,携带CHIP基因突变的AML患者化疗期间更容易增加心血管风险。CHIP基因突变可作为AML患者化疗期间心血管风险的早期预测因子。(2)合并CHIP基因突变的AML患者BMI较低,但更容易患冠心病和糖尿病,这可能成为其化疗期间的心血管危险因素。(3)JAK2突变更易导致AML患者化疗期间出现心肌肥厚和左室射血分数降低。(4)合并CHIP突变的AML患者更易出现白蛋白、血钾、血镁降低,但血脂升高,增加心血管风险。

目的 研究超活化血小板裂解液(super-activated platelet lysate,sPL)、骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)及二者联合应用对大鼠上颌快速扩弓后前腭缝骨改建的影响。方法 16只6周龄雄性SD大鼠随机分为4组：对照组（A组）；sPL注射组（B组）；BMSCs注射组（C组）；BMSCs+sPL注射组（D组）。建立大鼠上颌快速扩弓模型，扩弓7天后进入保持期，并按selleck产品分组进行干预。保持21天后处死所有大鼠，通mixture toxicology过MicroCT和组织学染色对前腭缝进行骨质分析和组织形态学观察。结果 D组大鼠前腭缝宽度相比A组明显减小（P<0.05），骨小梁分离度（Tb.Sp）明显降低（P<0.01），骨小梁数目（Tb.N）明显增多（P<0.05），骨体积分数（BV/TV）显著高于A组和C组（P<0.05）。与A组大鼠相比，B组大鼠BV/TV增高，Tb.Sp降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。C组大鼠Micro-CTPLX3397生产商各项测量指标与A组相比无统计学差异（P>0.05）。组织学观察显示，B、C、D组大鼠前腭缝处骨改建较A组更活跃，D组大鼠单位骨小梁周长成骨细胞数明显高于A组和C组（P<0.05）。结论 sPL单独应用或者BMSCs+sPL联合应用均能促进大鼠上颌快速扩弓后前腭缝骨改建，促进骨质形成。

目的：观察针刺治疗对脑出血大鼠神经功能状态的影响，并基于p62/Keap1/NRF2信号通路研究针刺对脑出血后脑组织铁死亡的调控作用。方法：选用健康正常的雄性SD大鼠33只，随机分为假手术组、模型组和针刺组，每组再分为1 d、3 d和7 d的3个亚组，其中假手术组每个亚组1只大鼠，模型组和针Bafilomycin A1小鼠刺组每个亚组5只大鼠。除假手术组外，采用大鼠自体血注射的方式建立脑出血大鼠模型；假手术组、针刺组中大鼠脑组织可选择采用由百会穴刺向曲鬓穴的刺灸方法，采用Ludmila Belayev神经功能评分来评估模型各组中大鼠神经功能系统的功能缺损程度情况；MLN4924分子量采用Western blot检测脑组织中System Xc-、GPX4蛋白的表达；用透射电镜观测到了各组大鼠脑组织的神经细胞线粒体形态；酶联免疫吸附方法检测脑组织中MDA、GSH、GPX4含量的变化。结果：由百会穴开始向曲鬓穴进行的针刺方法可以降低脑出血大鼠体内的Ludmila Belayev神经功能的评分，从而缓解了脑出血大鼠神经肌肉传导缺损症；不同时间点相比较，大鼠System Xc-相对表达量在3 d和7 d均高于1 d，假手术组和针刺组整体表现为随着时间增加System Xc-蛋白量不断增加。与假手术组比较，模型组大鼠的MDA水平明显升高（P <0.05）;GSH、bioactive substance accumulationGPX4水平均明显降低（P <0.05）；在同一时间点与模型组相比较，针刺组大鼠MDA水平均明显降低（P <0.05）;GSH、GPX4水平均明显升高（P <0.05）。模型组和针刺组大鼠在3 d MDA水平达到高峰，7 d MDA水平下降。GSH、GPX4水平则不断升高。结论：针刺可改善急性脑出血大鼠神经肌肉损伤神经功能，通过降低MDA、升高System Xc~-、GSH、GPX4蛋白表达水平抑制脑出血大鼠神经细胞铁死亡，在脑出血治疗中发挥脑保护作用。

