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目的 探讨宫腔镜在绝经后无症状子宫内膜增厚患者中的诊疗价值。方法 回顾性分析绝经后经阴道超声(TVS)检查提示子宫内膜增厚(内膜厚度≥5 mm)且无症状68例患者的临床资料,均实施宫腔镜检查和(或)宫腔镜下手术治疗。分析阴道超声检查、宫腔镜检查及病理诊断疾病类型,阴道超声检查影像改变情况及2例子宫内膜癌患者的检查结果。结果 68例患者病理诊断子宫内膜增生4例,子宫内膜息肉46例,黏膜下肌瘤10例,子宫内膜炎4例,子宫内膜癌2例,其他2例。阴道超声检查子宫内膜增生2例,子宫内膜息肉13例,黏膜下肌瘤1例,子宫内膜炎1例,子宫内膜癌1例,其他1例。宫腔镜检查子宫内膜增生4例,子宫内膜息肉38例,黏膜下肌瘤10例,子宫内膜炎4例,子宫内膜癌2例,其他1例。子宫内膜息肉阴道超声检查影像表现为单纯内膜增厚或合并宫Gefitinib-based PROTAC 3小鼠腔异常回声都占绝大多数,分别为52.2%、37.0%；子宫内膜癌均为50.0%。2例子宫内膜癌患者经宫腔镜检查诊断为子宫内膜癌,后均经手术后子宫切除标本病理诊断为子宫内膜腺癌,其中1例阴道超声提示内膜增厚6 mm, 1例阴道超声提示宫腔混合回声。结论 在绝经后无症状子宫内膜增厚患者中,最常见的子宫内膜病变为子宫内膜息肉,子宫内膜恶性肿瘤亦占一定比例,需引起临床高度重视。临床在进一步诊断Z-IETD-FMK时不能完全依靠B超检查评估子宫内膜厚度,要与临床因素及恶性病变的高危因素相结合,做出个体化判断,结合宫腔镜和组织病理学检查得到准确的诊断非常IGZO Thin-film transistor biosensor重要。

第一部分 热射病大鼠的心功能损伤及炎症反应与铁死亡作用的初步研究目的建立热射病大鼠动物模型,初步探究高温干预过程对大鼠心功能的影响及高温干预后恢复过程中炎性通路蛋白与铁死亡相关蛋白的变化趋势,并寻找出最佳时间点以初步探究热射病与铁死亡之间的联系。方法(1)18只雄性SD大鼠随机分为对照(Control)组与热射病(HS)组,Control组3只,HS组15只。肛温计检测大鼠核心体温;BL-420F生物机能实验系统检测大鼠HR及MAP。(2)将上述HS组大鼠按照不同恢复时长分为0h组,3h组,6h组,12h组及24h组,每组3只。ELISA检测大鼠c Tn I;Western blotting检测不同恢复时间点TLR4、NF-κB、p53、SLC7A11和GPX4蛋白表达水平;超声检测心功能指标:SV、CO、LVPWd和LVPWs;BL-420F生物机能实验系统检测心脏血流动力学指标:LVSP、LVEDP、左+dp/dt_(max)及-dp/dt_(max);H&E染色检测大鼠心肌组织病理学形态结构。(3)24只SD大鼠随机分为Control组、铁死亡抑制剂(Liproxstatin-1)组、HS组与HS+Liproxstatin-1组,每组6只。建模前30 min,Liproxstatin-1组和HS+Liproxstatin-1组腹腔注射liproxstatin-1(10 mg/kg)。免疫荧光染色检测大鼠心肌组织中SLC7A11蛋白表达水平;Western blotting检测大鼠心肌组织中SLC7A11与GPX4表达水平。结果(1)直肠温度检测结果显示,与Control组比较,HS组大鼠高温干预60 min后体温上升速度明显加快,并在180 min时显著增加(P<0.01);BL-420F生物机能实验系统检测结果显示,在高温干预过程中,与Control比较,HS组大鼠高温干预120 min后心率上升速度明显加快,并在180 min时达到峰值(P<0.01);与Control比较,HS组大鼠高温干预60 min后MAP明显升高,在90 min时达到峰值并维持至120 min,120min后MAP显著降低(P<0.05)。(2)与Control组比较,HS组大鼠高温干预后恢复3h时,c TnⅠ含量开始增加,并在恢复12h时显著增加(P<0.01);Western blotting检测结果显示,与Control组比较,HS组在高温干预后恢复12h时大鼠心肌组织中TLR4、NF-κB及p53蛋白表达显著增加(P<0.01),SLC7A11与GPX4蛋白表达显著减少(P<0.01);超声检测结果显示,Control组大鼠SV、CO、LVPWd和LVPWs正常;与Control组比较HS组大鼠SV、CO明显降低(P<0.01),LVPWd与LVPWs明显增加(P<0.01);在高温干预后恢复12h,Control组大鼠血流动力学指标正常;与Control组相比,HS组大鼠LVSP显著下降(P<0.01),LVEDP明显增多(P<0.05),+LVdp/dt_(max)显著下降(P<0.05),-LVdp/dt_(max)明显升高(P<0.05);H&E染色结果显示,Control组心肌结构规整清晰,心肌细胞呈梭形,细胞核居中;与Control组相比,HS组见部分心肌排列紊乱、形态不规则或模糊不清,部分胞质深染肥大,细胞间质可见大量炎性细胞浸润。