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背景与目的：前哨淋巴结活检（sentinel lymph node biopsy,SLNB）是临床淋巴结（lymph nodes,LN）阴性早期乳腺癌患者的标准分期技术，蓝染法联合核素法作为SLNB的标准方法仍有一定的局限性。应用新型荧光靶向示踪剂吲哚菁绿（indocyanine green,ICG）与利妥昔单抗（rituximab,RIT）偶联物（indocyanine green-rituximab,ICG-RIT），搭建手持式光声信号传感系统（photoacoustic signal sensing system,PASS）及手持式光声成像（photoacoustic imaging, PAI）系统，探索其探测富集ICG-RIT的淋巴组织穿透深度，研究其定位前哨淋巴结的可行性。方法：为探索PASS及PAI的组织穿透能力及定位能力，通过仿体实验将鸡胸组织覆盖于ICGselleckchem-RIT染色的明胶仿体上模拟体内LN，通过PASS探测不同深度下ICG-RIT仿体的光声信号强度；同时设计人体组织试验—术前于患乳外上象限注射ICG-RIT，取荧光显像的LN于腋窝脂肪下，对比PASS、PAI及超声成像深度区别。通过SD大鼠后肢淋巴引流模型探索该技术作为SLNB的可行性，在SD大鼠后肢足垫皮下注射ICG-RIT，比较SD大鼠腘LN及髂LN的PASNSC 125973 MWS及PAI定位区别。结果：仿体实验结果显示，PASS探测鸡胸组织下ICG-RIT仿体呈现特征性单峰信号，且信号强度与组织深度成反比，最大探测深度平均达52.42 mm。人体组织试验结果显示，PASS探测腋窝脂肪下ICG-RIT染色LN最大探测深度达32.72 mm，对比鸡胸组织下6.25%浓度ICG-RIT染色仿体最大探测深度达39.72 mm;PAI探测腋窝脂肪下ICG-RIT染色LN深度达25 mm。SD大鼠模型结果显示，ICG-RIT停留于SD大鼠腘LN，在PASS中光声信号呈现特征性单峰曲线，PAI呈现特征性“热点”图，而髂LN未见明显光声信号，对比亚甲蓝则同cytotoxic and immunomodulatory effects时染色腘LN及髂LN。结论：利用ICG-RIT的光声效应及靶向LN特性，通过手持式PASS及手持式PAI能准确定位SLN，同时有良好的组织穿透深度，具备良好的应用前景，但仍需进一步临床试验数据证实。

目的 长链非编码RNA(LncRNA)IFNGPCR Thermocyclers-AS1与冠心病炎症细胞因子水平相关，本研究旨在探讨LncRNA IFNG-AS1对冠心病粥样斑块形成的主要成分巨噬细胞的增殖、凋亡分化及炎症水平的影响。方法 通过PMA将单核细胞诱导为巨噬细胞，并将诱导后的细胞SBE-β-CD采购分为不同组进行干预，M0组为仅诱导，M1组为诱导加炎症刺激，M1+Negative Control组为M1的基础上转染阴性对照ASO,M1+ASO-IFNG-AS1组为M1的基础上加沉默该LncRNA的ASO。并检测四组不同处理细胞的增殖、凋亡、迁移及分化情况，并检测炎症细胞因子及NF-κB炎症信号通路激活情况。结果 M1Taurine核磁+ASO-IFNG-AS1组巨噬细胞增殖、迁移比例降低，凋亡比例明显升高，且M1+ASO-IFNG-AS1组巨噬细胞倾向于M2型分化。ELISA及WB结果显示，TNF-α、IL-6水平M1+ASO-IFNG-AS1组低于M1组、M1+Negative Control组(P<0.05)。IL-10的水平M1组、M1+Negative Control组低于M0组及M1+ASO-IFNG-AS1组(P<0.05)。p50mRNA表达水平M1+ASO-IFNG-AS1组水平低于M1组、M1+Negative Control组(P<0.05);p-p65以及p50蛋白表达水平，M1组、M1+Negative Control组及M1+ASO-IFNG-AS1组均高于M0组(P<0.05),其中M1+ASO-IFNG-AS1组水平低于M1组、M1+Negative Control组(P<0.05)。在LncRNA IFNG-AS1被抑制后细胞炎症细胞因子IL-6、TNF-α表达降低，抑制炎症的细胞因子IL-10表达增加，p50表达水平降低，p65磷酸化水平降低。结论 LncRNA IFNG-AS1被沉默后可抑制巨噬细胞增殖、迁移，促进凋亡并抑制NF-κB信号通路的激活降低炎症细胞因子表达水平。

