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植物内生真菌是指在植物部分或整个生命周期中,存在于植物健康组织内部的真菌,一般不会造成宿主植物明显的感染伤害。植物内生真菌与寄主植物之间长期协同进化,能够产生许多与寄主植物相同或相似的结构新颖且具有药用价值的次级代谢产物。动物来源的真菌作为天然产物研究中的一类新型真菌资源相比于其他类型真菌研究较少,但因其特殊的生存环境,具有丰富的生物多样性,并且能够产生特异性生物活性的新颖代谢产物,而具有非常广阔的研究前景。因此,对植物内生真菌和动物来源真菌的化学成分及生物活性研究是天然产物新药研究工作中至关重要的组成部分。为了扩大真菌筛选研究范围,发现更多特殊生境真菌产生的新颖天然产物,本文在三类植物样本及三类动物样本中共培养及纯化得到30株真菌。根据菌种鉴定结果结合化学成分分析和活性初筛,从中选取了 4株具有较大研究潜力的真菌以及1株前期有一定研究基础的地衣内生真菌作为后续研究的目标菌株。对五株不同来源的真菌Xylaria sp.、Phialocephala fortinii、Penicillium citrinum、Aliiruegeria sabulilitoris和Talaromyces sp.使用大米培养基放大发酵,乙酸乙酯提取得到粗浸膏。采用各种分离手段:硅胶柱色谱、ODS柱色谱、中低压柱色谱、凝胶柱色谱和高效液相色谱等对大米发酵粗提物进行分离,共得到85个化合物,其中新化合物23个。在化合物结构鉴定过程中充分运用核磁共振波谱、质谱、紫外光谱、红外光谱、圆二色谱、X射线单晶衍射等方法确定了所得化合物的平面结构和立体构型。并测试了部分化合物的抗肿瘤、抗炎、抗真菌等生物活性。从柘木内生真菌Xylaria sp.(No.ZW-1)的次级代谢产物中分离得到35个化合物,包括5个2,5-二苯基环戊酮烯类化合物(1a、1b、1c、2a和2b)、7个α-吡喃酮类化合物(3-9)、1个γ-吡喃酮类化合物(10)、15个环二肽类化合物(11-25)、3个异香豆素类化合物(26-28)、3个其他类型生物碱类化合物(29-31)以及1个倍半萜类化合物(32)。其中化合物1a-1c、2a、2b、3-11为新化合物,共14个。对2,5-二苯基环戊酮烯类化合物1-2进行了生物合成途径推测。运用HPLC-MS分析手段确定了新化合物6-8为真菌产生的天然产物。此外,对新化合物1a-11进行了细胞毒活性和抗炎活性测试,结果显示化合物6对PC3肿瘤细胞株显示中等强度的抑制活性(IC50值为14.75μM),化合物1c和8对NO生成具有一定程度的抑制活性(IC50值分别为49.76和69.68 μM)。对前期有一定研究基础的地衣内生真菌Phialocephala fortinii(No.4537d)进行了二次放大发酵,在新苝醌类化合物分布集中的极性组分中分离得到8个化合物,包括7个苝醌类化合物(33-39)和1个螺二萘类化合物(40)。其中化合物33-37为新化合物,共5个。寻找更多细胞毒活性研究显示化合物33、34、38和40选择性的对EC109肿瘤细胞株显示一定的细胞毒活性,其IC50值范围为24.5～33.3μM。从苔藓内生真菌Penicillium citrinum(No.7-3)次级代谢产物中分离得到14个化合物,包括2个异香豆素类化合物(41-42)、4个苯酚类化合物(43-46)、4个橘霉素单体类化合物(47-50)、1个橘霉素二聚体类化合物(51)、2个甾体类化合物(52-53)和1个二氢α-吡喃酮类化合物(54)。其中41为新化合物,并且该化合物在本身对白色念珠菌野生型菌株SC5314和耐药菌株YEM13不具有明显抗真菌活性的前提下可以有效增强YEM13对氟康唑(FLC)的敏感性,在41为16μg/mL时可以将FLC的MIC80值降低为8μg/mL。从蚯蚓来源真菌Aliiruegeria sabulilitoris(No.SQ6-1)Immunohistochemistry次级代谢产物中分离得到18个化合物,包括2个结构类型新颖的聚酮类化合物(55-56)、7个苯醚类化合物(57-63)、4个其他类型聚酮类化合物(64-67)、2个萘类化合物(68-69)和3个简单芳香类化合物(70-72)。其中55-57为新化合物,并对化合物55和56进行了生物合成途径推测。从东亚钳蝎来源真菌Talaromyces sp.(No.XZ-2)次级代谢产物中分离得到10个已知化合物,包括1个苯醚类化合物(73)、1个蒽醌类化合物(74)、1个异香豆素类化合物(75)、1个环己烯酮类化合物(76)和6个其他类型芳香类化合物(77-82)。其中化合物79为首次分离到的天然产物。对所得化合物生物活性研究显示77-79能够同时增强白色念珠菌耐药菌株YEM13和YEM15对FLC的敏感性(FICI 值<0.5)。本文通过对五株不同来源真菌次级代谢产物的化学成分及生物活性进行研究,selleck化学分离得到大量天然产物,其中部分为新结构化合物,且不乏部分生物活性显著的化合物。以上研究成果丰富了植物内生真菌及动物来源真菌代谢产物的研究,说明二者是新颖活性天然产物的重要来源,有待于进一步深入研究及挖掘。

