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心脑血管病（包括冠心病、心力衰竭、脑卒中等）是临床最常见问题。血管再通术后，却仅有1/3患者病情改AZD2281善，1/3患者无效，1/3患者反而恶化、休克、甚至死亡。西医认为是由缺血再灌注损伤造成的。脑卒中溶栓、血管内治疗后血管再通率高而患food microbiology者康复比例较低。中医认为，气为血之帅，血为气之母，仅改善缺血而忽略气的不足，则难以提高临床疗效。肺主呼气，肾主纳气，气机之枢纽在于“脾主升清，胃主降浊”。肺气虚则心脉瘀滞GSKJ4溶解度，肾气虚则喘、短气，脾胃气机失调则气血生化之源枯。气虚则行血摄血不足，可导致血瘀血溢等心脑血管病的发生。透析可致患者脑出血、卒中；机械通气可引起急性肾衰；血管再通术后可加重心梗、脑梗。因此，防治心脑血管病除了改善缺血，更需纠正短气，并在日常起居、饮食药物、精神情志方面注意避免伤肾、伤肺、伤脾胃。

蓝狐作为一种重要的毛皮类经济动物,在北部地区被广泛的养殖。近年来蓝狐感染兔脑炎微孢子虫的病例,在我国几个主要养殖区均有发生。当蓝狐幼狐感染后,主要表现为生长停CL13900试剂滞、腹泻消瘦和死亡,即便未死亡,生长也会受到影响形成“僵狐”。蓝狐患病后期,以神经症状、肾脏肿大为主要病症。有些成年蓝狐感染后并不表现临床症状,但可作为传染源传播病原。蓝狐患病后不仅毛皮质量严重降低,而且隐性感染的种狐会垂直传播给下一代,从而给蓝狐养殖业带来巨大的经济损失。兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon cuniculi)是微孢子虫的一种,是细胞内寄生的单细胞真核生物,属于真菌界的一员。成熟的孢子可通过蓝狐泌尿道排出体外,从而进行传播和感染其他动物。母畜隐性感染微孢子虫时,还可通过垂直传播感染子代,造成大量种畜的淘汰。本病的隐性感染率较高,不仅能在动物之间进行广泛传播,还可引起人畜共患病。并且目前缺少有效的免疫及治疗手段,因此建立一种能够大规模检测,蓝狐是否感染兔脑炎微孢子虫的检测方法,是值得我们深入研究的。本研究通过接种犬肾(MDCK)细胞,对兔脑炎微孢子虫进行培养纯化,通过PCR和革兰氏染色进行验证。对ITS1基因序列进行分析时,发现其属于兔脑炎微孢子III型,并在革兰氏染色时发现有浓染的现象。通过制定免疫方案,制备并纯化,抗兔脑炎微孢子虫的多克隆抗体和蓝狐抗体。测定多克隆抗体效价可达:1:5.112×10~5其Ig G含量可达1.77mg/ml,阳性狐狸血清的效价可到1:64其Ig G含量在0.15 mg/ml。本研究通过对反应条件的不断优化,建立了夹心ELISA检direct to consumer genetic testing测蓝狐兔脑炎微孢子虫的方法,最终确定了最佳包被抗体浓度为5μg/ml,检测抗体最佳浓度为37.5μg/ml;确定抗原孵育2 h,检测抗体孵育1.5 h;最佳包被条件为4℃过夜;酶标二抗以1:5000的比例稀释后反应1 h;选择5%脱脂乳作为封闭液,封闭1 h。并从灵敏度、重复性、特异性和临床样品检测效果等方面对该方法进行了评价。其对纯化兔脑炎微孢子虫最低检测灵敏度为6.25×10~5 spores/ml;对人工添加的最低检测灵敏度为1.25×10~6 spores/ml;变异系数均小于10%;与无乳链球菌和绿脓杆菌均无交叉反应。在初步应用方面,与PCR检测方法的符合率为79.97%。结果表明,本试验所建立的蓝狐兔脑炎微孢子虫夹心ELISA,在检测纯化孢子和人工添加孢selleck激酶抑制剂子时均有良好的表现,且在实践中也具有一定的应用性。本试验建立的夹心ELISA检测方法,可为大规模筛检蓝狐感染兔脑炎微孢子虫时,提供一种更简单快速的检测方法,同时也为兔脑炎微孢子虫的免疫学检测方法的研究提供了理论依据。