目的 探讨电针通过沉默信息调节因子(SIRT1)1-叉头状转录因子(FOX)O1通路激活自噬减轻神经病理性疼痛(NP)的机制。方法 实验分为假手术组、模型组、电针组、电针+抑制剂组，每组12只。除假手术组外，其余各组建立坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)所致NP大鼠模型，造模第7天电针组选用“环跳”“阳陵泉”穴电针针刺；电针+抑制剂组在电针组基础上分别在第7天、第10天、第14天脊髓鞘内注射SIRT1抑endophytic microbiome制剂EX-527;假手术组和模型组鞘内注射等体积二甲基亚砜(DMSO)。造模前、造模后给药前、给https://www.selleck.cn/products/Y-27632.html药后测定机械缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(PWTL);免疫荧光检测脊髓SIRT1蛋白表达情况；透射电镜下观察脊髓超微结构；Western印迹检测脊髓中微管相关蛋白1轻链(LC)3、SIRT1、FOXO1蛋白水平。结果 造模前，各组MWT、PWTL差异无统计学意义(P>0.05)。造模后给药前，与假手术组相比，模型组、电针组、电针+抑制剂组MWT、PWTL明显降低(P<0.05)。给药后，模型组出现线粒体肿胀破裂现象，且与溶酶体融合，未发现明寻找更多显的自噬小体；电针组线粒体结构基本恢复，自噬小体数量多，双膜包裹里可见少量的内质网碎片；电针+抑制剂组自噬小体数量较电针组明显减少，自噬小体部分出现单膜结构。与假手术组相比，模型组MWT、PWTL、脊髓中SIRT1蛋白免疫荧光强度和蛋白水平、FOXO1、LC3Ⅱ蛋白水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显降低(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白水平明显升高(P<0.05);与模型组相比，电针组MWT、PWTL、脊髓中SIRT1蛋白免疫荧光强度和蛋白水平、FOXO1、LC3Ⅱ蛋白水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显升高(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白水平明显降低(P<0.05);与电针组相比，电针+抑制剂组MWT、PWTL、脊髓中SIRT1蛋白免疫荧光强度和蛋白水平、FOXO1、LC3Ⅱ蛋白水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显降低(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论 电针通过激活SIRT1-FOXO1通路激活自噬减轻NP,实现对NP大鼠的保护。

目的 设计合成4个苯氧乙酸类化合物，通过不同方法表征其对人谷胱甘肽-S-转移酶Mu(glutathione-S-transferase Mu, GSTM)的抑制性能，考察苯氧乙酸类化合物与GSTM之间的构效关系。方法 设计合成含α,β-不饱和酮结构的4-丙烯酰苯氧乙酰乙胺(Ⅰa)、N,N’-(4-(丙烯酰基)苯氧乙酰基)丁二胺(Ⅱa)和不含α,β-不饱和酮结构的4-丙酰苯氧乙酰乙胺(Ⅰb)、N,N’-(4-(丙酰基)苯氧乙酰基)丁二胺(Ⅱb),利用初速度法表征4个化合物对GSTM的半抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC_(50))和表观抑制常数(inhibition co更多nstant,K_i),利用荧光光PAMP-triggered immunity谱法表征4个化合物对GSTM的解离常数(dissociation constant,K_d)。结果 含α,β-不饱和酮结构的Ⅰa、Ⅱa可与谷胱甘肽(glutathione, GSH)发生亲电加成反应，与酶和GSH孵育原位生成产物后，其对GSTM的IC_(50)分别为(67±6)μmol/L、(0.10±0.02)μmol/L (n=2);不含α,β-不饱和酮结构的Ⅰb、Ⅱb对GSTM无明显抑制作用。Ⅰa相对GSH的K_i为(19.9±1.6)μmol/L,相对CDNB的K_i为(9.1±0.7)μmol/L (n=3);Ⅱa相对GSH的K_i为(0.063±0.005)μmol/L,相对CDNB的K_i为(0.079±0.006)μmol/L (n=3);可见Ⅱa较Ⅰa的K_i低(P<0.05)。