目的：该研究旨在探讨中乌宁（mesaconine）是否通过Bax/Bcl-2/caspase 3信号通路抑制细胞凋亡改善慢性肾衰竭（chronic renal failure，CRF）大鼠肾纤维化。方法：雄性SD大鼠建立5/6肾切除致CRF模型，随机分为模型对照组、中乌宁2 、5 mg/kg组及依那普利2 mg/kg组，另取大鼠作为正常对照组及假手术对照组。术后1 w按组别灌胃给药，连续8 w，末次给药后收集24 h尿液测定尿量及尿蛋白含量，取血及肾脏，检测血清中肾损伤标志物肌酐（CREA）、尿素氮（BUN）含量及肾脏纤维化标志物转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）含量；HE染色及Masson染Biological gate色观察组织病变及纤维化程度；TUNEL染色测定肾组织细胞凋亡率；Western blot法测定细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及cleaved-caspase 3的表达水平。获悉更多结果：与正常对照组或假手术对照组相比，模型对照组大鼠尿量明显降低，尿蛋白、血清CREA、BUN、TGF-β1、α-SMA含量、肾组织损伤病理评分、肾组织纤维化程度及肾组织细胞凋亡率明显增加，肾组织中Bax及cleaved-caspase 3蛋白表达明显上调，bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)；与模型对照组相比，中乌宁5 mg/kg组大鼠尿量明显增加，各给药组大鼠尿蛋白、血清CREA、BUN、TGF-β1、α-SMA含量、肾组织损伤病理评分、肾组织纤维化程度及肾组织细胞凋亡率明显降低，肾组织中Bax及cleaved-caspase 3蛋白表达均明显下调，bcl-2蛋白表达明显上调(P<JQ1分子式0.05或P<0.01)。结论：中乌宁可有效改善5/6肾切除CRF模型大鼠的肾脏功能。这种肾保护作用与其调控Bax/bcl-2/caspase 3信号通路抑制细胞凋亡，从而减轻5/6肾切除CRF模型大鼠的肾纤维化有关。

目的 通过弗氏完全佐剂(complete Freund’s寻找更多 adjuvant, CFA)建立自身免疫性慢性非细菌性前列腺炎(chronic nonbacterial prostatitis, CNP)大鼠模型，观察其对前列腺病理组织学及相关促炎细胞因子表达水平的影响，为CNP的研究提供参考。方法 48只Wistar大鼠随机分为空白组、假手术组、CFA原位注射组、CFA与大鼠前列腺蛋白混合物原位注射组，造模后28 d处死，取大鼠前列腺组织。称重并计算各组大鼠前列腺指数，HE染色观察各组大鼠前列腺组织病理损伤情况，ELISA检测大鼠前列腺组织促炎细胞因子IL-1β、IL-6、COX-2水平。结果 假手术组与空白组相比，大鼠前列腺指数无显著差异，前列腺组织无明显病理改变，前列腺组织IL-1β、IL-6、COX-2无显著变化。与假手术组相比，CFA原位注射组与混合物原位注射组均出现前列腺指数显著增高，前列腺组织出现明显病理改变与炎性细胞浸润，前列腺组织IL-1β、IL-6、COX-genetic phylogeny2表达显著增加。混合物原位注射组与CFA原位注射组相比，出现更显著的前selleckchem GSK1349572列腺组织炎性细胞浸润，且前列腺组织IL-1β、IL-6表达水平显著增高。结论 CFA原位注射及CFA与大鼠前列腺蛋白混合物原位注射方法均可成功制备CNP大鼠模型，可为CNP的进一步研究提供模型基础。

随着缺血性心肌病发病率的逐年增加,随之而来的缺血再灌注损伤问题引发了临床医师的高度关注。线粒体损伤和随后的铁死亡是心肌缺血再灌注损伤(Myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)的主要原因。MIRI已成为缺血性心肌病患者预后不良的重要原因。到目前为止,MIRI的机制仍然未知,也没有有效的治疗方法。因此,阐明其发病机制和开发潜在的治疗靶点具有重要意义。Sirtuin1(SIRT1)和Sirtuin3(SIRT3)是沉默信息调节器2(SIR2)蛋白家族的两个充分表征的成员。SIRT1和SIRT3都已被证明在保护心肌细胞抵抗MIRI中发挥重要作用,但过去针对SIRT1和SIRT3与MIRI的关系开展的研究多集中在这两者之一的单基因层面,而关于两者间的协作关系则鲜有报道。本研究旨在探讨SIRT1与SIRT3的内在联系及其在MIRI过程中与线粒体自噬相关铁死亡的关系。我们selleck产品通过生物信息学分析的方法结合细胞实验发现SIRT1与SIRT3在心肌细胞缺血再灌注损伤过程中表达异常,两者存在表达上的相互抑制,且两者形成了具有内在联系的调控轴,该轴可通过PINK1/Parkin信号通路调控缺血再灌注损伤心肌细胞中线粒体自噬的动态平衡,以此来调控细胞铁死亡过程,保护心肌细胞抵抗因缺血再灌注造成的损伤。因此,本研究对SIRT1及SIRT3在MIRI中的角色定位有了些新的发现及看法,可为缺血性心肌病患者防治缺血再灌注损伤提供潜在的治疗靶点。