(3)免疫荧光染色结果显示,与Control组比较,HS组大鼠心肌组织中SLC7A11表达明显减少(P<0.01);与HS组比较,HS+Liproxstatin-1组SLC7A11表达明显PLX3397改善(P<0.01);Western blotting检测结果显示,与Control组比较,HS组大鼠心肌组织中SLC7A11、GPX4表达水平明显下降(P<0.05);与HS组比较,HS+Liproxstatin-1组大鼠SLC7A11、GPX4表达水平明显改善(P<0.05)。结论热射病大鼠核心体温明显增加、心率显著升高并伴有低血压;在高温干预后恢复12h时热射病大鼠心功能明显异常,心肌组织结构严重损伤,TLR4/NF-κB炎性信号通路蛋白高表达,p53/SLC7A11/GPX4铁死亡通路蛋白中,p53表达增加,SLC7A11和GPX4表达减少,据此,高温干预后恢复12h可作为本研究动物实验最佳研究时间点。第二部分 抑制TLR4对热射病大鼠心功能及炎症反应与铁死亡的影响目的通过抑制TLR4探究其在热射病大鼠心功能损伤及炎症反应与铁死亡的作用。方法将36只SD大鼠随机分为Control组、TAK-242组、HS组与HS+TAK-242组,每组9只。建模前30 min,TAK-242组和HS+TAK-242组腹腔注射TAK-242(3 mg/kg)。BL-420F生物机能实验系统检测心脏血流动力学指标:LVSP、LVEDP、+dp/dt_(max)及-dp/dt_(max);超声检测心功能指标:SV、CO、LVPWd及LVPWs;H&E染色检测大鼠心肌组织病理学形态结构;RT-q PCR和Western blotting检测TLR4、NF-κB、p53、SLC7A11和GPX4 mRNA及蛋白的表达水平;免疫荧光染色检测心肌组织中TLR4蛋白表达水平;免疫组织化学检测NF-κB、p53、SLC7A11和GPX4蛋白表达水平;ELISA检测大鼠血清中c Tn I、TNF-α、IL-6和IL-1β含量;试剂盒检测大鼠血清中Fe~(2+)含量。结果Control组大鼠SV、CO、LVPWd和LVPWs正常;与Control组比较TAK-242组大鼠SV、CO、LVPWd和LVPWs无明显差异(P>0.05),HS组大鼠SV、CO明显降低(P<0.01),LVPWd与LVPWs明显增加(P<0.01);与HS组比较,HS+TAK-242组SV、CO增加,LVPWd和LVPWs降低(P<0.05)。Control组大鼠血流动力学指标正常;与Control组比较,TAK-242组大鼠血流动力学指标无明显差异(P>0.05),HS组大鼠LVSP(P<0.01)、+dp/dt_(max)(P<0.05)下降,LVEDP、-dp/dt_(max)增加(P<0.01);与HS组比较,HS+TAK-242组血流动力学指标改善,LVSP、+dp/dt_(max)升高,LVEDP、-dp/dt_(max)降低(P<0.05)。H&E染色结果显示,Control组心肌结构正常;与Control组相比,HS组见部分心肌排列紊乱,部分心肌细胞肥大、胞质深染,细胞间质可见大量炎症细胞浸润;HS+TAK-242组可见心肌细胞排列较HS组整齐,肥大的心肌细胞数量减少,细胞间质仍可见炎症细胞浸润,但较HS组减轻。与Control组比较,TAK-242组大鼠血清中c TnⅠ含量无明显变化(P>0.05),HS组c TnⅠ含量显著增加(P<0.01);与HS组相比,HS+TAK-242组c TnⅠ含量显著减少(P<0.05);RT-q PCR与Western blotting检测结果显示,与Control组比较,HS组大鼠心肌组织中TLR4、NF-κB和p53 mRNA及蛋白表达水平明显增高(P<0.01),SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.01);与HS组比较,HS+TAK-242组TLR4、NF-κB和p53 mRNA及蛋白表达水平明显降低,SLC7A11和GPX4 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。免疫荧光染色检测结果显示,与Control组比较,TAK-242组大鼠心肌组织中TLR4表达无明显差异,HS组部分心肌组织中TLR4表达明显增高;与HS组比较,HS+TAK-242组心肌组织中TLR4表达明显降低。免疫组化结果显示,与Control组比较,TAK-242组大鼠心肌组织中NF-κB、p53、SLC7A11和GPX4表达无明显差异,HS组部分心肌组织中NF-κB、p53表达明显增高,SLC7A11和GPX4表达显著减少;与HS组比较,HS+TAK-242组心肌组织中NF-κB、p53表达明显降低,SLC7A11和GPX4表达显著增多。结论TLR4可作为探究热射病大鼠心功能结构保护机制的重要靶点之一,抑制TLR4可显著改善热射病大鼠心功能损伤和心肌组织结构损伤,其机制可能与TAK-242下调TLR4/NF-κB信号通介导的炎症反应及p53/SLC7A11/GPX4信号通路介导的铁死亡相关。第三部分抑制TLR4/NF-κB信号通路对H9C2大鼠心肌细胞炎症反应与铁死亡的影响目的探究高温干预对H9C2大鼠心肌细胞形态结构及活力影响,并明确TLR4/NF-κB信号通路在高温干预导致的心肌细胞炎症反应与铁死亡中的作用。方法(1)37℃组、41℃组、43℃组和45℃组。免疫荧光检测α-actinin标记的H9C2细胞的细胞形态结构;CCK-8检测不同温度时细胞活力。