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为成功研制BVDV重组抗原蛋白（NS5A、E0、E2、mE2T）亚单位疫苗并对比分析其免疫效价，本研究对BVDV的4种不同功能蛋白进行原核表达后，与弗氏佐剂乳化进而研制成亚单位疫苗。然后，选择105只BALB/c小鼠为试验动物，将其随机分成7组进行3次免疫，以便从细胞免疫和体液免疫方面评估其免疫效果。在第3次免疫后第14天对小鼠进行攻毒，通Others抑制剂过qRT-PCR方法测定小鼠体内BVDV病毒的拷贝量。结果，成功研制出BVDV重组亚单位疫苗。3次免疫后，与免疫前相比，各组小鼠白细胞数量显著上升（P<0.05），其中联合疫苗组攻毒前、后白细胞数量最高，攻毒GNE-140体内实验剂量前为6.48±0.19，攻毒后为6.08±0.82。在3次免疫之后，联合疫苗组的抗体水平最高，在倍比稀释后为0.573±0.055，灭活疫苗为0.552±0.027；亚单位疫苗组中mE2T组的抗体水平最高，为0.535±0.028。MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖时发现，联合疫苗组的SI值最高，为1.963。抗体中和试验证明，各个疫苗组的小鼠血清对病毒均有一定的中和能力，其中联合疫苗组的中和能力最强，达到了1∶18HCV hepatitis C virus.2。qRT-PCR分析小鼠体内病毒的拷贝量，发现联合疫苗组小鼠体内病毒拷贝量最低，为1×102.3/mL。上述研究结果为BVDV的预防和控制提供了基础，也为新型疫苗的研制提供了依据。

目的 研究抗衰老口服液对产后小鼠子宫复旧GSK1120212过程的影响并探讨其可能的作用机制。方法 以未孕ICViral respiratory infectionR小鼠和产后ICR小鼠为对象，观察抗衰老口服液对小鼠出凝血时间、抗疲劳作用、补血作用以及产后小鼠离体子宫功能的影响，通过Western blot技术研究抗衰老口服液对凋亡和自噬相关蛋白表达水平的影响。结果 抗衰老口服液能明显缩短小鼠出凝血时间、延长小鼠游泳时间，显著增加产后小鼠血红蛋白量和红细胞数，并且提高其离体子宫的平均收缩张力、收缩频率及子宫活动力。抗衰老口服液抑制了子宫内膜组织中促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3的蛋白表达水平，抑制子宫肌层组织中p-P53和自噬标记物LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ的蛋白表达水平，显著提高了子宫肌层组织中MCL1和p-mTOR蛋白表达水平。结论 抗衰老口服液能显著促进E-616452生产商产后机体恢复，这可能与调控凋亡和自噬相关蛋白有关。

目的：分析下肢深静脉血栓患者血栓分子标志物变化对血栓形成的诊疗作用。方法：选取我院2020年2月—2021年1月收治的50例下肢骨折术后深静脉血栓形成患者为实验组；选取同期未VX-445作用诊断为更多深静脉血栓形成患者50例为对照组；选取同期在我院接受健康体检的50例健康者为健康组。分别于初诊时、利伐沙班抗凝治疗后1个月，采集研究对象静脉血对血栓分子标志物进行检测，包括可溶性血栓调节蛋白(sTM)、组织型纤溶酶原激活物—纤溶酶原激活物抑制剂复合物(t-PAIC)、纤溶酶α_2纤溶酶抑制剂复合物(PIC)、凝血酶—抗凝血酶复合物(TAT),观察分析检测结果。结果：与对照组相比，实验组的sTM、t-PAIC、PIC、TAT水平均显著增加(P<0.05);与健康组相比，实验组的t-PAIC、PIC、TAT水平均显著增加(P<0.05),而实验组与健康组的sTM水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与治疗前相比，治疗后实验prebiotic chemistry组的TAT、t-PAIC、PIC水平均明显降低(P<0.05)。结论：通过检测TAT、t-PAIC、PIC等血栓分子标志物，不仅能准确诊断下肢深静脉血栓形成，而且还能对抗凝疗效进行准确评估，具有临床推广价值。

