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目的 构建蜱传脑炎病毒BI 10773体外(tick-borne encephalitis virus, TBEV)衣壳蛋白(capsid proteinLiving donor right hemihepatectomy, C)原核表达质粒，并以其表达、纯化的C蛋白作为抗原检测临床血清，评价其在蜱传脑炎(tick-borne encephalitis, TBE)临床血清学诊断中的应用。方法 登录Genbank对TBEV“森张”株C蛋白基因序列设计扩增引物，以PCR扩增C蛋白目的基因并克隆至原核表达载体pET-32a(+)后，构建重组表达质粒pET-32a-C。再将其转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞，采用IPTG诱导剂诱导表达，表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化后，Western blot检测其反应原性；以制备的C蛋白作为包被抗原，用间接ELISA分别检测20份TBEV IgG抗体阳性临床血清、10份流行性乙型脑炎病毒(Japanes此网站e encephalitis virus, JEV)阳性临床血清及20份阴性血清，并计算检测的特异性和敏感度。结果 重组表达质粒pET-32a-C序列测定正确；经12%SDS-PAGE电泳分析，重组C蛋白主要为可溶性蛋白表达；纯化后蛋白纯度>90%,经Western blot鉴定可与TBEV全病毒血清抗体特异性结合。间接ELISA定性检测临床TBE血清，其特异性与敏感度分别为96.7%和95.0%。结论 成功构建了TBEV衣壳蛋白重组表达质粒pET-32a-C并在大肠埃希菌中实现诱导表达；表达的重组C蛋白可与TBEV阳性血清特异性结合，在临床疾病的血清学诊断上具有一定的应用价值。

目的：探讨和厚朴酚通过调节自噬对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元及AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)通路的影响。方法：构建帕金森病模型小鼠，分为模型组、和厚朴酚低、高剂量组和自噬抑制组，4组小鼠分别灌胃生理盐水、20 mg/kg和厚朴酚、60 mg/kg和厚朴酚及60 mg/kg和厚朴酚，自噬抑制组同时灌胃20 mg/kg氯喹，另设未造模小鼠为对照组，每组16只，灌胃14 d。转棒实验及爬杆实验测试小鼠的行为学功能，TUNELselleckchem 3-Methyladenine染色检测黑质神经元凋亡率，免疫组化染色检测黑质中beclin-1阳性细胞数，Western blot实验检Childhood infections测黑质中p-AMPK/AMPK、SIRT1、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-II/LC3-I、beclin-1、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达。结果：与对照组相比，模型组小鼠寻找更多的跌落潜伏期显著缩短，爬杆时间显著延长(P<0.05)，黑质神经元凋亡率及Bax和caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05)，黑质中beclin-1阳性细胞数及p-AMPK/AMPK、SIRT1、LC3-II/LC3-I和beclin-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比，和厚朴酚低、高剂量组小鼠上述指标呈相反趋势，且呈现剂量依赖性(P<0.05)。自噬抑制组处理后逆转了和厚朴酚的作用(P<0.05)。结论：和厚朴酚能激活自噬，活化AMPK/SIRT1通路，提高帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元的自噬水平，减少细胞凋亡，改善其行为学功能。

目的 应用数据挖掘方法研究林毅教授对乳腺癌围化疗期的治疗经验。方法 筛选2019年1月—2021年12月林毅教授诊治pharmaceutical medicine的乳腺癌围化疗期病案，通过中医传承辅助平台，采用频数分析、关联规则Apriori算法、改进的互信息法、复杂系统熵聚类等数据挖掘方法，进行药物频次、药性四气五味、归经及组方规律分析。结果 共纳入198个病案，涉及处方285个，位于前十的中药依次为大枣、白术Captisol价格、黄芪、枸杞子、鸡血藤、当归、黄精、麦芽、酸枣仁、远志，中药AZD2281 IC50四气频次前两位为温、平，五味频次甘味最高，归经前六依次为胃、脾、肾、肝、肺、心经，确定药物之间的关联规则，挖掘出6个核心组合。结论 林毅教授在乳腺癌围化疗期的治疗经验为：因病因时，中西结合，扶正为主，辅助祛邪，辨证论治；顾护脾、胃、肝、肾，兼顾心肺，立健运脾胃、补益气血、填精生髓治法，常用归脾汤加减合自拟三红汤送服益肾生髓液，药用平和。