(2)Control组、2h组、3h组、4h组和5h组(高温干预时间)。免疫荧光检测α-actinin标记的H9C2细胞的细胞形态结构;CCK-8检测不同高温干预时长时的细胞活力。(3)Control组,0h组,3h组,6h组和12h组(高温干预后恢复的时间)。Western blotting检测H9C2细胞中TLR4的表达水平。(4)Control组,HS组(43℃高温干预2h后37℃恢复3h)。RT-q PCR和Western blotting检测H9C2细胞中TLR4、NF-κB、p53、SLC7A11和GPX4 mRNA及蛋白的表达水平;ELISA检测H9C2细胞中TNF-α、IL-6及IL-1β含量。(5)Control组、Liproxstatin-1组、HS组和HS+Liproxstatin-1组。Western blotting检测H9C2细胞中SLC7A11和GPX4的表达水平;试剂盒检测H9C2细胞中GSH和MDA含量。(6)Control组、Liproxstatin-1组、HS组、HS+Liproxstatin-1组和Erastin组。透射电镜检测H9C2细胞中线粒体的形态结构;试剂盒检测H9C2细胞中ROS和Fe~(2+)含量。(7)Control组、TAK-242组、HS组和HS+TAK-242组。RT-q PCR及Western blotting和免疫荧光检测H9C2细胞中TLR4、NF-κB、p53、SLC7A11和GPX4 mRNA及蛋白的表达水平;ELISA检测H9C2细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β含量;试剂盒检测H9C2细胞GSH、MDA、ROS和Fe~(2+)含量;透射电镜检测H9C2细胞中线粒体形态结构。(8)Control组、PDTC组、HS组、HS+PDTC组和HS+TAK-242组。RT-q PCR检测TLR4、NF-κB、p53、SLC7A11和GPX4 mRNA表达水平;ELISA检测H9C2细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β含量;试剂盒检测H9C2细胞GSH、MDA、ROS和Fe~(2+)含量。结果(1)Control组H9C2细胞呈长梭形;与Control组相比,41℃时,细胞骨架开始出现皱缩;43℃时,H9C2细胞逐渐呈不规则形;45℃时,H9C2细胞呈不规则球囊状。CCK-8结果显示,在一定时间内,随着干预温度的增加细胞活力逐渐降低,且在43℃和45℃时细胞活力显著降低(P<0.01)。(2)与Control组相比,在一定温度下,随着干预时间的增加,细胞形态逐渐开始变化,由长梭形逐渐变为不规则椭圆形,且细胞活力逐渐降低(P<0.01)。(3)与Control组相比,TLR4在高温干预后恢复3h时表达显著增高(P<0.01),在6h和12h时TLR4的高表达有所恢复(P<0.05)。RT-q PCR及Western blotting检测结果显示,与Control组相比,HS组TLR4、NF-κB和p53 mRNA及蛋白表达水平显著增加(P<0.01)。与Control组相比,HS组H9C2细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β含量显著增加;(4)Western blotting检测结果显示,与Control组相比,HS组SLC7A11和GPX4表达显著增加减少;与Control组相比,Liproxstatin-1组SLC7A11和GPX4蛋白表达无显著性差异(P>0.05),HS组SLC7A11(P<0.01)和GPX4(P<0.05)蛋白表达显著减少;HS+Liproxstatin-1组与HS组相比SLC7A11和GPX4蛋白表达增加(P<0.05)。与Control组相比,Liproxstatin-1组GSH和MDA含量无显著性差异(P>0.05),HS组H9C2细胞中GSH含量明显减少(P<0.01),MDA含量显著增多(P<0.05);HS+Liproxstatin-1组与HS组相比,GSH含量增加(P<0.01)和MDA(P<0.05)含量减少。(5)与Control组相比,Liproxstatin-1组ROS和Fe~(2+)含量无显著性差异,HS组ROS和Fe~(2+)含量显著增多,Erastin组结果与HS组一致;HS+Liproxstatin-1组与HS组相比,ROS和Fe~(2+)含量减少。与Control组相比,Liproxstatin-1组线粒体无明显改变,HS组线粒体变小,线粒体膜密度增高,Erastin组线粒体的变化同HS组一致;HS+Liproxstatin-1组线粒体的形态结构较HS组得到改善。(6)与Control组相比,TAK-242组TLR4、NF-κB、p53、SLC7A11和GPX4 mRNA及蛋白表达无显著性差异(P>0.05),HS组TLR4、NF-κB和p53 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.01),SLC7A11(P<0.05)和GPX4(P<0.01)mRNA及蛋白表达显著减少;与HS组相比,HS+TAK-242组TLR4(P<0.05)、NF-κB(P<0.05)和p53(P<0.01)mRNA及蛋白的表达减少,SLC7A11(P<0.05)和GPX4(P<0.01)的表达增加。