荧光光谱法测得Ⅰa、Ⅰb、Ⅱa、Ⅱb的K_d分别为(41.5±1.https://www.selleck.cn/products/BAY-73-4506.html8)μmol/L、(38.9±1.7)μmol/L、(18.0±0.9)μmol/L、(19.5±1.0)μmol (n=2);可见Ⅰa与Ⅰb、Ⅱa与Ⅱb之间的K_d无显著差异(P>0.05),而Ⅱa较Ⅰa、Ⅱb较Ⅰb的K_d低(P<0.05)。结论 α,β-不饱和酮结构是苯氧乙酸类化合物抑制作用的必须官能团；二价抑制剂Ⅱa、Ⅱb较单价抑制剂Ⅰa、Ⅰb对GSTM具有更高亲和力，Ⅱa的产物较Ⅰa的产物抑制作用更强。

目的 研究陈氏培元汤含药血清对卵巢颗粒细胞(ovarian granulosa cells,OGCs)自噬的影响。方法 用SD大鼠制备含药血清，分为正常组大鼠血清和陈氏培元汤组大鼠血清；分离OGCs细胞并分为正常组、模型组、陈氏培元汤组和信号通路阻滞剂组，除正常组外，其余3组通过雷公藤甲素制作免疫性卵巢早衰模型，正常组和模型组加入正常组大鼠血清，陈氏培元汤组加入陈氏培元汤含药血清，信号通路阻滞剂组加入陈氏培元汤含药血清和信号通路阻滞剂；ELISA试剂盒测各组培养液中雌二醇(E_2)和孕酮(P)的浓度，免疫荧光染色分析LC3Ⅱ、m-TOR、p62表达，透射电镜观察各组OGCs细胞自噬情况，Western blotting测定各组细胞Beclin-1、LC3Ⅱ、m-TOR、p62蛋白的相对表达。结果 与正常组相比，模型组和信号通路阻滞剂组的E_2浓度明显降低(PCR EquipmentP<0.05)；陈氏培元汤组E_2浓度比模型组和信号通路阻滞剂组高(P<0.05)；Gefitinib-based PROTAC 3使用方法与正常组相比，模型组、陈氏培元汤组和信号通路阻滞剂组P的浓度差异无统计学意义。正常组和陈氏培元汤组LC3Ⅱ免疫荧光表达较弱，m-TOR、p62荧光免疫表达增强；模型组和信号通路阻滞剂组LC3Ⅱ免疫荧光表达增强，m-TOR、p62荧光免疫表达减弱；模型组和信号通路阻滞剂组OPUN30119体内GCs细胞内可见大量的自噬小体，正常组和陈氏培元汤组OGCs细胞内偶见自噬小体。与模型组和通路阻滞剂组相比，陈氏培元汤组OGCs细胞中的LC3II和Beclin-1蛋白的相对表达水平明显降低，m-TOR和p62蛋白的相对表达水平明显升高(P<0.05)。结论 陈氏培元汤含药血清可以有效抑制OGCs细胞的过度自噬，从而发挥对卵巢的保护作用。

背景 免疫介导的坏死性肌病(immune-mediated necrotizing myopathy,IMNM)是一种新近被认识的特发性炎性selleckchem GNE-140肌病类型，对于该疾病的治疗尚无共识。目的 探讨IMNM的临床特征和不同治疗方案对预后的plasma biomarkers影响，进一步提高临床医生对该病的认识。方法 回顾性分析2012年10月-2021年SCH72796510月解放军总医院第一医学中心风湿免疫科确诊为IMNM患者23例的临床资料，分析患者的临床特点，比较不同治疗方案对肌酸激酶水平变化和预后的影响。结果 23例IMNM患者中，女性21例，男性2例，平均年龄(48.48±12.94)岁，最常见临床表现为肌无力(95.65%,22/23)和肌酸激酶升高(100%,23/23)，其次为心脏受累(82.61%,19/23)、肌痛(56.52%,13/23)、吞咽困难(43.48%,10/23)、合并间质性肺病(43.48%,10/23)。糖皮质激素冲击治疗组(n=11)与非冲击治疗组(n=12)治疗后肌酸激酶水平均能够逐渐下降，每组治疗前、治疗1个月、治疗3个月时肌酸激酶水平进行两两比较，差异均有统计学意义(P<0.001)，但两组间比较肌酸激酶下降差异无统计学意义(P=0.245)。患者1年总缓解率为65.22%(15/23)，两组差异无统计学意义(63.64%vs 66.67%,P=0.611)。结论 无论冲击还是非冲击剂量的糖皮质激素治疗都能有效降低患者的肌酸激酶；IMNM患者心脏受累比例较高，当前的治疗方案对IMNM患者总体有效。