目的：探讨清金化痰汤通过Bax、Bcl-2通路对脂多糖（LPS）及香烟烟雾(CSE)干预的大鼠原代气道上皮细胞自Cleaning symbiosis噬的影响。方法：将大鼠按照随机抽签法分为正常组、模型组、阳性组、中药组，每组10只，采用气管滴注LPS+烟熏制备AECOPD大鼠模型，并且对气道上皮细胞（正常和痰热郁肺型AECOPD大鼠）进行原代提取。制备清金化痰汤以及罗红霉素含药血清作用于上皮细胞。MTT检测清金化痰汤含药血清干预后细胞增殖率；流式细胞术检测清金化痰汤含药血清干预后细胞凋亡率；AD-mcherry-EGFP-lc3腺病毒转染检测气道上皮细胞内自噬体含量；Western Blot检测气道上皮细胞内凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达。结果：MTT结果显示：正常组与给药组跟模型组比较均具有显著性差异（P＜0. 05），流式结果显示：与正常组相比，模型组细胞活力明显降低（P＜0. 05）；与模型组比较，在使用含药血清后，细胞活力具有明显提升（P＜0. 05）；腺病毒转染显示：模型组与正常组相比大鼠气道上皮细胞自噬体数量增多（P＜0. 05）；与模型组比较，经过含药血清处理后，AECOPD大鼠的气道上皮细胞内的自噬体明显降低（P＜0. 05）；Western Blot结果显示：与正常组比较，模型组凋亡蛋白表达明显升高（P＜0. 05）；与模型组比selleck较，清金化痰汤药物干预组凋亡蛋白Bax表达下降(P＜0. 05) ; 清金化痰汤高剂量组与罗红霉素组比较无统计学意义。结论：清金化痰汤能抑制气道上皮细胞中炎症反应和凋亡Tezacaftor化学结构的机制可能与调节自噬体有关。

树突状细胞(Dendrtic cells,DCs)疫苗在临床上面临的主要问题之一是DCs成熟度不足。尽管刺激DCs激活和成熟的方法有很多,但是仍然不足以刺激DCs完全成熟,需要更有效的方法来促使DCs成熟并克服免疫抑制的微环境。肿瘤坏死因子(TNF)受体相关因子6(TRAF6)是一种E3泛素连接酶,是Toll样受体(TLR)家族的信号转导分子,TRAF6介导的信号传导已被证明对DCs的发育、稳MCC950分子式态和激活至关重要。多项研究发现TRAF6缺陷的DCs表现出明显的表面分子上调缺陷和严重的诱导Th1细胞活化的细胞因子产生缺陷。因此,本研究拟以TRAF6为切入点,进行TRAF6基因过表达以期提高DCs的成熟度,从而应用于肿瘤的治疗,提高DCs疫苗的治疗效果。对小鼠来说,最常用的获得DCs的方法是诱导骨髓细胞,获得骨髓来源的DCs(Bone Marrow-Derived Dendritic Cells,BMDCs)。为了证实TRAF6对DCs成熟及诱导T细胞免疫应答的影响,我们在体外用TLR激动剂刺激BMDCs,通过CRISPR/CAS9技术在BMDCs中敲除TRAF6,分析其成熟度的变化,结果证实了TRAF6是BMDCs成熟的关键因子。为了将TRAF6过表达的BMDCs用作DCs疫苗进行抗肿瘤治疗,我们首先构建了TRAF6过表达的BMDCs,体外研究发现,在BMDCs中过表达TRAF6能够提高BMDCs的成熟度并诱导CD4~+T细胞向Th1型细胞活化,并且过表达TRAF6可以在现有刺激BMDCs成熟方法的基础上进一步提高成熟度。在此基础上,我们进一步将负载MUC1多肽的TRAF6过表达的BMDCs作为疫苗用于B16-MUC1黑色素瘤荷瘤小鼠的体内治疗。结果发现,负载MUC1多肽的TRAF6过表达的BMDCs可显著诱导抗肿瘤的Th1应答和CTL杀伤活性,并抑制Tregs活性,从而抑制肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存期。这些结果pre-deformed material提示,过表达TRAF6的DCs应用于DCs疫苗中可以进一步提高DCs疫苗的疗效。综上所述,本研究发现过GSK2118436 IC50表达TRAF6可以在现有刺激BMDCs成熟方法的基础上进一步提高其成熟度。更重要的是,本研究首次将负载MUC1多肽的TRAF6过表达的BMDCs在小鼠中作为疫苗用于肿瘤的治疗,证明了TRAF6修饰的BMDCs作为疫苗的应用前景,为将来开发TRAF6修饰的DCs疫苗奠定理论和实验基础,为抗肿瘤DCs疫苗的开发和研制提供新的思路。

