目的:胆管癌(Cholangiocarcinoma,CCA)是一种高度恶性的胆管肿瘤,近年来,其发病率不断增加并且预后较差。因此本项目研究探讨了黏附G蛋白偶联受体E2(adhesion G protein-coupled receptor E2,ADGRE2),也称为EMR2,对肝外胆管癌的生物学行为的影响及其内在机制。方法:(1)通过TIMER网站查询EMR2在TCGA数据库中的表达情况(2)收集了40例肝外胆管癌患者石蜡标本,进行免疫组化实验验证EMR2在人体组织中的表达差异。并对这些标本进行COX分析以及Kaplan-Meier分析观察EMR2对肝外胆管癌患者预后的影响。(3)使用HIBEpic、QBC939以及KMBC、SK-CHA-1细胞通过Western blot实验和q RT-PCR实验验证了EMR2在人正常胆管上皮细胞和肝外胆管细胞中的表达差异。(4)使用靶向si RNA敲低EMR2在细胞QBC939中的表达,利用pc DNA3.1质粒在KMBC细胞中过表达EMR2。通过蛋白免疫印迹实验以及荧光定量PCR实验验证敲低、过表达的效率。(5)人为影响EMColonic MicrobiotaR2在QBC939细胞以及KMBC细胞中的表达量后,通过Western blot实验探究在EMT进程中,EMR2对N-cadherin、Vimentin、E-cadherin相对蛋白表达水平的影响。(6)转染si-EMR2、si-NC以及oe-EMR2质粒、pc DNA3.1质粒后,使用CCCK-8试剂检测EMR2对Roxadustat试剂肝外胆管癌细胞增殖能力的影响。(7)划痕实验以及Transwell迁移实验检测EMR2在QBC939细胞以及KMBC细胞中迁移能力的改变。(8)检PLX3397小鼠测EMR2对肝外胆管细胞侵袭能力的影响使用了Transwell侵袭实验。结果:(1)TCGA数据库显示,EMR2在胆管癌中高表达。(P<0.0001)(2)通过对石蜡切片定量分析得到EMR2在人肝外胆管癌组织中高于人正常组织,其中在70%的肝外胆管癌组织中EMR2高表达,而癌旁组织内仅有32.5%(P<0.01)。采用COX和Kaplan-Meier方法分析出EMR2的表达与患者组织分化程度有关(P<0.05)。我们证明了EMR2表达增加与肝外胆管癌患者生存率差之间的关联(p<0.05)。肝外胆管癌患者的病理分化程度和EMR2表达水平能够独立对其生存预后造成影响。(3)肝外胆管癌细胞QBC939、SK-CHA-1中EMR2的表达水平显著高于正常胆管上皮细胞HIBEpic。(4)在划痕实验和Transwell迁移实验中,EMR2的高表达促进了肝外胆管癌细胞的迁移能力。(5)CCK8实验中,敲低EMR2表达的QBC939细胞增殖能力减弱,EMR2表达升高的KMBC细胞增殖能力明显得到了增加。(6)EMR2被敲低后降低了N-cadherin相对蛋白表达(0.47±0.11),同时Vimentin蛋白的相对表达水平也被减弱(0.55±0.08),但Ecadherin蛋白明显增加了其相对表达量(1.69±0.21)。结论:EMR2的表达与EHCC的分化程度以及生存预后相关,EMR2表达量和分化程度是独立影响EHCC生存预后的因素。EMR2的高表达能够促使EHCC细胞的侵袭、迁移能力增加,其机制可能与上皮间质的转化有关。