孢壁作为微孢子虫最外层的结构，是连接微孢子虫与外界环境的桥梁。因此，研究孢壁蛋白对阐明宿主-微孢子虫相互作用的机制具有重要意义。本研究以虾肝肠胞虫(Enterocytozoon heimmune-epithelial interactionspatopenaei,EHP)孢壁蛋白7(spore wall protein 7, SWP7)为研究对象，首先通过生物信息学分析其序列基本特征，然后合成该基因序列、构建原核表达载体、诱导蛋白表达并纯化，最后制备多克隆抗体。通过Western blotting验证该抗体的特异性后，利用间接免疫荧光技术观察和分析该蛋白在成熟孢子上的定位情况。结果表明，SWP7的N末端存在信号肽序列，且无跨膜域和GPI锚定位点，可能作为分泌蛋白发挥功能。同时，预测到SWP7有多个磷酸化修饰位点，可能参与肝肠胞虫信号转Transmembrane Transporters抑制剂导、免疫应答、受体激活等功能。间接免疫荧光结果显示SWP7均匀地表达于成熟EHP孢BYL719采购壁上，且可能参与到萌发过程中。研究结果可为明确SWP7在肝肠胞虫入侵宿主中的功能及其机制提供理论基础。[中国渔业质量与标准，2022,12(6):01-08]

研究背景冠状动脉粥样硬化性心脏病是指冠状动脉发生粥样硬化引起管壁狭窄或闭塞,导致心肌缺氧或坏死而引起的心脏病,简称冠心病(coronaty heart disease,CHD)。动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是CHD的病理基础。AS是一种与脂质代谢障碍有关的全身性疾病,其病变特点是血液中的脂质进入到动脉壁并沉积于内膜形成粥样斑块,进而引起动脉狭窄性疾病。AS的发病机制主要包括内皮细胞损伤-应答机制、脂质沉积、免疫细胞参与的炎症反应机制和血管平滑肌增殖和迁移机制。其中,内皮细胞损伤和/或死亡不仅在AS的早期阶段起着关键作用,而且与斑块进展和AS并发症的发生有关。AS的主要致病因素Blebbistatin抑制剂包括:高血脂、高血压、高血糖和吸烟等。据报道,高血脂、高血压、高血糖和尼古丁等刺激因素是引起内皮细胞损伤和/或死亡常见的诱因。值得注意的是,一系列研究中不难发现内皮细胞长期暴露于高血脂、高血压、高血糖和尼古丁等刺激因素下,内皮细胞中活性氧(Reactive oxygen species,ROS)过度蓄积引起氧化应激损伤,甚至发生内皮细胞死亡,如细胞凋亡、细胞焦亡、PARP-1依赖的细胞死亡等。因此,ROS是高血脂、高血压、高血糖和尼古丁等刺激因素引起内皮细胞损伤和/或死亡的常见机制之一。近年来大量研究表明,细胞焦亡与AS的发生与发展密切相关。例如,在AS早期,内皮细胞焦亡,引起炎症因子释放、血管通透性增高以及单核细胞募集。在AS的进展期,细胞焦亡参与泡沫细胞的形成、巨噬细胞和和血管平滑肌细胞的迁移,进而加剧斑块内炎症反应以及坏死核的形成。细胞焦亡是一种由各种刺激引起的程序性炎症坏死,其特征在于炎症小体的组装与激活、膜孔的形成和促炎性细胞因子的成熟与释放。其中,NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡机制研究的最为广泛、最为透彻,并且NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡与ROS密切相关。在内皮细胞中,ROS被认为是高血脂、高血糖、尼古丁、高血压等刺激因素激活NLRP3炎症小体的桥梁。NLRP3炎性小体由胞内识别受体含有一个吡啶结构域3的NOD-样受体(NOD-like receptor containing a pyrin domain 3,NLRP3)、接头蛋白包含一个CARD的凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)和一个效应蛋白半胱天冬酶-1(caspase-1)构成。NLRP3炎症小体的激活本质上是caspase-1自身激活。活化的caspase-1能够介导IL-1β和IL-18的成熟。此外,活化的caspase-1能够促使膜孔蛋白Gasdermin D(GSDMD)的成熟,导致膜孔的形成。一方面,膜孔的形成不仅能够引起细胞膨胀甚至破裂,引起内皮细胞死亡。另一方面,膜孔的形成能够促进白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-18(interluekin-18,IL-18)释放,维持和放大炎症反应。此外,NLRP3炎症小体激活破坏了内皮间紧密连接屏障,导致血液中的有形成分外渗,如脂质的沉积促进AS斑块的形成。NLRP3炎症小体活化后能够上调ICAM-1的表达,介导白细胞与内皮细胞黏附,引起白细胞外渗,进而参与AS斑块内的炎症反应。因此,ROS触发NLRP3炎症小体介导内皮细胞焦亡机制与AS的发生与发展密切相关。内皮细胞长期暴露于高血糖、高血脂、尼古丁、高血压等刺激因素下,ROS主要来源于线粒体,NADPH氧化酶和e NOS“解耦联”。