与Control组相比,TAK-242组TNF-α、IL-6和IL-1β含量无显著性差异(P>0.05),HS组TNF-α、IL-6和IL-1β含量显著增加(P<0.001);与HS组相比,HS+TAK-242组TNF-α、IL-6和IL-1β含量明显减少(P<0.01)。与Control组相比,TAK-242组线粒体无明显改变,HS组线粒体变小,膜的密度增高;与HS组相比,HS+TAK-242组线粒体的形态结构较改善;与Control组相比,TAK-242组GSH、MDA、ROS和Fe~(2+)含量无显著性差异(P>0.05),HS组GSH含量明显减少(P<0.01),MDA、ROS和Fe~(2+)含量显著增多(P<0.01);HS+TAK-242组与HS组相比GSH(P<0.05)含量增加,MDA(P<0.01)、ROS和Fe~(2+)含量减少。(7)与Control组相比,PDTC组TLR4、NF-κB、p53、SLC7A11和GPX4 mRNA表达无显著性差异(P>0.05),HS组TLR4(P<0.05)、NF-κB(P<0.01)和p53(P<0.01)mRNA表达显著增加,SLC7A11和GPX4 mRNA表达显著减少(P<0.01);与HS组相比,与HS组相比,HS+PDTC组TLR4 mRNA表达无显著性差异,NF-κB和p53 mRNA表达减少,SLC7A11和GPX4mRNA表达增加(P<0.01),HS+TAK-242组TLR4(P<0.05)、NF-κB(P<0.01)和p53(P<0.01)mRNA表达水平减少,SLC7A11(P<0.05)和GPX4(P<0.05)mRNA表达水平增加;与Control组相比,PDTC组TNF-α、IL-6和IL-1β含量无显著性差异(P>0.05),HS组TNF-α、IL-6和IL-1β含量显著增加(P<0.001);与HS组相比,HS+PDTC组TNF-α、IL-6和IL-1β含量降低(P<0.01);HS+TAK-242组H9C2细胞对TNF-α、IL-6和IL-1β含量的影响与HS+PDTC组保持一致;与Control组相比,PDTC组GSH、MDA、ROS和Fe~(2+)含量无显著性差异(P>0.05),HS组GSH含量明显减少,MDA、ROS和Fe~(2+)含量显著增多(P<0.01);与chronic-infection interactionHS组相比,HS+PDTC组GSH含量增加,MDA、ROS和Fe~(2+)含量减少(P<0.01),HS+TAK-2selleck激酶抑制剂42组结果与HS+PDTC组保持一致(P<0.05)。结论高温干预可使大鼠心肌细胞形态异常且细胞活力下降;铁死亡抑制剂干预可改善高温干预导致的心肌细胞铁死亡;抑制TLR4/NF-κB信号通路可改善大鼠心肌细胞炎性环境及铁死亡,提示高温干预导致的心肌细胞损伤机制可能与TLR4/NF-κB炎性信号通路及p53/SLC7A11/GPX4铁死亡信号通路相关。

目的：探究妊娠期糖尿病(GDM)患者血清及胎盘组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)表达水平及与胰岛素抵抗关系。方法：以2022年1-12月本院收治的GDM产妇147例(GDM组)及健康产妇71例(对照组)为研究对象，检测两组血清及胎盘组织PI3K、P-AKT表达水平及血糖和胰岛素抵抗相关指标，分析血清及胎盘组织PI3K、P-AKT表达水平与胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性及对胰岛素抵抗发生的影响。graphene-based biosensors结果：GDM组血清PI3K(0.81±0.17pg/L)、P-AKT(0.64±0.15pg/L)水平及胎盘组织PI3K(1.09±0.23)、P-AKT(1.52±0.32)mRNA表达均高于对照组(0.34±0.06pg/L、0.30±0.07pg/L、0.54±0.10、0.67±0.13),Pear点击此处son相关分析显示，PI3K、P-AKT表达与HOMA-IR均呈正相关(均P<0.05)。logistic分析显示血清及胎盘组织PI3K、P-AKT表达异常升高是GDM患者出现胰岛素抵抗的危险CX-5461半抑制浓度因素(P<0.05)。结论：GDM患者血清及胎盘组织PI3K、P-AKT表达异常升高，且各指标异常升高是GDM患者出现胰岛素抵抗的危险因素。