目的:应用数据挖掘方法研究林毅教授在乳腺癌围放疗期的治疗经验。方法:筛选2019年6月-2021年12月林毅教授诊治的乳腺癌围放疗期病案,在中医传承辅助平台上使用频数分析法、关联规则、改进型互信息法及复杂系统熵聚类等方法进行药物频次、四气五味、经络归属及组方规律分析。结果:共纳入255个病案,涉及376个处方,频次在200以上的药物依次为麦冬、白术、太子参、茯苓、黄芪、胖大海、山药、木蝴蝶、桔梗、鱼腥草、北沙参、百合、女贞子,药物四气频次前两Suppressed immune defence位为寒、平,五味前三为甘、苦、辛,经络归属前三为肺、胃、脾,确定药物间关联规则后Axl抑制剂,进一步聚类得到6个核心组合和3个新方组合。结论:寻找更多通过数据挖掘,总结林毅教授在乳腺癌围放疗期的治疗经验为:异病同治,辨证为用,扶正祛邪,标本兼顾;在脏治肺,脾胃固本,培土生金,重养气阴;谨守病机,因证遣方,随症加减,用药平和。

目的：探究近红外自体荧光显像技术(NIRAF)在甲状腺再次手术中识别甲状旁腺的作用。方法：以2019年11月4日—2021年10月20日我院外一科收治的11例再次甲状腺手术患者作为观察对CHIR-99021 IC50象，通过肉眼识别及NIRAF探测甲状旁腺，对可疑甲状旁腺组织采用组织穿刺洗脱液中的甲状旁腺激素(PTH)浓度证实，比较两种识别方法的检出率、准确率，患者手术前后的PTH及钙离子(Ca~(2+))浓度。结果：11例患者术中甲状旁腺肉眼识别14selleck Liproxstatin-1枚，NIRAF识别20枚，术中实际确认甲状旁腺18枚，合并可疑甲状旁腺组织术后最终确认甲状旁腺21枚，肉眼检出率为66.67%,准确率为100.00%;NIRAF检出率为95.24%,准确率为85.71%;NIRAF检出率高于肉眼，差异有统计学意义(P=0.018),两种识别方法准确率差异无统计学意义(P=0.139);患者手术前后PTH、Camediodorsal nucleus~(2+)浓度差异无统计学意义(P>0.05);两组患者术后均无低钙临床表现。结论：NIRAF探测甲状旁腺在再次甲状腺手术取得良好的效果，极大改善医师对甲状旁腺的识别能力，有助于减少手术副损伤。