过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)是主要的ROS种类之一。H_2O_2在热力学上不稳定,很容易分解形成水和氧气。叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,t-BHP)是一种广泛应用于各种氧化过程的有机过氧化物,在氧化应激研究中被广泛用作H_2O_2更好的替代品。据报道,t-BHP能够引起内皮细胞发生氧化应激,并且不同浓度的t-BHP能够引起内皮细胞不同死亡方式。低浓度t-BHP(50μM)能够触发内皮细胞发生细胞凋亡,而高浓度t-BHP(500μM)能够引起内皮细胞发生坏死性凋亡。然而,在内皮细胞中t-BHP是否能够触发NLRP3介导的细胞焦亡尚未清楚。近期,本研究首次探讨了t-BHP触发人脐静脉内皮(human umbilical vein endothelium,HUVEC)氧化应激损伤及其NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡的机制,为CHD的研究提供新的思路。微小RNA(micro RNA,miRNA)是一种长度约为19～22nt进化上高度保守的非编码RNA,能够在转录后调节基因表达。miRNA通过结合m RNA的3’-非翻译区(3’-untranslated region,3’-UTR)在RNA诱导的沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC)中降解m RNA或抑制其翻译。越来越多的证据表明miRNAs在心血管疾病发展中起着关键作用,这表明miRNAs可以被认为是治疗心血管疾病的潜在的小分子药物。据报道,氧化应激会刺激几种miRNA的产生,这些miRNA被定义为氧化应激反应性miRNA。miR-144就是一种经典的氧化应激反应性miRNA。值得注意的是,一些研究表明miR-144在内皮细胞损伤中起到重要作用。例如,据报道,胆固醇能够引起内皮细胞中miR-144表达升高,导致减弱NO生物利用度下降,从而引起内皮功能障碍。有研究发现,沉默miR-144能够缓解雄性小鼠的AS。本研究进一步探讨在t-BHP诱导HUVECs氧化应激损伤模型中,NF-κB1/miR-144-3p/FOXP1轴对细胞焦亡的调控作用,为CHD的研究和治疗提供新的治疗靶点。研究目的本研究应用t-BHP诱导HUVEC氧化应激损伤模型,探讨t-BHP触发细胞焦亡机制。此外,本研究在t-BHP构建HUVECs氧化应激模型中,深入探讨了NF-κB1/miR-144-3p/FOXP1轴对细胞焦亡的调控机制。研究方法1.分别用0,25μM,50μM,100μM t-BHP作用于HUVECs 1h。通过CCK-8法评估内皮细胞生存率,检测细胞上清中LDH的活性来判断细胞损伤情况。同时使用Western bolt技术检测细胞中细胞焦亡标志性蛋白NLRP3,Pro-caspase1,ASC,C-caspase-1,Pro-IL-1β,C-IL-1β以及N-GSDMD的表达水平。应用蛋白质免疫共沉淀技术明确最适浓度下,NLRP3炎症小体组装情况。2.以50μM t-BHP分别作用于HUVECs 0,0.5h,1h和1.5h。通过CCK-8法评估内皮细胞生存率,通过检测细胞上清中LDH的活性来判断细胞损伤情况。同时使用Western bolt技术检测细胞中细胞焦亡标志性蛋白NLRP3,Pro-caspase1,ASC,C-caspase-1,Pro-IL-1β,C-IL-1β以及N-GSDMD的表达水平。3.探讨敲低NLRP3是否能缓解t-BHP诱导HUVECs氧化应激损伤及细胞焦亡。应用RT-q PCR和Western blot技术检测si-NLRP3转染效率。通过CCK-8法评估内皮细胞生存率。通过检测细胞上清中LDH的活性来判断细胞损伤情况。同时使用Western blot技术检测细胞中细胞焦亡标志性蛋白C-caspase-1,C-IL-1β以及N-GSDMD的表达水平。4.明确敲低ASC是否能缓解t-BHP诱导HUVECs氧化应激损伤模型。应用RT-q PCR和Western blot技术检测si-ASC转染效率。通过CCK-8法评估内皮细胞生存率。通过检测细胞上清中LDH的活性来判断细胞损伤情况。同时使用Western blot技术检测细胞中细胞焦亡标志性蛋白C-caspase-1,C-IL-1β以及N-GSDMD的表达水平。5.研究caspase-1抑制剂VX-765是否能够缓解t-BHP诱导HUVECs氧化应激损伤模型。