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【目的】基于王三虎教授的”燥湿相混致癌说”探讨半边莲治疗癌症的作用及物质基础,分析中药半边莲提取物的化学成分,为进一步研究其抗癌的活性成分提供依据。【方法】运用硅胶柱层析、硅胶薄层层析、反相RP-C18柱层析、MCI柱层析sandwich type immunosensor、高效液相等多种色谱手段对半边莲展开系统的化学成分研究,并通过各种波谱、光谱手段鉴定各化合物的结构RP56976化学结构。对分离所得的化合物,采用人乳腺癌细胞MCF-7和人胃癌细胞MGC-803模型进行抗癌活性评价。【结果】从半边莲中分离鉴定得到6个化合物,分别为:matairesino(1)、(8S,9S,8’S)-4,4’-Dihydroxy-3,3’,9-trimetoxy-9,9’-epoLorlatinib IC50xylignan(2)、3β-hydroxyhop-22(29)-ene(3)、parietin(4)、chrysophanol(5)、gaultheriadiolide(6)。木脂素类化合物1、2在20μmol/L时,细胞抑制率大于50%。【结论】木脂素类化合物1、2具有潜在的抗胃癌和乳腺癌活性,其中化合物2活性最好,对MGC-803细胞增殖活性的半数抑制浓度(IC50)为9.2μmol/L。

目的 探讨胎儿完全性房室传oral oncolytic导阻滞（complete atrioventricular conduction block,CAVB）的临床特点及预后。方法 选择2012年1月至2022年8月，联勤保障部队第九〇〇医院诊断的13例胎儿CAVB进行回顾性分析，对其临床特点、治疗及转归情况进行分析。结果 共纳入13MCC950生产商例CAVB胎儿，7例终止妊娠，6例存活。7例终止妊娠胎儿中6例合并心功能降低，5例存在心脏结构异常，4例患儿母亲抗核抗体（ANA)、干燥综合征抗原A(SSA)抗体阳性。6例存活胎儿中1例合并心功能降低，2例存在心脏结构异常，5例患儿母亲ANA、SSA抗体阳性。1例患儿出生后静息心室率42～45次/min,5岁时突发晕厥后植入永久性起搏器。1例患儿房间隔缺损、心室率<70次/min,2岁时接受房间隔缺损修补术，未植入起搏LY-188011生产商器。其余4例患儿心室率>52次/min，未植入起搏器。结论 心功能正常，且心脏结构正常的CAVB胎儿，若出生后无明显症状，多数预后较好，可暂不植入永久性起搏器。