目的 前期研究表明，追风伞影响了关节滑膜中与炎症、细胞凋亡、血小板聚集、蛋白质合成过程相关的内源性靶点的表达。这可能有助于其对骨关节炎的治疗。本研究通过这些相关机制来探讨Probiotic culture追风伞对骨关节炎模型中关节滑膜损伤的保护作用。方法 使用碘乙酸单钠诱导大鼠骨关节炎模型。selleck合成经追风伞干预后，运用组织病理学和免疫组化分析、酶联免疫吸附分析和蛋白质印迹法进行相关指标的检测。结果碘乙酸钠MDV3100细胞培养可诱导骨关节炎模型的关节滑膜肿胀和显微结构的改变，并能引起关节滑膜中与炎症、凋亡、血小板聚集、蛋白质合成过程相关的靶点的表达失调。追风伞可以逆转这些病理过程以及相关靶点的异常表达。结论 追风伞对碘乙酸钠诱导的骨关节炎模型中的关节滑膜损伤具有很好的保护作用。

为了获得有较好疗效的治疗仔猪大肠杆菌病的中药组方，采用中兽医学理论拟定了4个中药组方。利用建立的人工感染小鼠大肠杆菌病病理模型，分别将4个组方(以生药计)按50,20,10 g/kg的剂量灌服治疗组小鼠，感染组和空白组均灌服无菌生理盐水，持续观察并记录。7 d后测量小鼠血常规，用酶联免疫吸附法测量小鼠血液中Barasertib使用方法免疫球蛋白IgG、IgA及炎性因子IL-1β、CRP的含量。结果表明：与空白组相比，治疗组小鼠血液中与细菌感染引起炎症反应有关的白细胞总数和中性粒细胞水平升高，但低于感染组。与空白组相比，治疗组小鼠血清中IgG、IgA水平降低，但高于感染组；与空白组相比，治疗组小鼠血清中IL-1β、CRP水population genetic screening平升高，但低于感染组。说明4种中药组方均能使治疗组小鼠血液中主要炎性细胞数量下降，免疫球蛋白含量升高，达到了缓解炎症反应和提高动物免疫力的作用。测得50 g/kg剂量的B1组方有较好的效果，为有效治疗仔猪大肠杆菌病提供了理论selleckchem基础。

目的：分析BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路在儿童口腔上皮牙源性病变中的作用及免疫反应。方法：以2018年6月—2020年6月间本院收治的50例口腔上皮牙源性病变患儿的口腔上皮病变组织标本（病例组）和50例健康儿童的口腔上皮组织标本（对照组）为研究对象，均行BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路蛋白检测、免疫功能T细胞亚群（CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+）检测和免疫球蛋白指标（IgG、IgA、IgM）检测，对比对照组和病例组上述指标的差异，并采用Pearson相关性分析法分析BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路蛋白与免疫功能相关指标的相关性。结果：病例组的脑源性神经营养因子（brain-derived neurotronon-alcoholic steatohepatitisphic factor,BDNF）、酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB）、蛋白激酶B(protein kinase B,PkB，又称Akt）、磷酸化S6核糖体蛋白抗体（anti-phospho-S6 ribosoma protein,p-RPS6）的平均光密度值均高于对照组（P<0.05）。病例组的免疫功能T亚群寻找更多细胞（CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+）、免疫球蛋白指标（IgG、IgA、IgM）数据值均低于对照组（P<0.05）。BDNF、TrkB、Akt、P-RPS6的平均光密度值与免疫功能T细胞亚群（CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+）数据值、免疫球LBH589蛋白指标（IgG、IgA、IgM）数据值呈负相关（均P<0.05）。结论：口腔上皮牙源性病变患儿存在明显的BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路相关蛋白表达异常和免疫功能抑制，且免疫功能抑制与BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路蛋白异常表达相关。