目的:探究心肌细胞内不同水平的ROS与细胞死亡的关系,以及PGAM5在ROS诱导的不同细胞死亡中的作用及机制。方法:利用不同浓度的t-BHP干预H9c2不同时间,CCK8和流式细胞术检测细胞死亡率和细胞内ROS水平,建立H9c2细胞死亡模型。Seahorse X9细胞能量代谢仪检测H9c2细胞呼吸耗氧率、细胞外呼吸酸化率、实时ATP生成速率和检测线粒体呼吸功能相关指标。采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平;Western-Blot方法检测cleaved-caspase 3、caspase 1、cleaved-caspase 1、cleaved-GSDMD、RIP1、RIP3、Keap1、PGAM5的表达;Elisa方法检测MLKL、p-MLKL、GPX4、Fe~(2+)、AIFM1和p-AIFM1的表达;q RT-PCR法检测PGAM5m RNA的表达;免疫荧光法检测PGAM5的定位。构建PGAM5 si RNA干扰质粒,转染H9c2细胞,并在H9c2细胞中验证PGAM5 m RNA和蛋白质的表达变化。抑制PGAM5表达后,利用Western-Blot和Elisa方法观察了对细胞死亡标志物以及p-Drp1-S637和p-Drp1-S616表达的影响,并采用JC-1方法检测了细胞线粒体膜电位水平的变化。采用单因素方差分析的方法进行各组间比较。结果:(1)t-BHP干预浓度为0、50、75、100、125、150μmol/L和干预时间为2h可诱导细胞内ROS呈梯度性升高和细胞存活率梯度性降低,成功构建细胞死亡模型。(2)t-BHP干预诱导细胞线粒体氧化磷酸化耗氧率和糖酵解耗氧率呈下降趋势,线粒体呼吸功能各项指标显著降低;(0-125)μmol/L t-BHP干预后,细胞通过线粒体氧化磷酸化生成ATP的实时速率的比例显著升高,通过糖酵解生成ATP的比例显著降低,150μmol/L t-BHP干预后,通过线粒体氧化磷酸化和糖酵解生成ATP的速率无明显变化。(3)t-BHP从50μmol/L开始诱导细胞凋亡率逐渐升高,从100μmol/L开始诱导cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 1、cleaved-GSDMD、Fe~(2+)、LC3 II/I表达升高,p-MLKL、GPX4表达降低;t-BHP从125μmol/L开始诱导Keap1、PGAM5表达升高,p-AIFM1表达降低。(4)t-BHP<100μmol/L时,PGAM5 m RNA和总PGAM5的表达显著降低,t-BHP≥100μmol/L时,PGAM5 m RNA、总PGAM5和剪切型PGAM5的表达显著升高。t-BHP诱导细胞内ROS水平的升高导致PGAM5从线粒体向细胞质易位,线粒体向核周聚集。(5)抑制H9c2细胞中PGAM5的表达,显著逆转了100μmol/L t-BHP干预组中cleaved-caspase 3、LGK-974 IC50cleaved-GSDMD、RIP1、RIP3、Fe~(2+)、LC3 II/I的表达升高,和p-MLKL的表达降低。以及150μmol/L t-BHP干预组中Keap1的表达降低,和p-AIFM1的表达升高。(6)t-BHP≥100μmol/L时,可诱导H9c2细胞中p-selleck合成Drp1-S637的表达逐渐升高。抑制PGAM5的表达后,导致p-Drp1-S616的表达显著降低,MMP的水平显著升高。结论:(1)t-BHP干预可诱导H9cInfected total joint prosthetics2细胞内ROS水平升高。H9c2细胞内低水平的ROS即可诱导细胞凋亡的发生,中等水平的ROS开始诱导细胞焦亡、自噬、铁死亡和坏死性凋亡,而诱导氧死亡需要高水平的ROS。(2)随着细胞内ROS水平的升高,PGAM5逐渐从线粒体向细胞质易位,PGAM5 m RNA和总PGAM5蛋白的表达呈先降低再升高的趋势,中等水平的ROS可以诱导剪切型PGAM5蛋白表达升高。(3)PGAM5参与调控细胞内ROS诱导的细胞凋亡、焦亡、铁死亡、自噬和坏死性凋亡和氧死亡。(4)PGAM5通过影响Drp1-S616的磷酸化介导线粒体裂变,进而导致细胞死亡。

氧化应激的研究对理解动物生活史与生境之间的关系具有重要意义，动物的氧化应激与其代谢密切相关。为研究生境及冬眠对蜥蜴氧化应激及代谢的影响，本实验以高海拔山地分布的秦岭滑蜥(Scincella tsinlingensis)为对照，检测了低海拔荒漠分布的密点麻蜥(Eremias multiocellata)肝脏在非冬眠状态(夏季活动期)抗氧化物酶和代谢酶的基础酶活及糖原含量，并比较了密点麻蜥肝脏在夏季活动期(7月)、冬眠期(12月)和出眠期(4月)这些酶的活力及糖原含量变化，同时用q-PCR法检测了编码肝糖原合成酶(GYS2)、肝型糖原磷酸化酶(PYGL)以及黄嘌呤脱氢酶(XDHPLX5622溶解度)基因的表达。结果表明：与秦岭滑蜥相比，密点麻蜥的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物mucosal immune酶(GPX)、过氧化氢酶(CAT)及柠檬酸合酶(CS)活力较低，丙二醛(MDA)含量较高，肝糖原含量没有显著差异；冬眠期和夏季活动期密点麻蜥肝脏的SOD、GPX和CAT活力显著低于出眠期，冬眠期CS活力显著高于其他时期，冬眠期和出眠期MDAPS-341细胞培养含量显著低于夏季活动期；冬眠期和夏季活动期糖原含量显著高于出眠期；冬眠期GYS2、PYGL和XDH基因表达显著低于夏季活动期和出眠期；生活于低海拔荒漠地区的密点麻蜥较生活于高海拔山地的秦岭滑蜥具有更低的氧化代谢依赖；密点麻蜥氧化应激抗性和代谢表现出了季节性适应，出眠期而非冬眠期表现出的较高氧化应激水平可能与出眠期代谢恢复有关。本实验结果拓展了对蜥蜴氧化应激适应的认识。

