Author: admin

目的:研究miR-299-3p对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法:以乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,q RT-PCR检测乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中miR-299-3p和PAX3 m RNA的表达,Western blot检测MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中PAX3、增殖相关蛋AMG510分子量白Ki-67、PCNA以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,CCK-8法和流bio-mediated synthesis式细胞术分别测定MDA-MB-231LBH589 molecular weight和MDA-MB-468细胞增殖吸光度值和凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-299-3p和PAX3的靶向关系。结果:与乳腺上皮细胞MCF-10A相比,在乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468中miR-299-3p的含量显著减少(P<0.05),而PAX3 m RNA和蛋白表达量显著增加(P<0.05);过表达miR-299-3p可下调细胞吸光度值,提高细胞凋亡率,降低增殖凋亡相关蛋白Ki-67、PCNA和Bcl-2含量,上调Bax含量;miR-299-3p靶向负调控PAX3的表达;敲减PAX3可下调Ki-67、PCNA和Bcl-2蛋白含量,促进BAX表达,降低细胞吸光度值,提高细胞凋亡率;过表达PAX3逆转了miR-299-3p过表达对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的作用。结论:miR-299-3p通过靶向PAX3调控MDA-MB-231细胞增殖和凋亡,miR-299-3p可能是乳腺癌的潜在分子靶点。

目的 分析益气通脉汤治疗冠心病心力衰竭的效果及对N末端脑钠肽原(NT-proBNP)、内皮细胞特异分子(ESM-1)、网膜素(Omentin-1)水平的影响。方法 选取2018年4月—2020年6月郑州仁济医院收治的冠心病心力衰竭患者100例，随机分组。对照组给予常规治疗，观察组同时给予益气通脉汤治疗。分析2组心肺功能指标、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、NT-proBNP、内皮素-1(ET-1)、外周血核因子-KB(NF-κB)、ESM-1、OmentinRegorafenib-1水平变化和治疗效果。结果 观察组总有效率为高于对照组(P <0.05)。治cruise ship medical evacuation疗后，观察组TNF-α、NT-proBNP、ET-1水平低于对照组(P <0.05)。观察组Omentin-1水平高于对照组，NF-κB、ESM-1水平低于对照组(P <0.selleck Belumosudil05)。观察组LVEF、FVC、6 min步行试验水平显著高于对照组(P <0.05)。结论 益气通脉汤治疗冠心病心力衰竭疗效确切，可调节相关细胞因子表达，改善心肺功能。

目的 研究手法淋巴引流联合上肢功能锻炼对乳腺癌根治术后上肢淋巴水肿的预防价值。方法 回顾性选取2020年5—12月在阳江市人民医院接受乳腺癌根治术治疗的91例乳腺癌患者作为研究对象，按治疗手段不同，分为观察组（n=45）和对照组（n=46），观察组患者术后接受手法淋巴引流联合上肢功能锻炼治疗，对照组患者术后接受单纯上肢功能锻炼治疗，比较两组术后上肢淋巴水肿发生率、不同程度上肢淋巴水肿发生率、肩关节外展度和腋网综合征发生率的差异。结果 观察组患者术后12个月时上肢淋巴水肿发生率低于对照组，差异有统计学意义（P <0.05），同时两组上肢淋巴水肿发生率随时间的变化比较，差异有统计学意义（P <0.05）；观察组患者术后12个月时中度上肢淋巴水肿发生率低于对照组，差异有统计学意义（P <0NSC 119875试剂.05）；观察组患者术后6个月和12个月时肩关节外展度高于对照组，差异有统计学意义（P <0.05）；观察组患者术后12个月时腋网综合征发生率低于对照组，差异有统计学意义（P <0.05），同时两组腋网综合征发生率随时间的变化比较，差异有统计学意义（P <0.05）。Joint pathology结论 手法淋巴引流联合上肢功能锻炼可有效预防乳腺癌根治术后上肢淋巴水肿的发生，值得临床推BMN 673采购广应用。