手足口病(Hand-foot-and-mouth disease,HFMD)是一种由多种人肠道病毒(Human enterovirus,HEVs)引起的接触性传染病,多发于五岁以下婴幼儿,偶发于青少年和成人。HFMD典型的临床症状是:发热,手、足及臀部出现皮疹、疱疹或斑丘疹,无菌性脑膜炎,急性弛缓性麻痹,甚至导致死亡。自2008年5月2日起,HFMD作为第38种传染病被纳入我国《传染病防治法》的丙类法定报告传染病管理。据国家疾病控制中心(CDC)网站统计,在2006年至2019年,中国共计报告手足口病病例数为22,715,730例,其中死亡比例为3,396例,死亡率约为0.015%。从2015年开始,手足口病的死亡率开始明显下降,但发病率仍居高不下。随着2016年EV-A71灭活疫苗的上市,由EV-A71感染的HFMD病例数占比呈下降趋势。根据本研究室在2016-2019年对湖北省、江苏省多地区的流调结果分析,CV-A6、CV-A10、CV-A16已经取代EV-A71,成为这些地区引起手足口病的主要病原体。为了更好预防手足口病的爆发,研发包含EV-A71、CV-A6、CV-A10、CV-A16在内的手足口病多价疫苗刻不容缓。目前关于CV-A6、CV-A16、EV-A71的小鼠主动或被动保护模型已有大量文献报道,人肠道病毒A和B组的大部分血清型病毒的易感鼠龄仅为3日龄。小日龄小鼠的免疫系统发育不完全、无两次疫苗免疫后攻毒时间间隔,无法对疫苗效力做出合理的评价,故急需一种建立在大日龄小鼠基础上的主动保护模型。它可以完全模拟小鼠自然状态下疫苗接种与预防传染病的过程,模拟易感人群2次暴露同一病原体后的免疫应答和疾病预防过程,为候选疫苗的保护效力及耐受性做出更为可靠的评估,为候选疫苗的临床研究提供效力参考数据。本研究通过建立可以致死14日龄小鼠的主动保Mirdametinib作用护模型,对CV-A10单价候选疫苗进行了全面的评估。本研究通过10层Vero细胞工厂培养CV-A10-L12病毒,将其进行超滤浓缩、蔗糖垫底及Cs Cl密度梯度离心,分离并纯化CV-A10-L12的空心颗粒(EP)和实心颗粒(FP),分析自然条件下CV-A10的EP与FP比例(约为4:6)。将EP/FP混合样品(Mixed particles,MP,EP:FP=4:6)与0.18 mg/剂的Al(OH)_3佐剂配制CV-A10候选疫苗。通过TEM观察EP、FP和MP灭活前后的颗粒完整度及甲醛对病毒颗粒是否存在影响。通过SDS-PAGE、Western Blot对EP、FP和MP的含量和纯度进行分析。研究表明,CV-A10候选疫苗的纯度较高,约为92%。本研究将制备的CV-A10候选疫苗免疫6-8周龄的Balb/c小鼠,对CV-A10候选疫苗引起的体液及细胞免疫进行了研究。免疫原性可以作为疫苗效力的重要参考指标。在本研究中CV-A10候选疫苗初次免疫后的阳转率为60%,加强免疫后为100%,中和效价约为48。通过研究加免后第14天,经结构蛋白多肽刺激后,小鼠脾脏淋巴细胞中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6等细胞因子的特异性表达,发现CV-A10候选疫苗可以引起细胞免疫应答。此外,本研究通过设计涵盖CV-A10 P1区全部多聚蛋白的多肽段,对CV-A10引起T细胞免疫寻找更多的表位进行了研究,研究表明位于CV-A10 VP1/VP3 C端的多肽可引起强烈的T细胞刺激反应。这为研究CV-A10新型肽疫苗及其它重组蛋白疫苗提供了重要的思路和策略。本研究室通过鼠脑适应性传代成功获得一株可以致死12日龄小鼠的CV-A10-M12毒株。通过以MOI=0.01在10层RD细胞工厂中培养CV-A10-M12病毒,通过超滤浓缩将其体积浓缩35倍,成功获得可以致死14日龄的小鼠攻毒株,记为CV-A10-M14,并进行LD_(50)测定。以CV-A10-M14建立了小鼠的主动免疫-攻毒保护模型,通过腹腔注射含有Al(OH)_3佐剂和0.5μg或2.0μg抗原的CV-A10候选疫苗及等量Al(OH)_3佐剂制备的对照样品,在小鼠3日龄时进行初次免疫,9日龄时加强免疫,14日龄时注射致死剂量的CV-A10-M14。攻毒后,对小鼠的体重变化、临床评分及存活率进行监测,并在Al(OH)_3佐剂组死亡之时采集各组小鼠血清及组织器官进行血清中和效价测定和组织病毒载量测定。研究表明,CV-A10候选疫苗具有良好的耐受性和保护效力,0.5μg剂量组的CV-A10候选疫苗的保护率为90%,而2.0μg剂量组的保护率为100advance meditation%。通过对小鼠组织器官的病理切片及免疫组化分析,为CV-A10病毒的组织嗜性及入侵致病机理提供重要的基础研究,也进一步阐明了CV-A10候选疫苗接种后的免疫应答及病毒清除能力和保护机理。