椭圆叶花锚(Halenia elliptica D.Don)是治疗肝胆系统疾病的重要中藏药材之一,在青藏高原地区分布广泛。海拔作为一个重要的地形因子,对植物的生长具有重要影响,植物会对不同海拔环境产生适应性变化。研究椭圆叶花锚对海拔的适应机制,可为椭圆叶花锚最佳适宜分布区提供理论参考。本研究以不同海拔椭圆叶花锚为实验材料,通过转录组学和代谢组学联合分析,揭示椭圆叶花锚应对海拔梯度变化的关键代谢通Flow Cytometers路,主要结果如下:1.利用转录组学分析方法研究海拔对椭圆叶花锚基因表达的影响,经转录测序组装共获得279 190条Unigene,共有179 960条获得功能注释。注释到Nr数据库的Unigene有178 480条;注释到KEGG数据库的Unigene有87 377条;注释到GO数据库29 201条。在不同海拔对比中,HM-1 v HM-2显著差异基因共计47条,上调基因36条、下调基因11条;HM-1 v HM-3显著差异基因共计448条,上调基因263条、下调基因185条。研究结果表明海拔梯度对椭圆叶花锚基因表达量具有显著影响,不同海拔梯度间差异基因数量存在显著差异。经KEGG富集分析发现,差异基因主要富集在内质网蛋白加工、长寿调节途径、细胞凋亡、黑色素生成等代谢通路中。2.利用非靶向代谢组学方法研究不同海拔梯度下椭圆叶花锚代谢物的变化,结果表明,在4个样点共6组对比中,检测到共有代谢物149个,其中正离子模式下70个,负寻找更多离子模式下79个。对差异代谢物进行KEGG富集分析发现,差异代谢产物主要富集在类黄酮生物合成、苯丙烷生物合成、黄酮和黄酮醇的生物合成、柠檬酸循环、色氨酸代谢等通路中。3.转录组学和代谢组学联合分析结果表明,基因表达及代谢物共同富集的代谢通路共15个,其中显著富集的有苯丙烷类生物合成代谢、氨基酸代谢、核苷酸代谢、糖类物质代谢等通路。通过分析发现,苯丙烷类生物合成途径与椭圆叶花锚抗氧化活性及生长发育有关;氨基酸代谢途径通过提高椭圆叶花锚呼吸作用selleck FUT-175和生长素含量来应对高海拔低温低氧环境;糖类物质代谢途径为椭圆叶花锚在高海拔环境中提供能量;核苷酸代谢途径与椭圆叶花锚应对强辐射及低温胁迫相关。这些是椭圆叶花锚应对不同海拔高度环境变化的主要生理调节机制。

【背景】急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是常见的临床急危重症,常继发于脓毒症,导致机体严重的肺部感染和细胞的死亡。研究表明铁死亡参与脓毒症诱导的急性肺损伤。目前急性肺损伤仍缺乏确切的治疗手段。间充质干细胞治疗作为一种新型的治疗方法,已得到广泛的研究,但是在应用到临床时其疗效仍有待提高。对间充质干细胞进行基因编辑是一种提高其治疗效果的有效手段。而TSG-6是间充质干细胞发挥治疗作用的重要旁分泌物质。本研究探讨应用过表达TSG-6基因质粒载体包装的慢病毒侵染的人脐带间充质干细胞对脓毒症诱导的急性肺损伤小鼠的治疗作用以及与铁死亡的相关性。【实验目的】探究过表达TSG-6基因的h UCMSCs对CLP诱导的小鼠急性肺损伤模型的治疗作用及与铁死亡的相关性。【实验方法】(1)人原代脐带间充质干细胞获赠于博品(上海)生物医药科技有限公司,在专用的h UCMSCs培养基中培养,定期于显微镜下观察,细胞持续生长直至融合达80-90%,传代至第3代时取部分h UCMSCs进行流selleck GSK J4式分析,检测与鉴定其表面标志物CD34、CD73、CD90及CD105的表达。(2)构建过表达TSG-6基因的h UCMSCs:慢病毒过表达载体FUW-tet O-lox P-h NANOG经过酶切电泳鉴定后,与扩增得到TSG-6基因的CDS序列通过同源重组构建FUW-tet O-lox P-h TSG-6慢病毒表达载体。载体经双酶切鉴定及测序验证成功后,使用三质粒包装系统将重组质粒FUW-tet O-lox P-h TSG-6与慢病毒辅助包装p MD2.G、ps PAX2和FUW-M2rt TA共转染293T细胞。收集慢病毒并感染h UCMSCs,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测目的基因在h UCMSCs中的表达。(3)构建小鼠急性肺损伤动物疾病模型:将80只C57BL/6小鼠随机分为4组,分别为假手术组、CLP模型组、CLP+MSCs、CLP+TSG-6-MSCs治疗组,模型构建成功后4小时通过尾静脉注射给药的方式将PBS、MSCs、TSG-6+MSCs按不同分组情况注入小鼠体内,造模后密切观察小鼠的一般情况,于模型成功后24h麻醉小鼠并收集小鼠血浆、肺泡灌洗液及肺组织等样品。(4)通过称量及计算肺组织干-湿重量比、血浆及肺泡灌洗液炎症因子ELISA检测、肺组织HE染色及绘制小鼠生存曲线,明确肺部病变情况,确定造模成功,同时分析MSCs是否对ALI起到治疗作用,并且过表达-TSG-6 h UCMSCs是否在原有基础上提高了MSCs对ALI的治疗能力。(5)选取各组小鼠右肺组织行蛋白免疫印迹法和RT-qPCR检测铁死亡相关指标GPX4、SLC7A11分子表达情况,平行检测肺组织GSH、MDA的含量。【结果】(1)在倒置显微镜下观察,可见h UCMSCs贴壁生长,形态均一且为梭形,细胞呈旋涡状生长,随着培养时间增加细胞呈类纤维细胞样并趋于融合。流式分析表面标志性分子CD34低表达(<0.5%),CD73、CD90、CD105均为特异性表达(分别为96.64%、99.244%、95.87%),说明收集到的间充质干细胞符合鉴定标准;可用其继续完成后续实验。