目的:探讨PTselleckchemP1B抑制剂克拉拉明对糖尿病小鼠学习记忆损害的防治作用。方法:将54只8周龄雄性C57BL/6J小鼠分为Con组、DM组、DM+CA组和CA组,DM组给予高脂饲料联合链脲佐菌素(40 mg/kg)诱导,药物组鼻内给予6周的克拉拉明(10μg/12μL)治疗。通过免疫组化观察小鼠海马区PTP1B蛋白的表达;通过网络药理学预测PTP1B与糖尿病认知功能障碍的关系;通过MWM评估各组小鼠空间学习和记忆水平;通过FBG、IPGTT和ITT检测各组小鼠的血糖水平;通过测定TC、TG、HDL-C和LDL-C的含量检测各组小鼠的血脂代谢水平;通过H&E染色和Nissl染色观察各组小鼠海马损伤情况;通过电镜检查和蛋白免疫印迹试验观察各组小鼠海马的超微结构及突触蛋白的表达;通过蛋白免疫印迹试验检测各组小鼠海马中NLRP3炎症小体信号通路及胰岛素信号通路相关蛋白表达;通过蛋白免疫印迹试验、实时荧光定量PCR及免疫荧光检测各组小鼠海马中PTP1B的表达。结果:(1)免疫组化结果显示,与Con组相比,DM组在海马CA1、CA3区和PFC区中PTP1B蛋白表达明显升高。(2)网络药理学分析显示,PTP1B是糖尿病认知功能障碍的核心靶点。(3)MWM结果显示,与Con组相比,DM组逃逸潜伏期较长,目标象限停留时间和穿越平台的次数较少;与DM组相比,DM+CA组逃逸潜伏期缩短,目标象限停留时间及穿越平台的次数增加。(4)体重血糖结果显示,与Con组相比,DM组体重减轻,血糖升高;与DM组相比,DM+CA组体重、血糖明显改善。(5)生化指标结果显示,与Con组previous HBV infection相比,DM组TC、TG和LDL-C水平明显升高,HDL-C水平明显降低;与DM组相比,DM+CA组TC、TG和LDL-C水平明显降低,HDL-C水平明显升高。(6)H&E染色和Nissl染色结果显示,与Con组相比,DM组海马CA1、CA3和DG区神经元损伤严重;与DM组相比,DM+CA组神经元损伤明显减轻。(7)电镜检查结果显示,与Con组相比,DM组表现出细胞核皱缩、线粒体空泡化及内质网脱颗粒化现象;给药后,上述现象明显逆转。(8)蛋白免疫印迹试验结果显示,与Con组相比,DM组PSD-95、SYN-1、SYP、p-IRS1、p-PI3K、p-AKT和p-GSK-3β的蛋白表达明显减少,NLRP3、ASC、Caspase-1、COX-2、IL-1β、TNF-α和PTP1B的蛋白表达明显增加;与DM组相比,DM+CA组PSD-95、SYN-1、SYP、p-IRS1、p-PI3K、p-AKT和p-GSK-3β的蛋白表达明显增加,NLRP3、ASC、Caspase-1、COX-2、IL-1β、TNF-α和PTP1B的蛋白表达明显减少。(9)实时荧光定量PCR结果显示,PTP1B的m RNA表达量在各组小鼠中没有明显的差异。(10)免疫荧光结果显示,与Con组相比,DM组海马CA1和CA3区PTP1B的蛋白表达明显增加;与DM组相比,DM+CA组海马CA1和CA3区PTP1B的蛋白表达明显减少。结论:(1)糖尿病小鼠海马CA1、CA3和PFC区PTP1B蛋白表达增加;(Alisertib使用方法2)网络药理学预测PTP1B是糖尿病认知功能障碍的关键靶点;(3)克拉拉明改善糖尿病小鼠的空间学习和记忆损害;(4)克拉拉明改善糖尿病小鼠超微结构,缓解海马神经元损伤;(5)克拉拉明通过降低PTP1B的蛋白表达,抑制NLRP3信号通路,调节胰岛素信号通路来改善糖尿病小鼠学习记忆损害。

