脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)是一种小型的非包膜单链RNA病毒,可以通过多种途Elexacaftor生产商径感染人和动物,严重影响公共卫生安全。脑心肌炎目前尚无相应治疗措施,消灭传染源和阻断传播途径是有效预防措施。EMCV感染机制仍尚未研究清楚。发动蛋白Dynamin(Dyn)参与多种病毒感染过程,主要在病毒通过内吞途径进入细胞的过程中发挥作用,本课题组前期研究提示Dynamin与EMCV感染相关,但其具体机制尚不明确。而Rab5和Rab7在内吞途径中发挥作用,因此本研究以Dynamin、Rab5蛋白、Rab7蛋白为研究对象,运用Dynamin特异性抑制剂Dynasore、小干扰RNA、慢病毒包装构建稳定表达Dynamin细胞系、IFA共定位、WB和q RT-PCR等方法比较全面检测分析了三种关键蛋白在EMCV感染HeLa细胞中的作用,并对其机制进行了初步研究,获得以下研究结果:1.Dynamin特异性抑制剂Dynasore处理HeLa细胞后感染EMCV,WB、q RT-PCR以及病毒拷贝数表明Dynasore抑制EMCV感染HeLa细胞,提示Dynamin在EMCV感染HeLa过程中发挥作用,主要作用于病毒感染后1-3h。2.WB、access to oncological servicesq RT-PCR以及细胞活力检测结果提示,成功构建稳定表达Dynamin的HeLa-Dyn2细胞系。3.转铁蛋白摄取试验证明Dynamin参与HeLa细胞的内吞过程,Dynamin蛋白功能突变体转AZD1152-HQPA细胞培养染后,HeLa细胞的内吞途径被抑制,同时EMCV感染也被抑制,提示EMCV可通过Dynamin参与的内吞途径感染HeLa细胞。4.通过稳定上调和瞬时下调HeLa细胞中Dynamin表达后进行EMCV感染,结果提示Dynamin上调显著增加EMCV在HeLa细胞中的复制增殖,反之,Dynamin下调显著抑制EMCV感染HeLa细胞。提示Dynamin正向调控EMCV感染HeLa细胞。5.由于内吞途径与病毒感染细胞的吸附和侵入过程密切相关,因此本试验探索了Dynamin是否参与EMCV的吸附侵入。结果提示,Dynamin表达量与病毒的侵入呈正相关,但吸附不受影响。6.共定位试验结果提示,EMCV VP1蛋白与早期内体标志物EEA1存在共定位,但与晚期内体标志物LAMP1不存在共定位,提示早期内体与EMCV感染关系密切,早期内体中Rab5蛋白是关键蛋白,因此,本试验进一步验证了Rab5在EMCV感染中的作用。结果提示,Rab5负向调控EMCV感染HeLa细胞。7.为了进一步确定EMCV的感染过程与晚期内体无关,晚期内体中Rab7蛋白是关键蛋白,本试验进一步验证了Rab7在EMCV感染中的作用。结果提示,Rab7不参与EMCV感染HeLa细胞,但会通过影响Rab5蛋白表达量间接抑制EMCV感染HeLa细胞。上述研究结果为进一步研究EMCV病毒感染宿主细胞分子机制提供了基础材料,也为其的潜在靶点和将来抗病毒药物研制发提供了思路和方法。