通过CCK-8法评估内皮细胞生存率。通过检测细胞上清中LDH的活性来判断细胞损伤情况。同时使用Western blot技术检测细胞中细胞焦亡标志性蛋白C-caspase-1,C-IL-1β以及N-GSDMD的表达水平。6.应用不同浓度的t-BHP作用于HUVECs,构建HUVECs氧化应激损伤模型,应用RT-q PCR检测pri-miR-144和miR-144-3p的变化趋势。此外,以50μM t-BHP不同的时间点作用于HUVECs,构建HUVECs氧化应激损伤模型,应用RT-q PCR检测pri-miR-144和miR-144-3p的变化趋势。7.研究NF-κB1对MIR-144转录起始调控机制。应用t-BHP构建HUVECs氧化应激损伤模型,同时敲低NF-κB1的表达,通过RT-q PCR检测pri-miR-144-3p和miR-144-3p表达情况。应用染色质免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)证明NF-κB1是否能够与MIR-144转录起始区域结合。利用双荧光素酶报告基因实验检测NF-κB1是否能够激活MIR-144转录。8.应用miR-144-3p mimics对HUVECs进行转染,明确过表达miR-144-3p是否能够引起细胞损伤及NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡。通过CCK-8法评估内皮细胞生存率。通过检测细胞上清中LDH的活性来判断细胞损伤情况。同时使用Western blot技术检测细胞中细胞焦亡标志性蛋白NLRP3,Pro-caspase1,ASC,C-caspase-1,Pro-IL-1β,C-IL-1β以及N-GSDMD的表达水平。9.应用miR-144-3p inhibitor对HUVECs进行转染,明确敲低miR-144-3p表达是否能够缓解t-BHP诱导HUVECs氧化应激损伤及NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡。应用RT-q PCR检测转染效率。通过CCK-8法评估内皮细胞生存率。通过检测细胞上清中LDH的活性来判断细胞损伤情况。同时使用Western blot技术检测细胞中细胞焦亡标志性蛋白NLRP3,Pro-caspase1,ASC,C-caspase-1,Pro-IL-1β,C-IL-1β以及N-GSDMD的表达水平。10.明确miR-144-3p是否靶向调控Foxp1。在HUVECs中过表达miR-144-3p后,应用RT-q PCR和Western Blot检测Foxp1的表达情况。在HUVEC氧化应激损伤模型中敲低miR-144-3p后,应用RT-q PCR和Western blot检测Foxp1的表达情况。此外,应用双荧光素酶报告基因实验明确miR-144-3p与Foxp1 m RNA3’-UTR结合。11.在HUVECs氧化应激模型中同时转染miR-144-3p inhibitor和si-Foxp1,探讨miR-144-3p是否通过Foxp1介导HUVECs氧化应激损伤及细胞焦亡。通过CCK-8法评估内皮细胞生存率。通过检测细胞上清中LDH的活性来判断细胞损伤情况。同时使用Western blot技术检测细胞中细胞焦亡标志性蛋白NLRP3,Pro-caspase1,C-caspase-1,Pro-IL-1β,C-IL-1β以及N-GSDMD的表达水平。12.在HUVECs氧化应激模型中过表达Foxp1,明确Foxp1是否能够缓解t-BHP诱导HUVECs氧化应激损伤及NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡。通过CCK-8法评估内皮细胞生存率。通过检测细胞上清中LDH的活性来判断细胞损伤情况。同时使用Western blot技术检测细胞中细胞焦亡标志性蛋白NLRP3,Pro-caspase1,C-caspase-1,Pro-I寻找更多L-1β,C-IL-1β以及N-GSDMD的表达水平。研究结果1.随着t-BHP浓度升高,HUVECs生存率逐渐降低,细胞上清中LDH活性逐渐升高。通过Western blot检测发现,随着t-BHP浓度升高,细胞焦亡相关蛋白的表达水平表达水平逐渐增加。t-BHP浓度在50μM时,细胞焦亡相关蛋白表达最高。同时,通过CO-IP检测发现,t-BHP浓度在50μM时,NLRP3炎症小体显著形成。2.