目的 探索瑞芬太尼后处理对心肌缺血再灌注(IR)损伤保护作用的机制。方法 用结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法建立心肌IR损伤模型。将成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和实验组。假手术组只穿线不结扎；模型组，缺血30 min,再灌注30 min;实验组从大鼠缺血25 min至再灌注前5 min,连续输注瑞芬太尼10μg·kg~(-1)·min~(-1)。用试剂盒法检测丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽/L-谷胱甘肽(氧化)(GSH/GSSG)的含量，用实时荧光定量聚合酶链反应检测Nrf2、血红素氧化酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)的变化。结果 实验组、模型组与假手术组的MDA浓度分别为(4.61±2.04),(8.02±2.12)和(3.78±1.63)nmol·mg~(-1),SOD活性分别为(86.49±15Behavioral toxicology.53),(60.43±24.71)和(100.42±16.47)U·mg~(-1),GSH/GSSG比值分别为8.23±3.68,2.59±0.88和9.21±4.08,Nrf2表达水平分别为3.11±0.78,2.08±1点击此处.06和1.00±0.09,HO-1表达水平分别为3.29±1.20,2.23±0.87和1.00±0.09,NQO1表达水平分别为3.35±1.08,2.29±0.94和1.00±0.12。实验组的上述指标与模型组比较，差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 瑞芬太尼后处理可能通过Nrf2E-616452细胞培养通路激活自噬，保护心肌IR损伤。

心脑血管病（包括冠心病、心力衰竭、脑卒中等）是临床最常见问题。血管再通术后，却仅有1/3患者病情改AZD2281善，1/3患者无效，1/3患者反而恶化、休克、甚至死亡。西医认为是由缺血再灌注损伤造成的。脑卒中溶栓、血管内治疗后血管再通率高而患food microbiology者康复比例较低。中医认为，气为血之帅，血为气之母，仅改善缺血而忽略气的不足，则难以提高临床疗效。肺主呼气，肾主纳气，气机之枢纽在于“脾主升清，胃主降浊”。肺气虚则心脉瘀滞GSKJ4溶解度，肾气虚则喘、短气，脾胃气机失调则气血生化之源枯。气虚则行血摄血不足，可导致血瘀血溢等心脑血管病的发生。透析可致患者脑出血、卒中；机械通气可引起急性肾衰；血管再通术后可加重心梗、脑梗。因此，防治心脑血管病除了改善缺血，更需纠正短气，并在日常起居、饮食药物、精神情志方面注意避免伤肾、伤肺、伤脾胃。