目的:急性呼吸综合征冠状病2(SARS-Co V-2)引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)已成为严重的全球公共卫生威胁,从样本中检出完整SARS-Co V-2病毒对于诊断SARS-Co V-2感染和评估环境污染程度至关重要。但是,目前分离病毒的方法具有病毒载量高、病毒分离步骤繁琐、环境条件苛刻和实验周期长等缺陷,无法实现大规模临床检测。为此,我们欲结合免疫反应和分子检测开发一种能够准确、快速地检测完整SARS-Co V-2病毒的方法,从而精确评估感染状态,大幅度降低疫情防控的经济社会成本。方法:(1)利用基因重组、细胞转染和细胞转导进行假病毒包装和验证;(2)利用Western bloting和Viral particle gel从11种靶向野生型SARS-Co V-2刺突糖蛋白的候选抗体中筛选能够与完整SARS-Co V-2病毒结合的抗体;(3)评估免疫分子法的特异性、线性范围、检测限和稳定性;(4)利用蔗糖disc infection密度梯度离心分离病毒上清并鉴定总的病毒抗原/RNA与完整病毒颗粒含量的差异;(6)不同滴度的完整SARS-Co V-2假病毒用于感染HEK-293FT-h ACE2细胞验证完整病毒滴度和感染能力的关系;(7)测定不同材料(塑料、纸片、铜片和铝片)表面SARS-Co V-2假病毒的稳定性,模拟环境中完整SARS-Co V-2病毒的检测。结果:(1)病毒转导、Western blotingS63845抑制剂和q RT-PCR结果表明成功构建了一种全新的能够模拟SARS-Co V-2完整病毒结构的假病毒;(2)成功筛选到三株能够与完整SARS-Co V-2假病毒结合的抗体,其中CQ25显示出最强的特异性和亲和力;(3)免疫分子法检测完整SARS-Co V-2/假病毒的检测限为9×10~2TU/m L(95%置信区间),对于人源血清和常见病毒/假病毒的稳定性高(组内和组间的Protein Tyrosine Kinase抑制剂变异系数均为1.0～2.0%);(4)病毒上清中总的S蛋白/RNA与完整病毒颗粒的水平具有显著性差异(P<0.05);(5)HEK-293FT-h ACE2细胞的感染水平与完整SARS-Co V-2假病毒滴度呈正相关;(6)SARS-Co V-2假病毒在塑料和纸上比在铝和铜上更稳定,在不同材料表面处理96 h后其滴度大幅降低,但仍能被检测到(铜除外)。结论:我们开发了一种精准、便捷、经济的SARS-Co V-2完整病毒检测方法,实现了从检测病毒核酸到检测病毒颗粒的跨越,能够更加准确的评估患者和高危环境(隔离室、采样室、冷链物流等)的感染风险从而确保合理用药和消毒,大幅度降低疫情防控的经济社会成本。

目的 探讨无创左心室压力-应变环（LVPSL）对冠状动脉不同程度狭窄的冠心病（CAD）患者心肌做功的评价。方法 回顾性选择2019年12月～2021年10月就诊于湖南中医药高等专科学校附属第一医院心血管内科临床诊断为疑似CAD且行冠状动脉造影检查的患者130例，所有患者均行常规超声心动图、二维斑点追踪Trichostatin A细胞培养（2DSTI）和LVPSL检查。根据冠状动脉造影结果将其分CP-456773抑制剂为冠状动脉无狭窄组（n=33），冠状动脉有狭窄组（n=97）。依据冠状动脉Gensini评分将冠状动脉有狭窄组分为三个亚组，轻度狭窄组（Gensini评分<25,n=37），中度狭窄组（Gensini评分25～50,n=32），重度狭窄组（Gensini评分>50,n=28）。采集常规超声心动参数的同时，取左心室心尖四腔心、三腔心、两腔心切面三个心动周期在二维斑点追踪（2D-STI）模式下获得左心室整体纵向应变（GLS）。输入实时血压，进入LVPSL模式，可获得左心室整体做功指数（GWI）、整体有效做功（GCW）、整体无效做功（GWW）和整体做功效率（GWE）参数。比较不同程度冠状动脉狭窄对心肌做功的影响。结果 与冠状动脉无狭窄组相比，冠状动脉轻度狭窄组GLS的减低（P<0.01）、GWI减低（P<0.01）、GCW减低（P<0.01）,GWE减低（P<0Medical sciences.01）,GWW减低（P<0.01）；冠状动脉中度狭窄组GLS减低（P<0.01）、GWI减低（P<0.01）、GCW减低（P<0.01）,GWE减低（P<0.01）,GWW减低（P<0.01）；冠状动脉重度狭窄组GLS减低（P<0.01）、GWI减低（P<0.01）、GCW减低（P<0.01）,GWE减低（P<0.01）,GWW减低（P<0.01）。与冠状动脉轻度狭窄相比，冠状动脉中度狭窄组GLS减低（P<0.01）、GWI减低（P<0.01）、GCW减低（P<0.01）,GWE减低（P<0.01）,GWW减低（P<0.01）；冠状动脉重度狭窄组GLS减低（P<0.01）、GWI减低（P<0.01）、GCW减低（P<0.01）,GWE减低（P<0.01）,GWW增加（P<0.01）；与冠状动脉中度狭窄相比，冠状动脉重度狭窄组GLS减低（P<0.01）、GWI减低（P<0.01）、GCW减低（P<0.01）,GWE减低（P<0.01）,GWW减低（P<0.01）。冠状动脉狭窄组的Gensini评分与GLS的绝对值、GWI、GCW、GWE呈负相关（r=-0.554,-0.661,-0.619,-0.829），与GWW呈正相关（r=0.718），其中与GWE的相关性最高。结论 LVPSL技术测得的GWI、GCW、GWE和GWW可定量分析不同程度冠状动脉狭窄的CAD患者心肌做功情况，心肌做功参数GWE与Gensini评分的相关性最高。