氨肽酶(Aminopeptidase,AP,EC 3.4.11)In Vivo Testing Services是一类外切蛋白酶,能够特异性降解多肽链和蛋白质N末端疏水性氨基酸残基,释放出游离氨基酸。氨肽酶能够有效降低蛋白水解液的苦味,改善食品风味,提高营养价值。它与碱性蛋白酶等内切酶协同作用,可以促进蛋白质的深度水解,应用于多种活性肽的制备。本研究筛选到selleck AG-221了一株产氨肽酶地衣芽孢杆菌,并克隆其编码基因,在Escherichia coli BL21和Bacillus subtilis 168中高效表达,研究了重组酶的酶学性质,及其与碱性蛋白酶协同作用高效水解大豆分离蛋白和酪蛋白,产生小分子活性肽和游离氨基酸。具体研究内容包括:(1)产氨肽酶菌株的筛选鉴定及基因克隆。利用酪蛋白平板水解透明圈法和酶活测定方法相结合,从土壤中筛选到一株产氨肽酶菌株。通过对菌株的形态和生理生化特性进行分析,以及16S r DNA测序结果比对,鉴定该产氨肽酶菌株为地衣芽孢杆菌,命名为Bacillus licheniformis E7。利用染色体步移技术从B.licheniformis E7基因组DNA中克隆出完整的氨肽酶基因pep N,全长为1,4EGFR抑制剂46 bp,编码481个氨基酸。(2)重组菌E.coli BL21/p ET28-pep N和B.subtilis 168/p MA0911-pep N构建与重组蛋白的表达。以p ET-28a(+)和p MA0911为表达载体,以E.coli BL21(DE3)和B.subtilis 168为表达宿主,构建重组氨肽酶表达菌株E.coli BL21/p ET28-pep N和B.subtilis 168/p MA0911-pep N。SDS-PAGE结果表明重组氨肽酶在E.coli BL21胞内表达(命名为Ec Pep N),在B.subtilis 168胞外和胞内表达(命名为Bs Pep N~(ex)和Bs Pep N~(in)),分子量约52 k Da,与理论值相符。Ec Pep N在0.1 m M IPTG和20℃诱导条件下表达最好,Bs Pep N~(ex)和Bs Pep N~(in)在30℃诱导条件下表达最佳。(3)重组氨肽酶的纯化及酶学性质分析。利用镍离子亲和层析法纯化重组酶,经100 m M咪唑洗脱获得目的蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化的重组酶在52 k Da左右显示为单一条带。酶学性质研究结果显示,三种酶的最适反应条件分别为:Ec Pep N为p H 9.0、50℃,Bs Pep N~(ex)为p H 9.0、45℃,Bs Pep N~(in)为p H 7.0、45℃,Ec Pep N、Bs Pep N~(ex)和Bs Pep N~(in)最高比酶活分别为365.04、401.33和113.77 U·mg~(-1)。它们在p H 6.0-9.0范围内较稳定,在45℃条件下的半衰期分别为36 h、6 h和12 h。Ec Pep N表现出最佳的耐盐性,在3 M Na Cl溶液中孵育22天后,酶活力高于55%。以7种底物进行酶活测试,Ec Pep N、Bs Pep N~(ex)和Bs Pep N~(in)对底物Ala-p NA比酶活最高,是一种丙氨酸氨肽酶,它们对底物Ala-p NA的K_m值分别为1.20、1.01和1.09 m M,Ec Pep N和Bs Pep N~(ex)的k_(cat)/K_m值大约是Bs Pep N~(in)的4倍。(4)重组氨肽酶与碱性蛋白酶协同水解大豆分离蛋白和酪蛋白的产物谱分析。以商品化氨肽酶为对照,重组氨肽酶与商品化碱性蛋白酶协同催化大豆分离蛋白的水解液中,75%以上为分子量小于500 Da的多肽,2,000 mg·L~(-1)以上的多种游离氨基酸,其总量是碱性蛋白酶单独催化的50倍以上。双酶协同水解酪蛋白的水解液中,小于500 Da的多肽占78%左右,其中小于150 Da的小肽含量是碱性蛋白酶单酶水解时的6倍。不同表达形式的重组氨肽酶Pep N的蛋白水解效果差别不大,且与商品化亮氨酸氨肽酶的蛋白水解效率相当。该研究为提高富含蛋白质生物资源的增值和蛋白质的深度水解提供了重要研究途径。

目的 探讨评估冠心病患者经皮冠状动脉介入疗法（PCI）治immunogenomic landscape疗期间应用信息-动机-行为技巧护理（IMB）的临床价值，探究对心血管不良事件以及西雅图心绞痛调查量表（SAQ评分）所产生的影响。方法 本次研究入组患者均确诊为冠心病，择期行PCI治疗，入组患者共计60例，病例资料收集时间为2021年3月至2022年3月，选用随机数字表法将其CP-690550化学结构分为对照组和观察组，各30例，前者经常规护理干预，后者以常规护理为基础应用IMB护理干预，对比两组心血管不良事件发生率、SAQ评分以及自我护理能力。结果 相较于对照组，观察组心血管不良事件发生率较低（P<0.05）；采取护理措施后，观察组SAQ评分远高于对照组（P<0.05）；且观察组自我护Trichostatin A半抑制浓度理能力评分均高于对照组（P<0.05）。结论 冠心病患者在采取PCI手术治疗的同时应用IMB护理干预对提高患者生活质量、自我护理能力具有积极意义，可预防心血管不良事件，值得借鉴推广。

目的 探究神经生长因子(NGF)中和抗体、γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S-苯基甘氨酸-t-丁酯(DAPT)对食管癌Eca109细胞p75神经营养因子受体(p75~(NTR))核表达及细胞增殖、侵袭能力的影响。方法 采用免疫荧光细胞化学技术，检测NGF中和抗体点击此处、DAPT处理Eca109细胞前后p75~(NTR)、Ki67的表达变化；分别采用CCK-8法和Transwell细胞侵袭实验，检测NGF中和抗体、DAPT单独或联合处理Eca109细胞前后其增殖能力及侵袭能力的变化。结果 免疫荧光细胞化学NN2211纯度技术检测结果显示NGF中和抗体、DAPT处理细胞后，p75~(NTR)核表达的细胞数量均减少，且NGF中和抗体和DAPT联合处理细胞后，p75~(NTR)核表达的细胞数量最少，差异有统计学意义(P<0.05);CCK-8法及Transwell细胞侵袭实验结果显示NGF中和抗体、DAPT处理细胞后，细胞增殖、侵袭能力较处理前均相应减弱，差异有统计学意义(P<0Breast surgical oncology.05)。结论 NGF中和抗体、DAPT抑制p75~(NTR)的核转移，降低p75~(NTR)的核表达率，减弱细胞增殖、侵袭能力。