目的 探讨雷公藤甲素引起急性髓性白血病细胞凋亡的相关分子机制。方法 使用不同浓度雷公藤甲素处理HL-60,U937细胞24 h后用MTT法检测细胞存活率，流式细胞仪检测凋亡，Western blotting检测P62、LC3B、CaspasePF-07321332溶解度-3、PARP-1及细胞色素C，联用自噬抑制剂3-MA预处理U937细胞后流式细胞仪检测凋亡，自噬以及凋亡相关蛋白用蛋白印迹法检测。结果 雷公藤甲素对HL-60、U937细胞的IC50值分别为(33.86±2.84)、(36.67±3.15) nmol/BIBW2992说明书L，雷公藤甲素可明显诱导HL-60、U937细胞凋亡，差异有统计学意义(P<0.01)。雷公藤甲素可降低自噬降解底物蛋白P62表达，自噬标志蛋白LC3B-II表达上调，说明雷公藤甲素可诱导自噬。自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤预处理细胞，阻断凋亡信号通路的激活，雷公藤甲素诱导的白血病细胞凋亡明显减少。结论 雷公藤甲素可促进自噬体降解进而激活凋亡信号通路，诱导急性Cloning Services髓性白血病细胞凋亡。

目的 探讨血小板聚集率(PAG)、血小板膜糖蛋白(GP)等实验室指标预测老年经皮冠状动脉介入术(PCI)后患者主要心血管不良事件(MACE)风险的价值。方法 选取行PCI的冠心病患者108例，评估并记录患者PCI后6个月内MACE发生情况，并将患者分为MACE组(n=17)和无MACE组(n=91)。比较2组患者PAG、GPⅡb/Ⅲa纤维蛋白原受体(PAC-1)、P-选择素(CD62P)Torin 1及其他plot-level aboveground biomass相关实验室指标[血小板计数(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、凝血酶原时间(PT)、血肌酐(Scr)、总胆固醇(TC)];采用受试者工作特征(ROC)曲线分析PAG、PAC-1、CD62P、PT、Scr预测MACE的价值，采用多因素Logistic回归分析法分析MACE的危险因素。结果 MACE组年龄>70岁、病变血管≥3支患者比率高于无MACE组，PAG、PAC-获悉更多1、CD62P、Scr水平高于无MACE组，左室射血分数(EF)、PT低于无MACE组，差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示，PAG、PAC-1、CD62P、PT、Scr预测MACE的曲线下面积分别为0.895、0.894、0.806、0.937、0.672。多因素Logistic回归分析显示，年龄>70岁、病变血管≥3支、EF<53%、PAG>43.155%、PAC-1>15.560%、CD62P>15.100%、PT<14.975 s、Scr>83.810μmol/L均为MACE的危险因素(P<0.05)。结论 高水平PAG、GP、PAC-1、CD62P、Scr及低水平PT、EF均为冠心病患者PCI后MACE的危险因素。

目的 利用iTRAQ标记的蛋白组学技术探讨骨肉瘤肺转移患儿血清中蛋白的表达。方法 纳入10例骨肉瘤患儿和10例骨肉瘤肺转移患儿作为研究对象，收集piezoelectric biomaterials所有研究对象血清5 ml,采用iTRAQ标记的蛋白组学技术分析2组血清中的差异表达蛋白，并对差异表达蛋白进行GO富集分析、KEGG通路富集及蛋白-蛋白互作分析。外科手术后获取2例骨肉瘤肺转移患儿及2例骨肉瘤患儿瘤体组织，采用Western blot验证2组患儿癌组织中CDK1、hnRNP A2/B1、ITGAV和SRSF10的蛋白表达水平。结果 与骨肉瘤患儿相比，骨肉瘤肺转移患儿血清中高表达的蛋白共477种，低表达的蛋白共235种。KEGG通路富集显示，ECM及受体的相互作用、黏着力及PI3K-Akt信号通路等可能是骨肉瘤肺转移的主要发病机制。骨肉瘤肺转移患儿血清中差异蛋白前10种为CDK1、CTNNB1、ITGB1、SNRPE、SNRPG、HNRNPH1、SNRPD3、HNRNPC、ITGAV和SRSF1。与骨肉瘤患儿的癌组织相比，骨肉瘤肺转移患儿癌组织中CDK1、hnRNP A2/B1、ITGAV和SRSF10蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 与骨肉瘤患儿相比，EPZ-6438配制骨肉瘤肺转移确认细节患儿血清中存在多种差异表达蛋白，采用iTRAQ标记的蛋白组学技术能很好地筛选出差异蛋白，为骨肉瘤发生肺转移的分子机制研究提供了潜在的血清学标志物。