目的：探讨以奥瑞姆自理模式为指导的健康宣教干预在乳腺癌患者经外周静脉穿刺中心静脉置管（PICC）化疗中的应用价值。方法：选取2018年1月—2020年1月广东省人民医院珠海医院收治的120例行PICC化疗的乳腺癌患者作为研究对象，按随机数表法分为对照组和观察组，每组各60例。对照组采用常规护理与健康宣教，观察组在对照组常规护理与健康宣教基础上实施以奥瑞姆自理模式为指导的健康宣教干预。比较两组患者干预前后Viral infection焦虑自评量表（SAS）评分、抑郁自评量表（SDS）评分、生活质量（QOL）评分、导管维护依从性、知信行各维度评分、护理满意度、并发症发MG132使用方法生率。结果：干预后，观察组SAS、SDS评分低于对照组，QOL评分高于对照组，差异有统计学意义（t=2.470、5.945、8.017,P<0.05）。干预后，观察组导管维护依从性明显高于对照组，差异有统计学意KPT-330义（Z=8.792,P<0.05）。干预后，两组患者知信行各维度评分均高于干预前，且观察组高于对照组，差异有统计学意义（t=12.418、15.436、17.623,P<0.05）。观察组护理满意度为91.67%，高于对照组的78.33%，差异有统计学意义（χ~2=4.183,P<0.05）。观察组化疗相关并发症发生率为5.00%(3/60)，低于对照组的16.67%(10/60)，差异有统计学意义（χ~2=4.227,P<0.05）。结论：以奥瑞姆自理模式为指导的健康宣教干预应用于乳腺癌患者PICC化疗中，能够改善乳腺癌化疗患者的负性情绪，提高患者的PICC导管维护依从性及生活质量，提升知信行水平与护理满意度，降低并发症发生率。

为建立猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法，以大肠杆菌表达并纯化的gB 蛋白为包被抗原，以辣根过氧化物酶（HRP）标记的Trichostatin A说明书抗gB蛋白单克隆抗体为酶标抗体，经各反应条件的优化，成功建立了PRV gB抗体的竞争酶联免疫检测方法，并对该方法Killer cell immunoglobulin-like receptor的特异性、敏感性、重复性进行了评估。PRV gB抗体竞争酶联免疫检测方法经优化后的最佳条件为：gB 蛋白的最佳包被浓度为0.25μg/mL、包被量100μL/孔，酶标抗体的最佳稀释浓度为1:1000，样品检测时间为30 min（抗原抗体反应）+ 15 min（底物显色）；敏感性结果显示，PRV gB标准阳性血清（Z89）经1:512稀释后经检测仍为阳性；特异性结果显示，猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、大肠杆菌抗体阳性血清的检测结果均为阴性；批内、批间重复试验结果显示，批内、批间变异系数分别为0.24%～9.45%、0.58%～11.61%，均小于12%。通过对采集的184份临床血清检测结果进行比较，该方法与商品化试剂盒的阳性符合率为96.23%，阴性符合率为96.95%，总符合率96.74%。本selleck NMR研究在国内首次建立PRV gB竞争酶联免疫检测方法，为PRV gB抗体快速检测提供了可靠的技术手段。