目的 观察红茂草胶囊对早中期肝癌的抑瘤效果和临床疗效。方法 将符合条件的50例患者随机分为对照组和治疗组，每组各25例。对照组采用常规西医治疗。治疗组采用常规西医治疗联合口服红茂草胶囊，每次4粒，每日3次。每组以8周为1疗程，治疗8周后进行甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原19-9(CA19-9)Custom Antibody Services、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）的复查，评FUT-175使用方法定治疗前后疗效及不良反应。结果 与对照组相比较，治疗组AFP、Talazoparib使用方法CEA、CA19-9、ALT、AST含量明显降低，差异有统计学意义（P <0.05）。与对照组相比较，治疗组BUN、Cr较治疗前降低，差异有统计学意义（P <0.05）。不良反应发生率两组比较差异无统计学意义。结论 红茂草胶囊联合西医治疗可抑制肿瘤效应，降低肿瘤标志物含量，改善肝功能，疗效显著，安全性高。

目的：评价冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗后采用高强度间歇抗阻训练的效果。方法：选取2020年3月-2021年6月厦门大学附属心血管病医院收治的120例经皮冠状动脉介入治疗的冠心病患者。随机将其分为观察组（n=60）和对照组（n=60）。观察组给予高强度间歇抗阻训练，对照组给予常规功能锻炼。比较两组训练前后ABT-263细胞培养心功能指标、血清学指标、生活质量。结果：训练后，观察组左心室射血分数（left ventricular ejection fraction,LVEF）显著高于对照组，而左室收缩末期内径（left ventricular end-systolic dimension,LVESD）和左室舒张末期内径（left ventricular end-diastolic dimension,LVEDD）均显著低于对Enasidenib IC50照组（P<0.05high-dimensional mediation）。训练后，观察组C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、氨基末端脑钠肽原（NTproBNP）、白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)水平均显著低于对照组（P<0.05）。训练后，观察组体力、工作状况、一般生活功能和社会心理状况评分均显著高于对照组（P<0.05）。结论：冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗后开展高强度间歇抗阻训练能有效提升心功能和生活质量，改善血清指标水平，值得临床推广使用。

目的 分析麝香保心丸治疗稳定型心绞痛的疗效及对疾病相关因子表达的影响。方法 选择稳定型心绞痛患者70例，按随机数表法分为观察组与对照组，各35例。对照组予美托洛尔、曲美他嗪、阿司匹林、单硝酸异山梨酯、硝酸甘油治疗；观察组在对照组基础上予麝香保心丸治疗，2组均治疗3个月。比较2组治疗总有效率，治疗前后心功能、心绞痛发作情况、疾病相关因子、血脂指标变化情况。结果 观察组总有效率组（94.29%,33/35）高于对照组（74.29%,26/35）(P <0.05)。治疗后，2组射血分数（EF）、心排血量（CO）水平均较治疗前升高，且观察组高于对照组（P <0.05）。治疗后，2组心绞痛每次持续时间均较治疗前缩短，且观察组短于对照组（P确认细节 <0.05）。治疗后，2组心绞痛发作次数、血清总胆固醇（TC）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、三酰甘油Bacterial cell biology（TG）、乳酸脱氢selleckchem Nirmatrelvir酶（LDH）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、心肌肌钙蛋白（cTnI）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平均低于治疗前，且观察组低于对照组（P <0.05）。结论 麝香保心丸治疗稳定型心绞痛疗效确切，可改善患者心功能，降低心绞痛发作时间及频率，可能与其调节机体脂代谢，控制疾病相关因子水平有关。