第一部分:SIRT1/SIRT3在缺血性心肌病中的表达及其表达相关性分析背景:目前的研究中,SIRT1/SIRT3在缺血性心肌病患者缺血再灌注损伤过程中的表达情况不明确且存在不少矛盾的地方;另外,SIRT1/SIRT3在心肌细胞缺血再灌注损伤过程中是否存在协同作用也不明确。目的:从基因层面探讨SIRT1/SIRT3在缺血性心肌病患者心肌组织和外周血中的表达及其相关性,并通过细胞实验从分子水平验证所分析的结果,初步分析SIRT1/SIRT3在缺血性心肌病缺血再灌注损伤发生发展中的作用。方法:我们首先利用R软件中“merge”函数合并来自基因表达综合数据库(Gene expression omniGSI-IX体内实验剂量bus,GEO)中的缺血性心肌病患者的心肌组织样品数据集GSE5406,GSE1869及GSE974;同样方法合并来自GEO数据库中的缺血性心肌病患者的外周血样品数据集GSE48060及GSE97320;“Combat”函数去除批次效应以后,提取SIRT1及SIRT3表达数据矩阵,利用R软件中“ggboxplot”可视化基因表达结果;“ggscatter”可视化表达相关性结果。随后,通过体外构建细胞缺氧/复氧(Hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤模型,结合基因敲除技术验证SIRT1/SIRT3表达及其表达相关性,从而明确SIRT1与SIRT3的内在联系,并证实SIRT1-SIRT3轴的存在。结果:Sgenetic discriminationIRT1表达在缺血性心肌病患者心肌组织及外周血中均低于对照组(P<0.05),而SIRT3在两组中无明显差异。SIRT1与SIRT3表达在在缺血性心肌病患者心肌组织及外周血中均呈显著负相关(P<0.001)。体外细胞H/R模型验证了上述结果,发现SIRT1在H/R组中表达显著低于对照组(P<0.05),而SIRT3在两组中表达无明显变化。有趣的是,sh SIRT3组中SIRT1表达显著增加,且sh SIRT1+sh SIRT3组SIRT1表达也显著高于sh SIRT1组中表达(P<0.05);更为有趣的是,sh SIRT1组SIRT3表达也显著增加,且sh SIRT1+sh SIRT3组SIRT3表达也显著高于sh SIRT3组中表达(P<0.05)。结论:SIRT1及SIRT3在缺血性心肌病患者中表达异常,且两者形成了具有表达上相互抑制的调控轴,通过该轴参与了心肌细胞缺血再灌注损伤的发生发展。第二部分:SIRT1-SIRT3轴的异常通过铁死亡促进MIRI的发生发展背景:心肌细胞缺血再灌注损伤的过程伴随着铁死亡的发生。线粒体损伤及随后的铁死亡是心肌细胞缺血再灌注损伤的主要原因。在前面的生物信息学分析过程中,我们发现SIRT1-SIRT3轴表达改变会引起铁死亡相关基因的表达改变,因此,我们推测SIRT1-SIRT3轴与铁死亡存在着关联,可能参与了铁死亡的调控,进而参与MIRI的发生发展。目的:本部分实验拟研究SIRT1-SIRT3轴与缺血再灌注损伤过程中心肌细胞铁死亡的关系及其对铁死亡的具体影响。方法:我们首先从公共数据集GEO116250中提取铁死亡相关基因的表达矩阵,经表达差异分析后,用最小绝对收缩和选择算子(Least absolute shrinkage and selection operator,LASSO)算法提取核心差异基因,最后对SIRT1/SIRT3与这些核心铁死亡相关差异基因的相关性进行分析从基因层面初步评估SIRT1/SIRT3与铁死亡的相关性。随后,我们通过细胞模型实验验证上述生物信息学分析结果并在此基础上进一步探讨SIRT1/SIRT3对心肌细胞铁死亡的具体影响。应用基因敲除技术下调H9c2细胞中SIRT1及SIRT3蛋白的表达并经H/R损伤处理后,应用Fe~(2+)检测试剂盒检测Fe~(2+)浓度变化;丙二醛(Malondialdehyde,MDA)法检测MDA含量变化;JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体损伤程度。结果:我们从GEO116250数据集中提取了218个与铁死亡相关的基因微阵列数据,经过差异表达分析,提取出了15个差异表达基因(Differentially expressed genes,DEGs),其中8个上调表达基因,7个下调表达基因;接着,用LASSO算法进一步提取出了3个铁死亡相关的核心差异基因。经相关性分析发现,SIRT1/SIRT3与这3个核心差异基因密切相关(P<0.05)。