目的 探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导基因(T更多iam1)蛋白表达介导PI3K/Akt/mTOR信号通路对老年胰腺癌细胞转移、侵袭的影响。方法 选择行手术确诊的老年胰腺癌患者106例，收集其癌组织标本及配对癌旁正常组织，Western Blot法检测胰腺组织Tiam1蛋白表达；选择人胰腺癌细胞株SW1990,采用SBE-β-CD体内浓度为50 ng/mL的HGF溶液和生理盐水处理并作为HGF组和空白组，转染Tiam1 minic作为Tiam1组，CCK8法、Transwell小室侵袭实验、划痕实验检测转染后胰腺癌细胞增殖、侵袭和转移能力；Western Blot法检测胰腺组织PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达，明确Tiam1蛋白表达与PI3K/Akt/mTOR信号通路的关系。结果 胰腺癌组织中Tiam1表达量高于癌旁组织中Tiam1表达量(P<0.05)。各组在转染0 h、12 h时细胞增殖率比较无明显差异(P>0.05),转染24 h、48 h、60 h时，与空白组比较，Tiam1组和HGF组RNAi-based biofungicide细胞增殖率升高，且Tiam1组高于HGF组(P<0.05);与空白组比较，Tiam1组和HGF组侵袭、转移能力及Tiam1、PI3K、Akt、HGF蛋白表达均增强，且Tiam1组高于HGF组(P<0.05)。结论 Tiam1在胰腺癌中呈高表达，与肿瘤发生相关；基于PI3K/Akt/mTOR通路Tiam1过表达可增强癌细胞侵袭、转移能力，有望成为胰腺癌进展过程中的一种新的生物治疗靶点因子。

目的 探析超声造影(CEUS)、血清3项肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体(AFP-L3)和高尔基蛋白73(GP73)在原发性肝癌(PLC)中的诊断selleckchem价值。方法 回顾性分析80例疑似PLC患者，根据病理诊断良恶性分为观察组(PLC患者，n=29例)及对照组(良性结节患者51例)。所有患者均进行CEUS检查及血清3项肿瘤标志更多物Anal immunization检测(AFP、AFP-L3和GP73)。比较两组CEUS相关定量参数、血清肿瘤标志物及两者联合在诊断PLC的价值。结果 与对照组比，观察组平均血流密度(MFD)、血清AFP、AFP-L3和GP73水平均明显增高(P<0.05),达峰时间(t TTP)、峰值强度(PI)均明显降低(P<0.05)。CEUS联合血清3项肿瘤标志物诊断PLC的灵敏度、特异度及准确度均明显高于单一CEUS或血清肿瘤标志物(AFP、AFP-L3和GP73)(P<0.05)。结论 CEUS联合血清AFP、AFP-L3和GP73可用于诊断PLC,具有较高诊断效能，为辅助PLC诊治提供依据。