天然产物在自然进化中形成了复杂而新颖的结构和多样的生理活性,为药物先导化合物的发现提供了丰富的来源。针对天然产物的模块化修饰,能够调节活性,提高成药性,并进一步拓展化学空间,是药物化学研究的重要课题。许多三萜类天然产物具有独特的药理活性。五环三萜类天然产物白桦脂酸是胆汁酸膜受体TGR5的天然激动剂,TGR5参与体内多种代谢过程的调控,其激动剂是治疗二型糖尿病、肥胖等代谢性疾病潜在的有效手段。本课题组在前期研究中,通过将白桦脂酸的C3位羟基翻转来模拟内源性胆汁酸结构,设计合成了一系列具有优良活性的TGR5激动剂。然而,根据文献报道,全身性激动TGR5会导致诸如胆囊充盈、胆汁淤积、瘙痒等不良反应,因此需要开发具有肠道限制性的TGR5激动剂。本论文的第一部分工作是通过引入药动团的策略,来改善该类白桦脂酸母核的TGR5激动剂的理化性质,降低渗透性从而实现肠道靶向。根据课题组前期工作基础,我们总结了该类TGR5激动剂的构效关系,通过在其活性不敏感位点引入不同类型的大极性药动团,考察药动团对激动活性、理化性质的影响,最终得到了低渗透性、高外排率的化合物T8和T25Na。对T8和T25Na的代谢性质以及组织分布考察发现,化合物的血浆暴露量极低,肠道分布量高,其中化合物T25Na同时还具有极低的胆囊暴露量,成功实现了肠道靶向。由于T8和T25Na渗透性降低,口服后起效时间延长。通过调整给药时间,T8和T25Na均在TGR5~(H88Y)突变鼠的口服糖耐量试验中表现出了降糖活性。在七天的长期给药试验中,T8和T25Na给药组小鼠的胆囊形态、大小正常,均没有引起胆囊充盈现象,安全性大幅提高。然而T8和T25Na的激动活性较弱,导致其降糖活性不佳,为了进一步提高化合物的体内降糖活性,在化合物T8和T25Na的基础上,对药动团所在的侧链进行了系统的构效关系研究,得到了TGR5激动活性显著提升的化合物T33、T39、T43,后续将进一步考察化合物的理化和代谢性质,并评价化合物的体内降糖活性和胆囊毒性。葫芦素是一类具有抗肿瘤、抗炎等多种生理活性的四环三萜类天然产物,其中葫芦素B来源丰富,受到了广泛的关注。构效关系研究表明,葫芦素B侧链中的α,β-不饱和酮是活性必需结构,而C2和C16位羟基对活性的保持同样重要,然而关于葫芦素B的结构修饰,大多数的报道都集中在对这些活性位点的改造,而对代谢不稳定的C25位乙酰氧基鲜有研究。通过分析葫芦素B的分子结构,我们开Biosynthesized cellulose发了适用于葫芦素B的钯催化偶联反应。该反应条件温和,无需引入保护基,可以通过一步反应,在侧链的烯丙基乙酸酯结构中,引入多种取代芳基和烯基官能团,拓展了C25位的化学多样性。通过该反应和后续衍生化,我们合成了一个小型葫芦素B衍生物库。其中大部分化合物表现出了对人非小细胞肺癌A549和人肝癌PLC/PRF/5细胞的抗增殖Y-27632说明书活性,多数化合物的细胞毒性与葫芦素B相当,化合物C18、C22、C32表现出了优于葫芦素B的抗增殖活性。葫芦素B通过抑制NF-κB信号通路来产生抗炎活性,因此考察了化合物对NF-κB信号通路的抑制能力,以此来评价体外抗炎活性。所有测试化合物在20μM的浓度下均表现出了Dorsomorphin对NF-κB的抑制,但部分化合物表现出了对293T细胞的毒性。进一步研究表明化合物C11、C14、C21、C22对NF-κB的抑制活性强于葫芦素B,但还需考察这些化合物的细胞毒性,避免假阳性的干扰。而化合物对细胞炎症因子表达的影响有待进一步研究。研究表明,葫芦素B的抗肿瘤作用与许多信号通路和蛋白有关,但对关键作用靶点的研究还较为初步。在化合物C15、C16的基础上,通过引入对结构变动较小的脂肪族二氮丙啶基团,设计合成了抗增殖活性保持的光亲和探针P1-4。下一步还计划合成其他类型的非光亲和探针以及阴性探针,为靶点鉴定和机制研究提供有力的工具。

目的:研究miR-299-3p对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法:以乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,q RT-PCR检测乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中miR-299-3p和PAX3 m RNA的表达,Western blot检测MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中PAX3、增殖相关蛋AMG510分子量白Ki-67、PCNA以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,CCK-8法和流bio-mediated synthesis式细胞术分别测定MDA-MB-231LBH589 molecular weight和MDA-MB-468细胞增殖吸光度值和凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-299-3p和PAX3的靶向关系。结果:与乳腺上皮细胞MCF-10A相比,在乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468中miR-299-3p的含量显著减少(P<0.05),而PAX3 m RNA和蛋白表达量显著增加(P<0.05);过表达miR-299-3p可下调细胞吸光度值,提高细胞凋亡率,降低增殖凋亡相关蛋白Ki-67、PCNA和Bcl-2含量,上调Bax含量;miR-299-3p靶向负调控PAX3的表达;敲减PAX3可下调Ki-67、PCNA和Bcl-2蛋白含量,促进BAX表达,降低细胞吸光度值,提高细胞凋亡率;过表达PAX3逆转了miR-299-3p过表达对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的作用。结论:miR-299-3p通过靶向PAX3调控MDA-MB-231细胞增殖和凋亡,miR-299-3p可能是乳腺癌的潜在分子靶点。