以50μM t-BHP不同的时间点作用于HUVECs,随着t-BHP诱导时间增加,HUVECs生存率逐渐降低,细胞上清中LDH活性逐渐升高。Western blot检测发现,随着t-BHP诱导时间增加,细胞焦亡相关蛋白的表达水平逐渐增加。3.在t-BHP诱导HUVECs氧化应激损伤模型中敲低NLRP3的表达,HUVECs生存率升高,细胞上清中LDH活性降低,细胞焦亡相关蛋白的表达水平降低。4.在HUVECs氧化应激损伤模型中敲低ASC的表达,HUVECs细胞生存率升高,细胞上清中LDH活性降低。Western blot结果表明,细胞焦亡相关蛋白的表达水平降低。5.在HUVEC氧化应激损伤模型中加入caspase-1抑制剂VX-765,HUVECs细胞生存率升高,细胞上清中LDH活性降低。Western blot结果表明,细胞焦亡相关蛋白的表达水平降低。adult medicine6.在t-BHP构建HUVECs氧化应激模型中,pri-miR-144和miR-144-3p表达升高,并且呈剂量依赖性和时间依赖性。7.在t-BHP构建HUVECs氧化应激模型中,敲低NF-κB1的表达,pri-miR-144和miR-144-3p表达显著下降。Ch IP实验结果表明,在t-BHP构建HUVECs氧化应激模型中,NF-κB1能够与MIR-144启动子区结合。双荧光素酶报告基因实验表明,NF-κB1能够激活MIR-144的转录。8.在HUVECs中过表达miR-144-3p,HUVECs细胞生存率降低,LDH活性升高。Western blot检测发现,细胞焦亡相关蛋白的表达水平增加。9.在t-BHP构建HUVEC氧化应激损伤模型中,敲低miR-144-3p的表达,HUVECs细胞生存率升高,LDH活性降低。Western blot检测发现,细胞焦亡相关蛋白的表达水平降低。10.在HUVECs中过表达miR-144-3p,Foxp1 m RNA和蛋白水平表达下降。在t-BHP构建HUVECs氧化应激模损伤模型中,敲低miR-144-3p的表达,Foxp1m RNA和蛋白水平表达升高。双荧光素酶报告基因实验检测发现,miR-144-3p能够与Foxp1 m RNA 3’-UTR结合。11.在t-BHP构建HUVECs氧化应激损伤模型中,同时敲低miR-144-3p和Foxp1的表达后,HUVECs细胞生存率下降,LDH活性升高。Western blot检测发现,细胞焦亡相关蛋白的表达水平升高。12.在t-BHP构建HUVECs氧化应激模型中,过表达Foxp1后,HUVECs细胞生存率升高,LDH活性降低。Western blot结果表明,细胞焦亡相关蛋白的表达水平降低。结论1.在t-BHP构建HUVECs氧化应激模型中,t-BHP引起HUVECs细胞损伤及NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡呈浓度和时间依赖性。2.敲低NLRP3的表达能够缓解t-BHP诱导HUVECs细胞损伤及NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡。3.敲低ASC的表达能够缓解t-BHP诱导HUVECs细胞损伤及NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡。4.抑制caspase-1的活性能够缓解t-BHP诱导HUVECs细胞损伤及NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡。5.在t-BHP构建HUVECs氧化应激模型中,pri-miR-144和miR-144-3p表达升高。在HUVEC中过表达miR-144-3p引起HUVECs细胞损伤,促进NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡。在t-BHP构建HUVECs氧化应激模型中,敲低miR-144-3p的表达能够缓解HUVECs细胞损伤及NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡。6.在t-BHP构建HUVECs氧化应激损伤模型中,NF-κB1是MIR-144的转录激活因子,促进MIR-144的转录。7.miR-144-3p通过靶向结合Foxp1 m RNA 3’-UTR,下调Foxp1的表达。8.在t-BHP构建HUVECs氧化应激模型中,miR-144-3p通过Foxp1介导HUVECs细胞损伤,促进NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡。9.在t-BHP构建HUVECs氧化应激模型中,过表达Foxp1能够缓解HUVEC细胞损伤及NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡。创新点及研究意义本研究应用t-BHP诱导HUVECs氧化应激损伤模型,在该模型中首次探讨t-BHP触发NLRP3炎症小体介导氧化应激损伤及细胞焦亡机制。此外,本研究在t-BHP构建HUVECs氧化应激模型中,深入揭示了NF-κB1/miR-144-3p/FOXP1轴对氧化应激损伤及细胞焦亡的调控机制,为冠状动脉粥样硬化性心脏病的研究和治疗提供新的方向。