目的 探讨氰戊菊酯(Fen)干扰小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)睾酮合成的机制。方法TM3细胞随机分为对照组(Control group, 0μmol/L Fen)、25μmol/L Fen暴露组、25μmol/L Fen+5 mmol/L NAC组、25μmol/L Fen+10μmol/L BAPTA-AM组；采用CCK-8法检测染不同浓度及不同作用时间的细胞增殖情况；ELISA法检测小鼠睾酮(T)和cAMP的含量；DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量；Fluo-4/AM探针检测细胞内Ca~(2+)浓度；JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP)变化情Liraglutide体内实验剂量况；生化比色法测定细胞ATP含量；Western blot检测3β-HSD、StAR、ANT4和CyPD表达水平。结果 Fen暴露后，TM3细胞ROS水平和胞内Ca~(2+)浓度上升(P<0.01),线粒体膜通透性转运孔(mPTP)组成成分ANT4和CyPD表达水平上升(P<0.01),MMP水平下降(P<0.01),细胞ATP和cAMP合成能力降低(P<0.01),cAMP/PKA信号通路依赖性的StAR蛋白和3β-HSD表达水平下降(P<0.01),睾酮合成能力随之下降(P<0.01);与25μmol/L Fen暴露组比较，25μmol/L Fen+5 mmol/L NAC组和25μmol/L Fen+10μmol/L BAPTA-AM组TM3细胞睾酮合成水平显著上升(P<0.05)。结论 Fen暴露后，TM3细胞ROS和胞浆Ca~(2+)浓度上升，二者通过协同效应引起mPTP开放，细胞ATP和cAMP合成障碍，cAMP/PKA信号通路antibiotic expectations依赖性的睾酮合成蛋白和酶表达下降，TM3细胞睾酮合成受阻。本研究的结果提示抑制R428纯度ROS和Ca~(2+)的信号作用可能有助于抑制Fen诱导的TM3细胞mPTP开放并改善Fen暴露所致TM_3细胞睾酮合成障碍。

目的:归纳替雷利珠单抗引起药物不良反应(adverse drug reactions, ADRs)的特点，为临床用药安全提供参考。方法:检索中国知网、万方、维普、PubMed、ScienceDirect和Embase数据库(截至2022年4月),收集关于替雷利珠单抗相关ADRs的个案报道，对纳入病例的临床资料、替雷Subclinical hepatic encephalopathy利珠单抗用药情况以及ADRs的临床表现、名称、发生时间、处置及转归等进行统计分析。结果:纳入替雷利珠单抗致ADRs的个案报道15篇，共计16例患者，其中男性11例，女性5例；年FG-4592供应商龄26～78岁，平均年龄(64.81±12.92)岁。ADRs发生时间在1个用药周期内的有4例，2个用药周期内的有2例，3～9周期时间内8例，10个周期后的有2例；涉及皮肤软组织、内分泌、消化、泌尿和心血管等系统，经对症治疗后，16例患者均Z-VAD-FMK好转。结论:临床使用中应加强替雷利珠单抗相关ADRs的关注，提高临床用药安全性。

目的 噬菌体展示技术(Phage display technology, PDT)是一种独立于任何免疫系统并在体外进行筛选多selleck HPLC肽或者抗体的一种技术，可以从噬菌体抗体库中筛选得到特异性结合的单克隆抗体(monoclonal antibody)。本研究提出了一种应用于噬菌体抗体库筛选的质粒构建方法，旨在提高噬菌体展示技术的筛选效率。方法MC3价格 首先将编码整个抗体结合域的基因(以单链可变片段scFv的形式)融合到基因III,并在融合噬菌粒scFv-PIII间引入牛凝血酶(thrombin)酶切位点，通过SDS-PAGE及Westlower-respiratory tract infectionern Blot实验验证牛凝血酶特异性洗脱效果，同时利用ELISA(酶联免疫吸附实验)及噬菌体滴度检测特异性洗脱后单链抗体的结合活性，最后根据该质粒设计一种新的模型筛选方法，验证筛选效率。结果 本研究成功构建目标质粒并利用该质粒进行模型筛选，证实筛选效率得到提高。结论 在构建噬菌体抗体库的噬菌粒载体上添加牛凝血酶特异性酶切位点的筛选方法，可以减少筛选轮次高效筛选出特异性噬菌体抗体。