随后,我们用基因敲除技术敲除H9c2细胞系中SIRT1和SIRT3蛋白的表达并经H/R处理后,我们发现SIRT1及SIRT3干扰组中Fe~(2+)浓度、MDA含量及线粒体受损比例均明显增加(P<0.05),但是SIRT1干扰组与SIRT3干扰组相比,上述表征并不具有统计学差异。结论:SIRT1-SIRT3轴与缺血再灌注损伤心肌细胞铁死亡密切相关;SIRT1-SIRT3轴表达沉默会引起心肌细胞铁死亡发生率显著增加,因此,SIRT1-SIRT3轴的表达异常通过铁死亡促进心肌细胞缺血再灌注损伤的发生发展;此外,本部分表征还进一步证实SIRT1与SIRT3形成的是一种既有相互抑制且又缺一不可的调控轴。第三部分:SIRT1-SIRT3轴通过PINK1/Parkin信号通路调控心肌细胞的铁死亡过程背景:线粒体自噬平衡的破坏会导致细胞铁死亡增加,以往的研究表明SIRT1及SIRT3均与自噬密切相关,因此,我们推断SIRT1-SIRT3轴是通过调控线粒体自噬的动态平衡来调控心肌细胞铁死亡的发生的。目的:本部分我们拟进一步深入研究SIRT1-SIRT3轴调控缺血再灌注损伤心肌细胞铁死亡的具体机制及其调控信号通路。方法:我们从公共数据集GEO116250中提取线粒体自噬相关的基因微阵列数据,经相关性分析后,找出与SIRT1/SIRT3密切相关的基因,随后应用细胞模型加以验证并深入探讨。在实验验证部分,我们应用基因敲除技术沉默H9c2细胞中SIRT1及SIRT3蛋白的表达后,用Western Blotting检测线粒体自噬相关蛋白的表达变化以验证生物信息学分析结果。最后从这些自噬相关蛋白中挑取其中的关键分子,敲除其表达后观察细胞铁死亡相关表型的变化以验证该信号通路,并观察SIRT1的激动剂白藜芦醇(Resveratrol,Res)和/或SIRT3的激动剂和厚朴酚(Honokiol,HKL)能否逆转该关键分子表达沉默造成的影响。结果:我们发现SIRT1-SIRT3轴基因表达的改变伴随着PINK1/Parkin信号通路基因中PINK1,Parkin,LC3及P62/SQSTM1表达的改变,该结果得到了体外细胞模型实验验证。在H9c2细胞株中敲低PINK1蛋白表达后,细胞出现了与SIRT1-SIRT3轴表达沉默一致的铁死亡表征:Fe~(2+)浓度增加、MDA含量增加及线粒体受损比例增加等现象(P<0.05),而Res及HKL均可有效逆转上述改变(P<0.05)。结论:SIRT1-SIRT3轴通过PINK1/Parkin信号通路调控线粒体自噬的动态平衡进而调控心肌细胞的铁死亡过程;SIRT1-SIRT3轴的表达异常通过线粒体自噬依赖性的铁死亡促进MIRI的发生发展。

确认细节为了验证miR-21a-5p与CCL1基因的靶向关系，试验利用生物信息学软件预测miR-21a-5p和CCL1基因的结合位点，设计引物合成CCL1基因3′非翻译区(UTR)野生型及突变型目的片段，并将其克隆到psiCHECK2质粒上构建CCL1野生型(CCL1-WT)和突变型(CCL1-MUT)双荧光素酶报告质粒。将构建好的CCL1-WT和CCL1-MUT分别与miR-21a-5p模拟物(miR-21a-5p mimic)和阴性对照(miR-NC)共同转染到293T细胞中，检测CCL1-WT+miR-NC组、CCL1-Whttps://www.selleck.cn/products/forskolin.htmlT+miR-21a-5p mimic组、CCmultiple bioactive constituentsL1-MUT+miR-NC组、CCL1-MUT+miR-21a-5p mimic组的荧光素酶活性。结果表明：CCL1基因是miR-21a-5p的潜在靶基因；CCL1野生型和突变型双荧光素酶报告质粒测序结果与预期结果一致；与CCL1-WT+miR-NC组相比，CCL1-WT+miR-21a-5p mimic组荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而CCL1-MUT+miR-NC组与CCL1-MUT+miR-21a-5p mimic组之间差异不显著(P>0.05)。说明CCL1基因野生型及突变型双荧光素酶报告质粒构建成功，且miR-21a-5p与CCL1基因存在靶向关系。