目的:了解2012年至2020年重庆地区居民肝癌死亡率及疾病负担变化趋势。方法:肝癌死亡个案病例资料(ICD-10:C22)来源于重庆市全人群死因监测报告数据库。采用SPSS 26.0统计分析死亡率、标化死亡率、早死所致的寿命损失年(years of life lost, YLL)和平均减寿年数(average years of life lost, AYLL)等指标，不同性别与地区间死亡率比较用χ~2检验，趋势分析采用年度变化百分比(annual percentage change, APC)表示。结果:2012年重庆市肝癌死亡率与标化死亡率分别为29.87/10万与20.27/10万，2020年重庆市肝癌死亡率与标化死亡率分别为31.21/10万与18.16/10万，死亡率与标化死亡率APC分别为0.39%与-0.83%,变化趋势均无统计学差异(P>0.05)。2012年至2020年男性历年肝癌死亡率均高于女性，差异均有统计学意义(P<0.01)。2012年至2020年农村地区历年肝癌死亡率均高于城市，差异均有统计学意义(P<0.01)。2012年重庆市肝癌导致的YLL率为8.72‰,2020年YLL率为8.02‰,APC为-1.28%,变化趋势无统计学差异(P>0.05),AYLL以年均1.66%的Ipatasertib生产商速度下降(P<0.05)。男性AYLL高于女性，分别以年均1.55%(P<0.05)和1.96%(P<0.05)的速度下降，Blebbistatin配制城市AYLL低于农村AYLL,城市和农村AYLL总体上分别以年均1.59%(P<0.05)和1.72%(oncology medicinesP<0.05)的速度下降。结论:重庆市肝癌死亡率较高，早死导致的疾病负担重，男性与农村地区居民是肝癌发生的重点人群。

目的：Ⅳ型胶原蛋白α1(COL4A1)已被报道可促进不同癌型进展，本研究探讨其在胃腺癌（STAD）中的表达、生物学作用及预后意义。方法：运用生物信息学方法，使用GEPIA、The HumanProtein Atlas、TCGA、LinkedOmics等数据库预测COL4A1在STAD中的表达、生物学作用及预后意义。基于TCGA数据库构建预测STAD患者预后的Nomogram模型。RSL3采购通过体外实验研究CSCH727965半抑制浓度OL4A1对AGS增殖、迁移及对PI3K-AKT信号通路的影响。结果：(1)COL4A1在STAD组织中高表达；在结直肠癌、淋巴瘤、头颈部癌、胃癌、肝癌等组织中显著上调。COL4A1高表达患者的预后低于低表达患者（P<0.05）；(2)COL4A表达水平Precision medicine与B细胞水平呈负相关（P<0.05）；与CD4 T细胞、CD8 T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞及树突状细胞水平呈正相关（P<0.05）。COL4A1表达水平与较多药物敏感相关，如生物靶向治疗肿瘤药物（乐伐替尼、埃罗替尼、依鲁替尼）或治疗STAD患者常见化疗药物紫杉醇及奥沙利铂；(3)多因素Cox风险比例回归模型分析结果显示，COL4A1、年龄、TNM分期（Ⅲ期及Ⅳ期）、放射治疗（否）是STAD患者病死的危险因素（P<0.05）。内部数据集验证结果显示C-index为0.727(95%CI:0.651～1.000)。一年、三年及五年决策曲线分析结果显示，该Nomogram模型的临床净收益明显高于单个指标；(4)在AGS细胞中抑制COL4A1可抑制细胞活力、集落形成能力及迁移和侵袭能力。蛋白质印迹分析显示，抑制COL4A1可显著降低p-AKT和p-PI3K表达水平（P<0.05），但不影响AKT和PI3K的总表达水平（P>0.05）。结论：COL4A1表达水平是STAD患者预后不良的独立预测因素，可作为评估预后的肿瘤标志物，而靶向COL4A1的药物开发可能为STAD的治疗开辟新的治疗策略。