蓝狐作为一种重要的毛皮类经济动物,在北部地区被广泛的养殖。近年来蓝狐感染兔脑炎微孢子虫的病例,在我国几个主要养殖区均有发生。当蓝狐幼狐感染后,主要表现为生长停CL13900试剂滞、腹泻消瘦和死亡,即便未死亡,生长也会受到影响形成“僵狐”。蓝狐患病后期,以神经症状、肾脏肿大为主要病症。有些成年蓝狐感染后并不表现临床症状,但可作为传染源传播病原。蓝狐患病后不仅毛皮质量严重降低,而且隐性感染的种狐会垂直传播给下一代,从而给蓝狐养殖业带来巨大的经济损失。兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon cuniculi)是微孢子虫的一种,是细胞内寄生的单细胞真核生物,属于真菌界的一员。成熟的孢子可通过蓝狐泌尿道排出体外,从而进行传播和感染其他动物。母畜隐性感染微孢子虫时,还可通过垂直传播感染子代,造成大量种畜的淘汰。本病的隐性感染率较高,不仅能在动物之间进行广泛传播,还可引起人畜共患病。并且目前缺少有效的免疫及治疗手段,因此建立一种能够大规模检测,蓝狐是否感染兔脑炎微孢子虫的检测方法,是值得我们深入研究的。本研究通过接种犬肾(MDCK)细胞,对兔脑炎微孢子虫进行培养纯化,通过PCR和革兰氏染色进行验证。对ITS1基因序列进行分析时,发现其属于兔脑炎微孢子III型,并在革兰氏染色时发现有浓染的现象。通过制定免疫方案,制备并纯化,抗兔脑炎微孢子虫的多克隆抗体和蓝狐抗体。测定多克隆抗体效价可达:1:5.112×10~5其Ig G含量可达1.77mg/ml,阳性狐狸血清的效价可到1:64其Ig G含量在0.15 mg/ml。本研究通过对反应条件的不断优化,建立了夹心ELISA检direct to consumer genetic testing测蓝狐兔脑炎微孢子虫的方法,最终确定了最佳包被抗体浓度为5μg/ml,检测抗体最佳浓度为37.5μg/ml;确定抗原孵育2 h,检测抗体孵育1.5 h;最佳包被条件为4℃过夜;酶标二抗以1:5000的比例稀释后反应1 h;选择5%脱脂乳作为封闭液,封闭1 h。并从灵敏度、重复性、特异性和临床样品检测效果等方面对该方法进行了评价。其对纯化兔脑炎微孢子虫最低检测灵敏度为6.25×10~5 spores/ml;对人工添加的最低检测灵敏度为1.25×10~6 spores/ml;变异系数均小于10%;与无乳链球菌和绿脓杆菌均无交叉反应。在初步应用方面,与PCR检测方法的符合率为79.97%。结果表明,本试验所建立的蓝狐兔脑炎微孢子虫夹心ELISA,在检测纯化孢子和人工添加孢selleck激酶抑制剂子时均有良好的表现,且在实践中也具有一定的应用性。本试验建立的夹心ELISA检测方法,可为大规模筛检蓝狐感染兔脑炎微孢子虫时,提供一种更简单快速的检测方法,同时也为兔脑炎微孢子虫的免疫学检测方法的研究提供了理论依据。

目的：探讨清金化痰汤通过Bax、Bcl-2通路对脂多糖（LPS）及香烟烟雾(CSE)干预的大鼠原代气道上皮细胞自Cleaning symbiosis噬的影响。方法：将大鼠按照随机抽签法分为正常组、模型组、阳性组、中药组，每组10只，采用气管滴注LPS+烟熏制备AECOPD大鼠模型，并且对气道上皮细胞（正常和痰热郁肺型AECOPD大鼠）进行原代提取。制备清金化痰汤以及罗红霉素含药血清作用于上皮细胞。MTT检测清金化痰汤含药血清干预后细胞增殖率；流式细胞术检测清金化痰汤含药血清干预后细胞凋亡率；AD-mcherry-EGFP-lc3腺病毒转染检测气道上皮细胞内自噬体含量；Western Blot检测气道上皮细胞内凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达。结果：MTT结果显示：正常组与给药组跟模型组比较均具有显著性差异（P＜0. 05），流式结果显示：与正常组相比，模型组细胞活力明显降低（P＜0. 05）；与模型组比较，在使用含药血清后，细胞活力具有明显提升（P＜0. 05）；腺病毒转染显示：模型组与正常组相比大鼠气道上皮细胞自噬体数量增多（P＜0. 05）；与模型组比较，经过含药血清处理后，AECOPD大鼠的气道上皮细胞内的自噬体明显降低（P＜0. 05）；Western Blot结果显示：与正常组比较，模型组凋亡蛋白表达明显升高（P＜0. 05）；与模型组比selleck较，清金化痰汤药物干预组凋亡蛋白Bax表达下降(P＜0. 05) ; 清金化痰汤高剂量组与罗红霉素组比较无统计学意义。结论：清金化痰汤能抑制气道上皮细胞中炎症反应和凋亡Tezacaftor化学结构的机制可能与调节自噬体有关。