目的 观察无驱动基因突变的晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者二线治疗的疗效及不良反应，为无驱动基因突变的晚期NSCLC患者二线治疗提供理论依据和治疗策略。方法 回顾性分析蚌埠医学院第一附属医院2019年7月至2020年12月期间收治的无驱动基因突变的晚期NSCLC患者90例。按照治疗方selleckchem CP-456773案分为3组，A组30例，采用多西他赛单药化疗，B组30例，采用安罗替尼+多西他赛联合治疗，C组30例，采用信迪利单抗+多西他赛联合治疗。分析3种二线治疗方案的临床疗效，评价其安全性与不良反应发生情况。结果 C组的中位无进展生存期(progression-free survival, PFS)为7.3个月，中位总生存时间(overall survival, OS)为10.3个月，其中完全缓解(complete response, CR)0例，部分缓解(partial response, PR)11例(36.67%),疾病稳定(stable disease, SD)13例(43.33%),疾病控制率Food toxicology(disease control rate, DCR)为80.00%,客观缓解率(objective response rate, ORR)为36.67%,B组的中位PFS为6.6个月，中位OS为8.5个月，DCR为50.00%,ORR为23.33%,B组及A组的中NSC 127716小鼠位PFS、中位OS、DCR、ORR均低于C组，差异有统计学意义(P<0.05)。常见的不良反应有肝功能异常、皮肤及神经末梢反应、胃肠道反应、骨髓抑制、心血管事件等，组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 信迪利单抗联合多西他赛治疗能够改善患者的OS、PFS,不良反应可控，为无驱动基因突变的晚期NSCLC二线治疗提供了选择。

研究背景和目的神经营养酪氨酸受体激酶(neurotrophic tyrosine receptor kinase,NTRK)基因编码原肌球蛋白受体激酶,该家族基因与不同的伴侣基因重排后翻译的新融合蛋白可持续激活下游通路,已被证实是多种人类癌症的驱动因素。实体瘤中NTRK融合频次约为0.3%左右,且融合伴侣基因较多。检测NTRK融合的方法有免疫组化(immunohistochemistry,IHC)、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)、逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptase PCR,RT-PCR)、下一代测序(nextbiocomposite ink generation sequencing,NGS)和 nCounter 系统(NanoString Technologies)等,针对IHC是否是一种可靠的NTRK融合检测方法,IHC 阳性判读标准等问题,研究结论并不一致。甲状腺乳头状癌(papillarythyroidcarcinoma,PTC)是甲状腺癌中最常见的类型,已知PTC中NTRK融合频次为1%～25%,融合比例高于其他常见肿瘤。本研究旨在运用IHC和NGS方法检测PTC中NTRK融合,探讨IHC能否预测NTRK融合情况,并分析NTRK融合PTC临床病理特征和分子病理学特点。研究方法收集2017年6月至2020年6月深圳市人民医院病理科存档的848例PTC样本,均经过病理确诊。利用pan-TRK(EPR17341,Ventana)IHC检测PTC组织中TRK蛋白过表达水平,用NGS检测IHC 阳性样本中NTRK融合,进一步用IHC和PCR检测NTRK融合PTC的免疫表型和BRAF V600E突变。收集所有患者的临床病理特征,并总结NTRK融合与临床病理特征之间的关系。分析检验认为P<0.05有统计学差异。研究结果1.在848例PTC样本中,IHC发现120例(14.15%)pan-TRK阳性样本,81.7%(98/120)显示弱阳性。2.IHC 阳性样本均显示≥10%的肿瘤细胞着色,阳性定位在细胞质、核和膜,细胞质染色最常见(111/120,92.5%)。pan-TRK IHC着色亚细胞定位与NTRK融合相关(P=0.028)。3.NGS 显示 13 例 NTRK 融合,均表达 pan-TRK、TTF1、TG 和 PAX8,不表达 s100、Mammaglobin 和 GATA-3,均为 BRAFV600E 野生型。NTRK 融合频次为1.53%。4.共发现7种伴侣基因,分别是:ETV6、SQSTM1、TPR、EML4、CDH1、GJD2 和 TFG。5.IHC染色强度与NTRK融合相关(P<0.001),pan-TRK IHC预测NTRK融合的敏感度和阴性预测值均为100%,特异度为21.9%,阳性预测值为10.83%。6.NTRK融合与肿瘤变异类型(P<0.001)、慢性淋巴细胞性甲状腺炎(P=0.015)、瘤体多灶性生长(P<0.001)和砂粒体(或钙化)(P<0.001)有点击此处统计学相关性,与性别、年龄、肿瘤大小和淋巴结转移均无统Belumosudil临床试验计学意义。研究结论1.NTRK融合在PTC中低频变异,包含多个融合伴侣。2.pan-TRK IHC可作为NTRK融合检测的高效筛查手段,但特异度不足,pan-TRK IHC 阳性病例需用NGS或FISH证实。3.NTRK融合PTC多数组织学表现为滤泡变异或滤泡和乳头混合变异模式,常见慢性淋巴细胞性甲状腺炎、多灶性生长和钙化。