目的 妊娠与系统性红斑狼疮(SLE)相互影响，但初发时的妊娠状态是否会影响SLE的疾病过程尚未明确。文章旨在对比妊娠前及产后初发SLE患者临床特征及预后情况。方法 回顾性分析纳入1999年1月-2009年12月486例SLE患者临床资料，并根据初次入院时孕产史分为无妊娠史更多的妊娠前初发SLE组(n=143)及有活产史的产后初发SLE组(n=343)。对比2组患者初次入院时的症状、实验室检查、系统受累及用药情况。随访至2014年12月，对比患者5年生存率及死因。结果 妊娠前初发组初次入院时的疾病活动指数较高(P=0.041),脱发、皮肤黏膜受累、贫血、补体C4降低发生率及抗Smith(Sm)抗体阳性率更高(P<0.05)。排除年龄因素后，妊娠前初发组贫血发生率仍较高(77.8%vs 53.2%,P=0.036)。妊娠前初发SLE患者羟氯喹、硫唑嘌呤、霉酚酸酯使用率较高，而环磷酰胺使用率较低(P<0.05)。两组患者5年生存率及死因差异无统计学意义(P>0.05)。结论 妊娠前初发SLE较产后初发SLE贫血发生率更高。其疾病活动度和部分症状发生率较高则Adavosertib临床试验可能与较低的发病年龄相关。两组患者初始治疗选择存在差Medical apps异，而预后无显著差异。

目的 探讨吸入七氟醚对低浓度顺铂预处理的人神经母细胞瘤（SH-SY5Y）细胞增殖活性的影响，并讨论相关机制。方法 建mixture toxicology立低浓度顺铂预处理细胞模型，噻唑蓝比色法检测不同浓度梯度七氟醚对SH-SY5Y细胞增殖活性的影响，利用Western blotting检测CaspZ-VAD-FMK供应商ase-3和LC3Ⅱ蛋白表达，利用钙成像技术分析细胞内钙离子浓度变化。结VX-765果 低浓度顺铂预处理后，0.6%七氟醚对SH-SY5Y细胞增殖活性未产生影响，但可诱导细胞LC3-Ⅱ表达增加，而1.7%七氟醚显著抑制SH-SY5Y细胞增殖活性（P<0.01），诱导LC3-Ⅱ和Caspase-3表达增加（P<0.01），并且增加胞内钙离子浓度（P<0.01）；当部分干扰IP_3R-1表达后，1.7%七氟醚诱发的LC3-Ⅱ和Caspase-3表达减少（P <0.05）。结论 1.7%七氟醚诱导低浓度顺铂预处理SH-SY5Y增殖活性的降低，可能与IP_3R-1介导胞内钙离子浓度变化致细胞凋亡增加以及自噬水平增强有关。

为建立一种快速、准确的梅迪-维斯纳病毒（MVV）抗体检测方法，本研究利用DNAStar生物学软件对MVV衣壳蛋白（CA）和MVV跨膜蛋白（TM）的抗原表位分析，利用重叠延伸PCR(SOE PCR)获得CA-TM融合基因，构建controlled infection表达质粒p Easy-E1-CA-TM，将其转化大肠杆菌BL21后诱导蛋白表达并纯化，经SDS-PAGE检测结果显示，得到重组CA-TM蛋白（rCA-TM）,r CA-TM以包selleck抑制剂涵体形式表达。以获得的rCA-TM作为包被抗原，采用BIBW2992分子式方阵法优化各反应条件，建立了MVV间接ELISA检测方法。利用该方法检测羊临床常见病原阳性血清，结果显示，除MVV阳性血清以外，口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、绵羊肺炎支原体等绵羊临床常见病原的阳性血清均为阴性，特异性较强，且该方法能识别感染MVV病畜体内产生的CA蛋白和TM蛋白抗体。将MVV阳性血清2倍倍比稀释（1:500～1:32 000）后，分别利用建立的MVV间接ELISA方法及商品化MVV抗体ELISA试剂盒检测，结果显示商品化MVV抗体ELISA试剂盒最低可检测出1:40 00倍稀释的阳性血清，而本研究建立的间接ELISA方法最低可检测出1:16 000倍稀释的阳性血清，敏感性较高。重复性试验结果显示，该方法批内、批间试验的变异系数分别为3.6%～6.9%、2.3%～8.5%，均小于10%，重复性较好。利用本实验建立的MVV间接ELISA方法和商品化MVV抗体ELISA试剂盒对69份绵羊临床样品检测，结果显示，本实验建立的ELISA方法检测出31份阳性样品，38份阴性样品；商品化MVV抗体ELISA检测试剂盒检出37份阳性样品，32份阴性样品。二者的阳性符合率为83.7%，阴性符合率为100%，总符合率为91.3%。本研究首次基于MVV rCA-TM建立了MVV间接ELISA检测方法，且该方法能够分别识别CA蛋白抗体和TM蛋白抗体，不仅减少了因为血清转换而导致血清抗体检测不准确的影响，还扩大了检测范围，为内蒙地区绵羊梅迪-维斯纳病的诊断及净化提供了检测手段。