树突状细胞(Dendrtic cells,DCs)疫苗在临床上面临的主要问题之一是DCs成熟度不足。尽管刺激DCs激活和成熟的方法有很多,但是仍然不足以刺激DCs完全成熟,需要更有效的方法来促使DCs成熟并克服免疫抑制的微环境。肿瘤坏死因子(TNF)受体相关因子6(TRAF6)是一种E3泛素连接酶,是Toll样受体(TLR)家族的信号转导分子,TRAF6介导的信号传导已被证明对DCs的发育、稳MCC950分子式态和激活至关重要。多项研究发现TRAF6缺陷的DCs表现出明显的表面分子上调缺陷和严重的诱导Th1细胞活化的细胞因子产生缺陷。因此,本研究拟以TRAF6为切入点,进行TRAF6基因过表达以期提高DCs的成熟度,从而应用于肿瘤的治疗,提高DCs疫苗的治疗效果。对小鼠来说,最常用的获得DCs的方法是诱导骨髓细胞,获得骨髓来源的DCs(Bone Marrow-Derived Dendritic Cells,BMDCs)。为了证实TRAF6对DCs成熟及诱导T细胞免疫应答的影响,我们在体外用TLR激动剂刺激BMDCs,通过CRISPR/CAS9技术在BMDCs中敲除TRAF6,分析其成熟度的变化,结果证实了TRAF6是BMDCs成熟的关键因子。为了将TRAF6过表达的BMDCs用作DCs疫苗进行抗肿瘤治疗,我们首先构建了TRAF6过表达的BMDCs,体外研究发现,在BMDCs中过表达TRAF6能够提高BMDCs的成熟度并诱导CD4~+T细胞向Th1型细胞活化,并且过表达TRAF6可以在现有刺激BMDCs成熟方法的基础上进一步提高成熟度。在此基础上,我们进一步将负载MUC1多肽的TRAF6过表达的BMDCs作为疫苗用于B16-MUC1黑色素瘤荷瘤小鼠的体内治疗。结果发现,负载MUC1多肽的TRAF6过表达的BMDCs可显著诱导抗肿瘤的Th1应答和CTL杀伤活性,并抑制Tregs活性,从而抑制肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存期。这些结果pre-deformed material提示,过表达TRAF6的DCs应用于DCs疫苗中可以进一步提高DCs疫苗的疗效。综上所述,本研究发现过GSK2118436 IC50表达TRAF6可以在现有刺激BMDCs成熟方法的基础上进一步提高其成熟度。更重要的是,本研究首次将负载MUC1多肽的TRAF6过表达的BMDCs在小鼠中作为疫苗用于肿瘤的治疗,证明了TRAF6修饰的BMDCs作为疫苗的应用前景,为将来开发TRAF6修饰的DCs疫苗奠定理论和实验基础,为抗肿瘤DCs疫苗的开发和研制提供新的思路。

目的 探讨雷公藤甲素引起急性髓性白血病细胞凋亡的相关分子机制。方法 使用不同浓度雷公藤甲素处理HL-60,U937细胞24 h后用MTT法检测细胞存活率，流式细胞仪检测凋亡，Western blotting检测P62、LC3B、CaspasePF-07321332溶解度-3、PARP-1及细胞色素C，联用自噬抑制剂3-MA预处理U937细胞后流式细胞仪检测凋亡，自噬以及凋亡相关蛋白用蛋白印迹法检测。结果 雷公藤甲素对HL-60、U937细胞的IC50值分别为(33.86±2.84)、(36.67±3.15) nmol/BIBW2992说明书L，雷公藤甲素可明显诱导HL-60、U937细胞凋亡，差异有统计学意义(P<0.01)。雷公藤甲素可降低自噬降解底物蛋白P62表达，自噬标志蛋白LC3B-II表达上调，说明雷公藤甲素可诱导自噬。自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤预处理细胞，阻断凋亡信号通路的激活，雷公藤甲素诱导的白血病细胞凋亡明显减少。结论 雷公藤甲素可促进自噬体降解进而激活凋亡信号通路，诱导急性Cloning Services髓性白血病细胞凋亡。