目的 探究长链非编码RNA SNHG12在乙肝病毒X蛋白(HBx)诱导肝癌发生过程中的作用。方法 把课题组构建的肝前体细胞14-19、EGFP-14-19、HBx-EGFP-14-19通过小鼠肝门静脉注射到体内；采用qRT-PCR、Western blot方法检测30 d, 90 d, 180 d, 360 d小鼠肝脏组织及细胞模型中HBx、SNHG12以及下游调节基因的mRNA和蛋白表达情况；使用si-SNHG12干扰其表达，并通过CCK-8、划痕实验、transwell实验、流式细胞术观察其对体外表型影响；检测SNHG12及下游的mRNA和蛋白表达；HE染色观察小鼠肝组织切片。结果 qRT-PCR结果表明SNHG12、Notch1、Hes1在HBx-EGFP-14-19细胞及各时间段的小鼠肝组织中均上调(F=48.808,P<0.000 Biomass segregation1;F=13.322,P<0.000 1);WestPI3K/Akt/mTOR抑制剂ern blot结果显示在HBx过表达细PLX5622 IC50胞及动物模型中，受HBx诱导SNHG12表达升高后Notch1信号通路被激活，促凋亡因子Bax下调，抗凋亡因子Bcl-2上调，细胞周期因子CDK2和Cyclin E上调；抑制SNHG12表达后，qRT-PCR、Western blot实验结果显示SNHG12(t=22.746,P<0.000 1)及其上述基因表达均扭转，CCK-8实验显示细胞增殖受到明显抑制，流式细胞术检测显示细胞凋亡增多，划痕及transwell实验表明细胞迁移及侵袭减弱。结论 HBx通过上调SNHG12诱导Notch1表达，导致细胞增殖、周期和凋亡异常，从而促进肝癌的发生。

光热治疗（Photothermal-therapy，PTT）是一种新型肿瘤治疗方式，面临着低温治疗时热休克蛋白耐热保护和高温治疗时非特异性热损伤等诸多难题。相关研究数据表明，通过抑制热休克蛋白的表达，可以显著提高肿瘤细PF-02341066分子式胞的热敏感性，进而降低治疗时所需温度。基于此，本研究设计了一种新型仿生基因递送系统，即将NK细胞膜包覆在DSPE-PEG-NH_(2)-HSP90-siRNA、DSPE-PEG-MAL和光热剂IR-792形成的壳核结构外层，形成NK@RNPs。利用透射电子显微镜（TEM）、纳米粒度仪、紫外-可见光谱仪（UV-Vis）和荧光光谱仪等对新型仿生基因递送载体的基本形貌和特征进行了表征。在模拟体内环境中体外评估NK@RNPs释放HSP90-siRNA的能力，结果表明，经谷胱甘肽（Glutathione，GSH）和二硫苏糖醇（Dithiothreitol，DTT）处理后，siRNA基本上全部释放；以小鼠乳腺癌（4T1）细胞为体外研究对象，相较于RNPs，NK@RNPs表现出更为优越的肿瘤细胞靶向性。激光共聚焦和流式细胞结果显示，低功率808 nm激光处理下，NK@RNPs即可显著杀伤肿瘤细胞；同时，激光共聚焦和RT-qPCR结果显示，NK@RNPprotective autoimmunitys可以从基因水平和蛋白水平上显著抑制HSP90表达；此外，体外评估NK@RNPs生物安全性结果表明，NK@RNPs具有良好的生物安全性和相容性。综上所述，新型仿生基因LXH254递送载体NK@RNPs既可靶向肿瘤细胞，又可抑制肿瘤细胞内热休克蛋白表达，发挥较好的低温光热治疗乳腺癌的效果。