目的:长链非编码RNA(LncRNAs)与心肌肥大的发生机制密切相关。N~6-甲基腺苷(m~6A)修饰是RNA修饰中丰度最高的类型,在心肌肥大的发生过程中起着重要作用。然而,LncRNA通过m~6A修饰在心肌肥大方面尚未见报道,有待阐明。研究方法:第一部分:1.采用血管紧张素2(AngⅡ)建立H9c2心肌肥大模型:通过RT-q PCR、Western blot检测相关基因表达水平。2.分别应用si MIAT和MIAT质粒转染H9c2、si Ythdf2和Ythdf2质粒转染H9c2:通过RT-q PCR,Western blot,细胞免疫荧光实验,来检测改变MIAT或Ythdf2表达水平对心肌肥大表型的影响。第二部分:1.通过生物信息学预测MIAT和Ythdf2是否存在相互作用,以及可能的结合位点。RIP-q PCR、RNA pull down检测MIAT是否与Ythdf2结合;Western blot检测MIAT是否可以调控Ythdf2的表达;2.通过生物信息学预测Ythdf2和CPT-1a是否存在相互作用;免疫共沉淀证明Yselleck化学thdf2和CPT-1a是否存在相互作用;通过荧光原位杂交和细胞免疫荧光观察MIAT、Ythdf2和CPT-1a的共定位。3.通过过表达(敲减)MIAT的同时敲减(过表达)Ythdf2等回复实验,探究MIAT对Ythdf2的调控关系:RT-q PCR,Western blot,细胞免疫荧光实验,检测其对表型的影响。利用放线菌素/RT-q PCR,计算CPT-1a m RNA寿命,测定CPT-1a m RNA稳定性。结果:第一部分:1.在AngⅡ的刺激下,H9c2细胞面积明显增大,ANP、BNP、β-MHC的m RNA和蛋白表达水平明显升高。MIAT和Ythdf2的表达水平显著增高。2.在AngⅡ诱导的心肌肥大细胞模型中敲减MIAT或Ythdf2,均能够抑制ANP、BNP与β-MHC的m RNA和蛋白表达,缩小细胞面积,提示敲减MIAT或Ythdf2能够抑制AngⅡ促心肌肥大的作用。相反,过表达MIAT或Ythdf2能够促进AngⅡ促心肌肥大的作用。第二部分:1.通过WGCNA分析发现MIAT和Y更多thdf2之间存在相互作用,RIsearch预测了具体的结合位点;RIP-q PCR和RNA pull down证实MIAT结合Ythdf2;Western blot发现MIAT可以正相关地调控Ythdf2的表达。2.通过WGCNA分析发现CPT-1a是Ythdf2可能调节的靶基因;免疫共沉淀证明Ythdf2和CPT-1a结合;荧光原位杂交和细胞免疫荧光观察MIAT、Ythdf2和CPT-1a共定位于细胞质。3Primary mediastinal B-cell lymphoma.双干预MIAT和Ythdf2,挽救了单干预MIAT对H9c2心肌细胞肥大的影响。证明MIAT可通过Ythdf2调控心肌肥大的表型和下游靶基因PPAR,CPT-1a的表达。结论:LncRNA MIAT、m~6A甲基化阅读蛋白Ythdf2参与AngⅡ诱导的心肌肥大。MIAT可以特异性结合Ythdf2,提高了m~6A修饰水平,降低其靶基因PPAR和CPT-1a m RNA稳定性和表达,从而促进心肌肥大。这些发现证实了LncRNA MIAT-Ythdf2-PPAR-CPT-1a调控途径在心肌肥大中的关键作用。