目的 分析脾氨肽口服冻干粉联合双歧杆菌四联活菌片对抗生素相关性腹泻(AAD)患儿肠黏膜屏障功能及血清炎性因子水平的影响。方法 选取我院120例AAD患儿(2019年3月-2021年2月),依照治疗方案不同分为两组。对照组(57例)接受双歧杆菌四联活菌片治疗，观察组(63例)接受脾氨肽口服冻干粉联合双歧杆菌四联活菌片治疗，比较两组治疗效果。结果 疗效：两组总有效率对比，观察组较对照组高(P<0.05);临床症状改善情况：观察组呕吐及腹泻缓解时间、痊愈时间均较对照组短(P<0.05);肠黏膜屏障功能：治疗后，两组肠黏膜屏障功能均有所改善，且观察组血清脂多糖selleckchem FG-4592(LPS)、二胺氧化酶(DAO)均低于对照组(P<0.05);血清炎性因子水平：治疗后，两组血清炎性因子水平均有所改善，且观察组血清白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子selleckchem Q-VD-Oph-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、降钙素原(PCT)水平均较对照组低，干扰素-γ(IFN-γ)较对bio-based inks照组高(P<0.05)。结论 脾氨肽口服冻干粉联合双歧杆菌四联活菌片治疗AAD患儿，效果显著，能有效缓解临床症状，并可改善患儿肠黏膜屏障功能、调节炎性因子水平，促进痊愈。

目的 探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路对神经病理性疼痛(NP)大鼠杏仁核单核细胞趋化因子-1(MCP-1)表达的调节作用。方法 选取2月龄无特殊病原体(SPF)级健康雄性SD大鼠，采用脊神经结扎(SNL)左侧第5/6腰椎(L_(5/6))制备NP模型大鼠，假手术组仅暴露L_(5/6)脊神经不结扎。实验分为3个部分：(1)将24只大鼠于SNL术前及术后第7、14和21天(d_0、d_7、d_(14)和d_(21),各6只)取杏仁核，采用Western blot检测磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化JNK(p-JNK)表达情况并分析二者与MCP-1水平的相关性；(2)48只NP模型大鼠双侧杏仁核注射不同浓度mTOR抑制剂雷帕霉素或JNK抑制剂SP600125(浓度梯度均为0、0.1、1.0和10.0μmol/L),于d_(21)取杏仁核(genetic factor每个浓度各6只),采用ELISA检测MCP-1水平，免疫组织化学检测MCP-1阳性细胞数；(3)24只大鼠分为假手术组、模型组及抑制剂组(双侧杏仁核注射10μmol/L SP600125或雷帕霉素3μL),于d_0、d_4、d_7、d_(14)、d_(21)共5个时间点测定各组的机械痛阈值(MWT)。结果 与d_0相比，d_7、d_(14)、d_(21) NP模型大鼠杏仁核中p-mTOR和p-JNK水平均升高(P<0.05),且d_(21)水平最高；进一步分析发现，d_(21)的NP模型大鼠杏仁核p-mTOR和p-JNK水平与MCP-1水平均呈正相关(r=0.564、0.629,P<0.05)。杏仁核注射SP600125或雷帕霉素可降低MCP-1表达，与0μmol/L组相比，0.1～10.0μmol/L组的NP模型大鼠MCP-1水平及阳性细胞数均降低，差异有统计学更多意义(P<0.05),且10μmol/L组MCP-1水平及阳性细胞数最低。NP模型大鼠d_4、d_7、d_(14)、d_(21)杏仁核MWT均低于假手术组(P<0.05),经此网站SP600125或雷帕霉素治疗后NP模型大鼠降低的MWT获改善，SP600125组或雷帕霉素组d_7、d_(14)、d_(21)的MWT均高于模型组(P<0.05),但与对照组仍有明显差异(P<0.05)。结论 NP大鼠mTOR和JNK通路激活，抑制mTOR和JNK通路可达到缓解NP大鼠疼痛及上调杏仁核MCP-1表达的作用，对于NP的治疗有一定意义。