(2)成功构建了FUW-tet O-lox P-h TSG-6慢病毒过表达载体,病毒感染h UCMSCs后RT-q PCR检测到稳定、过表达目的基因。(3)小鼠体内实验中,对比各组HE染色情况可发现,对照组肺泡壁未见增厚、肺泡之间的间隔无充血、增宽,也未见炎性渗出;而疾病模型组肺泡壁所含毛细血管扩张严重,肺泡壁充血,肺泡及肺泡壁内大量炎性细胞浸润,两组MSCs治疗组情况介于对照组和急性肺损伤组之间,并且过表达-TSG-6组治疗效果要优于单纯的MSCs治疗组。与对照组相比,ALI模型组小鼠的肺组织病理切片损伤评分明显增高,而单纯的MSCs治疗组和TSG-6-MSCs治疗组的评分均较ALI模型组有明显降低的趋势,组间差异具有统计学意义(p<0.05),并且TSG-6-MSCs治疗组的评分较MSCs治疗组更低(p<0.05)。(4)对比不同分组的肺组织干-湿比同样可以发现,ALI疾病模型组wet-dry比值明显升高(p<0.05),单纯MSCs治疗组次之(p<0.05),但TSG-6-MSCs治疗组改善最为明显(p<0.05)。(5)对各组血浆和肺泡灌洗液的炎症因子检测结果对比可见,模型组小鼠体内炎症因子IL-6、TNF-α、IL-10的表达水平明显升高,说明盲肠结扎穿孔术成功导致了小鼠体内出现脓毒症,并且出现了急性肺损伤;通过注射MSCs治疗后,小鼠全身及肺部的促炎因子表达水平下降,而TSG-6-MSCs组和MSCs组相比,能更大程度地降低促炎因子的表达,提高抑炎因子IL-10的水平(p<0.05)。(6)生存曲线对比:造模后4-6小时即可观察到模型组小鼠出现畏寒、震颤,抱团取暖等表现,同时双眼、肛门排泄物增多,毛发杂乱,随着时间增加,出现呼吸急促、活动迟Dolutegravir小鼠缓甚至死亡等情况。MSCs的治疗延长了小鼠的生存时间,当MSCs过表达TSG-6后,小鼠的生存率得到提高。(7)分析不同组别肺组织的蛋白免疫印迹、RT-qPCR、免疫荧光染色及GSH、MDA含量检测,发现在CLP模型小鼠中,铁死亡核心蛋白GPX4及SCL7A11表达下调、肺组织谷胱甘肽含量减少、氧化应激产物MDA水平上升,说明在该模型中,肺组织损伤后出现细胞铁死亡;而MSCs注射后铁死亡核心蛋白GPX4及SCL7A11表达上调,GSH含量增加,MDA含量下降;过表达TSG-6可进一步改善铁死亡指标,数据均具有统计学差异(p<0.05)。【结论】(1)实验成功构建了CLP小鼠肺损伤模型Cytogenetics and Molecular Genetics及过表达TSG-6-h UCMSCs。(2)实验结果表明过表达TSG-6的h UCMSCs可加强其免疫调节能力,进一步改善CLP诱导的急性肺损伤;(3)CLP诱导的急性肺损伤存在铁死亡,h UCMSCs可能通过改善小鼠体内炎症水平间接减轻了肺组织铁死亡水平且与GPX4-SL7A11相关,可进一步探索两者之间的具体机制。

目的 探讨恶性肿瘤放化疗中心静脉导管置管Medical extract患者血清肝素结合蛋白(HBP)、肾上腺髓质素前体(proADM)在血流感染监测中的价值。方法 选取2019年1月—2021年1月南通大学附属海安市人民医院恶性肿瘤放化疗治疗中心静脉导管置管后发生血流感染患者52例纳入感染组,未发生血流感染患者selleck Dolutegravir30例纳入未感染组,并将感染组患者依照其28 d内生存点击此处情况分为生存组37例、死亡组15例,比较不同组别血清HBP、pro-ADM表达水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线评估血清指标对疾病预后的评估价值。结果 感染组血清HBP、pro-ADM水平高于未感染组(P<0.05);革兰阴性菌感染患者血清HBP水平高于革兰阳性菌感染患者(P<0.05);死亡组感染发生后第1天、第3天、第5天血清HBP、pro-ADM表达水平均高于生存组(P<0.05);感染发生后第3天、第5天血清HBP、pro-ADM联合预测患者预后状态ROC曲线下面积分别为0.840、0.852高于第1天的0.744(P<0.05)。结论 恶性肿瘤放化疗中心静脉导管置管发生血流感染患者血清HBP、pro-ADM水平升高,其动态监测对于患者预后评估具有重要价值。

研究背景:胃癌作为我国最为常见的消化系统恶性肿瘤之一,其死亡率与发病率一直高居前列,全球有将近一半的胃癌患者在中国。近年来虽然诊疗技术取得较大进步,但是由于胃癌本身的高度异质性以及个体差异导致很多患者的预后仍然不容乐观。铁死亡(Ferroptosis)在2012年才被正式命名的,是区别于传统的细胞自噬、细胞焦亡、细胞坏死和细胞凋亡的一种新型细胞程序性死亡方式。铁死亡的本质是细胞内氧化还原状态失衡,发生铁超载、脂质活性氧(Lipid reactive oxygen species,Lipid ROS)积累,线粒体皱缩破裂,最终诱发细胞死亡。当前,诱导肿瘤细胞发生铁死亡已被证实在癌症治疗方面具有非常巨大的潜力。索拉非尼(Sorafenib)是一种酪氨酸激酶抑制剂,临床上主要用于晚期肝癌的靶向治疗。同时,其作为铁死亡诱导剂也被很多文献报道在包括胃癌在内的多种肿瘤中发挥抑癌作用。然而,最近索拉非尼作为铁死亡诱导剂的地位受到质疑。