囊性纤维化(Cystic fibrosis,CF)疾病是一种隐性遗传疾病,是由一个氯离子通道蛋白——囊性纤维化跨膜电导调节剂(Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)基因突变导致功能缺陷而造成的。ΔF508突变缺失了508位置的苯丙氨酸(Phenylalanine),是最重要的CF突变。目前约90%的CF患者携带了这个突变。ΔF508突变导致CFTR蛋白无法从内质网传送到高尔基体,使蛋白表达大幅度降低,功能严重受损。为了Repeat hepatectomy解ΔF508突变如何造成上述CFTR传递缺陷,本研究先用免疫印迹法探究已知的回复突变G509A/V510G(A/G)是经由何种机制来改善ΔF508-CFTR突变体的传递缺陷。结果显示在ΔF508-CFTR突变体中加入A/G突变,使得完全糖基化形式的Band C蛋白比例大幅增加。将ΔF508-A/G突变体上的I507突变成I507A或I507E,可以略提高该位置残基螺旋结构稳定性,降低Band C蛋白表达率。此外,本研究将ΔF508-A/G突变体上的G509A突变成为G509L、G509R、G509N、G509S、G509T和G509M后,发现G509L、G509S、G509T和G509M提高了ΔF508-CFTR的Band C表达和减少了来自内质网中未成熟和部分糖基化CFTR的蛋白量。因此,G509L、G509S、G509T和G509M为有效突变。由于这些突变都有利于肽键形成螺旋结构,推测ΔF508-Captisol半抑制浓度CFTR中,相比507位置,在509位点形成螺旋结构对ΔF508-CFTR蛋白传递的改善作用更显著。利用S511和Y512位点的G突变来增加508位置后的H3-H4环的灵活性(Flexibility)和两个位点的P突变来破坏H3-H4环的稳定性,均大幅降低ΔF508-A/G-CFTR突变体的Band C表达,这表明H3-H4环稳定性较灵活性对CFTR蛋白传递更重要。随后,本研究探究了已知ΔF508-CFTR突变体的回复突变(R1070W、G550E、R553Q、R553M、R555K)对ΔF508-CFTR和ΔF508-A/G-CFTR突变体蛋白传递的作用。结果显示,这些突变与A/G突变相似,都能大幅度增加ΔF508-CFTR的Band C蛋白表达。但只有R1070W、G550E和R555K可以明显增加ΔF508-A/G-CFTR的Band C蛋白表达。而这三个回复突变是不影响野生型CFTR的Band C蛋白表达的。说明这三个突变可以填补A/G突变未能改善的结构缺陷。通过晶体结构分析,G550E位点本身的作用力以及与R555K交互作用的D529残基可能是结构上改善传递缺陷的原因。为此,本研究测试了G550位点的G550A、G550I和G550D,以及D529E突变,发现这些突变都能显著增加ΔF508-CFTR的Band C蛋白表达,这与推测结果一致。最后,本研究发现了5个新的回复突变G509M/V510G、G509S/V510G、G509T/V510G、A/G-G550E和A/G-R555K。未来研究可通过进一步了解这些突变造成的结构改变来阐明ΔF508突变的哪些结构上PD-0332991配制的主要改变,造成了CFTR离子通道的蛋白传递缺陷。

目的 比较使用阿哌沙班和低分子肝素预防股骨干骨折术后下肢深静脉血栓的效果。方法 将2020年1月至2021年12月于上海市嘉定区南翔医院骨科行手术治疗的82例股骨干骨折患者随机Molecular cytogenetics分为两组,根据术后预防下肢深静脉血栓不同用药进行分组,每组各41例,对照组使用低分子肝素治疗,观察组使用阿哌沙班治疗,对比两组的凝血功能指标[凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、Regorafenib IC50凝血时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)、血小板(PLT)]、其他血生化指标[γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)]、血液流变学指标[血浆黏度(PVPUN30119分子量)、全血高切黏度(WBHSV)、全血低切黏度(WBLSV)、红细胞压积(PCV)]、下肢深静脉血栓及不良反应。结果 治疗后两组PT、APTT、TT、FIB、PLT、GGT、AST、ALT、PV、WBHSV、WBLSV和PCV比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组下肢深静脉血栓发生率为4.88%,明显低于对照组的24.39%,差异有统计学意义(P<0.05);观察组和对照组不良反应发生率分别为4.88%、9.76%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 阿哌沙班治疗术后下肢深静脉血栓的效果更好,安全性较高,可优先采用。