目的致病性大肠杆菌可以引起多种肠道疾病以及肠外感染,包括尿路感染、败血症和伤口感染等,金黄色葡萄球菌可导致皮肤和软组织感染和各种炎症,是人类化脓感染中最常见的病原菌。因此,特异、灵敏的检测方法对于保障我国食品安全具有重要意义。本研究是基于适配体的特异性识别作用,和纳米磁珠的分离富集功能,利用不同荧光物质的波长差异,建立新型的、能同时检测这两种食源性致病菌荧光的检测方法。方法分别用扫描电镜、红外光谱仪、紫外分光光度计等对纳米磁珠材料修饰及其对细菌的捕获状态进行了表征,用荧光光谱仪对”三明治”复合物的荧光强度进行测定,并根据荧光强度的变化对实验中各项条件进行了优化。结果成功建立了用荧光标记的适配体作为信号探针,用Fe_3O_4磁性纳米粒子固定的适配体作为捕获探针。信号探针通过适配体识别结合到捕获的细菌上,形成三明治型复合物。研究了最优的实验条件,例如:Fe_3O_4的合成条件、捕获探针用量、亲和素用量、适配体浓度、荧光探针用量、捕获时间、孵育时间等。在最优条件下,两种致病菌在102-107CFU/mL范围内呈良好的Canagliflozin说明书线性关系,大肠杆菌检出限为34.02 CFU/mL,金黄色葡萄球菌为44.67 CFU/mLSAG化学结构。本研究通过对最佳反应条件的探索,提高了免疫磁珠分离目标菌的效率,增强了方法的灵敏性和特异性。对市面上的牛奶、黄瓜、牛肉等食品进行了检测,并与标准方法对照,结果显示两种方法并无显著性差异。结论用Fe_3O_4磁性纳米粒子固定的适配体作为捕获探针,用荧光标记的适配体作为信号探针,成功建立了能够同时检测大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的方法。信号探针通过适配体识别结合到捕获的细菌上,形成三明治型复合物。在最优条件下,两种致病菌与信号呈良好的线性关系。本研究通过对最佳反应条件的探索,提高Veterinary medical diagnostics了免疫磁珠分离目标菌的效率,增强了方法的灵敏性和特异性。同时应用在实际食物样品测定中,结果与标准测定法无显著性差异。由此可见,该方法灵敏快捷、成本低,在食源性疾病防控方面有着较大的应用潜力。

VX-445目的 利用三文鱼加工废弃物制备多肽,探究其对鱼糜品质的影响及其生物活性。方法 以三文鱼头部、鱼骨以及其他副产物废弃料为原料,通过胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶进行酶解制备多肽,讨论并比较其对鱼糜品质的影响,并从体外抗氧化活性以及促骨生成活性两个角度对其生物活性进行初步探究。结果 三文鱼不同部位以及不同的酶所制备的多肽对鱼糜凝胶均具有改良作用,其中Gefitinib-based PROTAC 3价格,鱼骨中性酶肽效果最显著,提升了凝胶强度、持水性以及白度等指标,降低蒸煮损失以Human biomonitoring及氧化变色,且具备较好的体外抗氧化活性,同时能够促进成骨细胞的增殖分化,有效提高细胞碱性磷酸酶活性。结论 三文鱼多肽对鱼糜品质具有改良作用,并具有良好的抗氧化活性及成骨活性,可为潜在抗骨质疏松活性肽的进一步开发利用提供理论基础。