目前,索拉非尼在胃癌中涉及到铁死亡的研究较少,索拉非尼能否诱导胃癌细胞发生铁死亡仍有待明确。激活转录因子家族多个成员被证实在铁死亡的调控中发挥重要作用,但有关激活转录因子2(Activation transcription factor 2,ATF2)的研究仅有一篇,且ATF2在索拉非尼诱导的铁死亡中的具体作用及相关机制也暂未见报道。因此,本课题旨在探索ATF2在索拉非尼诱导的胃癌细胞铁死亡中的作用以及下游的具体分子调控机制,从而为胃癌的临床治疗提供新策略。方法:在第一部分中,首先利用免疫组化和Western blot检测ATF2在胃癌细胞及组织中的蛋白表达情况,并进一步分析ATF2的表达水平与胃癌患者临床病理参数及术后总生存期的关系。紧接着利用慢病毒对ATF2进行稳定过表达或敲低,通过CCK-8实验,Transwell迁移及侵袭实验来评估其表达水平对胃癌细胞增殖,迁移和侵袭能力的影响。在第二部分中,我们将细胞分为3组,即DMSO对照组,索拉非尼加药组和索拉非尼+Ferrostatin-1共同加药组,分别处理AGS和MGC803细胞24小时,然后在显微镜下观察细胞形态变化。通过检测细胞内总ROS、脂质ROS、MDA以及GSH含量来评估胃癌细胞的铁死亡水平。利用透射电镜观察索拉非尼处理后胃癌细胞线粒体微观结构的变化情况。紧接着通过Western blot及免疫荧光染色检测索拉非尼处理胃癌细胞后ATF2的表达情况。最后,调控ATF2表达水平后检测其对索拉非尼处理胃癌细胞后铁死亡相关指标的影响。在第三部分中,首先通过联合转录组测序(RNA-seq)和染色质免疫共沉淀测Tamoxifen小鼠序(Ch IP-seq)来鉴定ATF2的全基因组DNA结合位点以及潜在的转录靶点,并进一periodontal infection步通过Ch IP-q PCR进行验证。然后,利用免疫共沉淀(Co-ImmuRSL3分子量noprecipitation,Co-IP)实验来检测ATF2下游靶基因与铁死亡关键分子SLC7A11之间的相互作用。利用si RNA敲低靶基因的表达,检测SLC7A11的蛋白稳定性以及胃癌细胞铁死亡相关指标的变化情况。在第四部分中,将裸鼠随机分为四组:sh-Ctrl对照组、sh-ATF2组、sh-Ctrl?+索拉非尼加药处理组和sh-ATF2?+?索拉非尼加药处理组,通过建立裸鼠皮下异种移植瘤模型,在动物水平上评估敲低ATF2表达以及与索拉非尼联合使用对胃癌生长的影响。结果:我们发现ATF2在胃癌细胞和组织中异常高表达,并与淋巴结转移(P=0.003)和TNM分期(P=0.034)显著相关。高表达ATF2的患者的预后明显劣于低表达的患者(Logrank P=0.011),ATF2表达水平是胃癌患者的独立预后因素。敲低胃癌细胞中ATF2的表达水平可以显著抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。索拉非尼可以诱导胃癌细胞发生铁死亡,同时在此过程中还伴随着ATF2的激活。敲低ATF2可促进索拉非尼诱导的胃癌细胞铁死亡水平,而过表达ATF2则显示出相反的结果。在机制上,通过RNA-Seq和Ch IP-Seq,我们发现HSPH1可能是ATF2下游的靶基因,并通过Ch IP-q PCR进行了验证。HSPH1与SLC7A11存在互作关系,并可以通过提高SLC7A11的蛋白稳定性来促进其表达。此外,HSPH1表达的敲低部分逆转了ATF2过表达对索拉非尼诱导的胃癌细胞铁死亡的效应。最后,裸鼠皮下异种移植瘤模型的结果表明敲低ATF2表达联合索拉非尼治疗对胃癌生长的抑制效果最好,敲低ATF2表达能有效提高胃癌对索拉非尼的敏感性。结论:敲低ATF2表达可显著促进索拉非尼诱导的胃癌细胞铁死亡,并增强索拉非尼在体外和体内对胃癌的抑制作用。

为探索一品红(Euphorbia pulcherrima)苞片发育过程中类黄酮合成代谢相关基因的表达变化情况，本研究对一品红苞片的不同发育时期与成熟叶片的mRNA进行高通量测序，共获得高质量unigene254 713个，其中长度在800～1 000 bp的unigene为19 064个，1 000～1 200 bp的unigene有13 319个。在一品红苞片花青素合成的关键时期Ⅰ和Ⅱ共筛选差异表达基因5 029个，差异基因主要参与次生代谢合成相关的途径，包括类黄酮合成代谢途径、苯丙氨酸代谢途径；进一步对一品红苞片不同发育时期差异基因的GO功能富集分析发现，差异基因参与的主要生物过程涉及线粒体能量代谢、高尔基体物质运输、次生代谢物合成、糖酵解、光合作用等。KEGG富集分析发现，4个时期的差异基因主要共同富集到植物次生代LY294002谢合成(花青素物质合成)，植物激素信号转导、蛋白质磷酸化、糖酵解、莽草酸途径、二芳基庚酸类和姜酚合成路径等。另外，在一品红苞片发育的4个时期共统计到10 828个简单重复序列标记(simple sequence repeats, SSR)，丰富度最高为单核苷酸，占所有SSR的58.07%，其次为三核苷酸和二核苷酸，分别占总SSR的27.02%和13.36%。综合以上结果，本genetic differentiation研究通过分析一品红苞片叶色转变过程中差异基因表达及差异NN2211代谢途径，为更好地了解一品红苞片物质代谢和基因表达调控机制提供了重要的依据。