Jak信号通路

目的 分析前列疏通汤联合非那雄胺治疗良性前列腺增生（BPH）的临床疗效及对前列腺特异性抗原（PSA）的影响。方法 以2021年3月-2022年3月天津市宝坻区人民医院泌尿外科收治的80例BPH患者为研究对象，按照随机数字表法分为对照组（40例）与观察组（40例）。对照组给予非那雄胺治疗，观察组在Emricasan此基础上联合前列疏通汤治疗，比较两组临床疗效、前列腺体积、血清PSA水平、尿动力学水平[排尿总量、最大尿流率（MFR）、平均尿流率（AFR）]、国际前列腺症状评分（I-PSS）、生活质量量表评分（QOL）及不良反应。结果 观察组治疗总有效率高于对照组（P<0.05）；两组治疗后前列腺体积、PSA水平小于治疗前，且观察组前列腺体积、PSA水平小于对照组（P<0.05）；两组治疗后排尿总量、MFR、AFR均大于治疗AZD1152-HQPA说明书前，且观察组排尿总量、MFR、AFR均大于对照组（P<0.05）；两组治疗后I-PSS评分低于治疗前，QOL评分高于治疗前，且观察组I-PSS评分低于对照组，QOL评分高于对照组（P<0.05）；两组不良反应发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 前列疏通汤联合非那雄胺在BPH治疗中疗效确切，可缩小患者前列腺体积，降低其血清PSA水平，改善尿流动力学水平，促使症状缓解Brazilian biomes，提高生活质量，用药安全性良好。

小麦赤霉病是影响小麦产量与粮食安全的重大真菌病害之一，其主要致病菌为禾谷镰孢(FusarBiogeochemical cycleium graminearum)。染色质缩合调节因子(RCC1)作为一种核蛋白，能促进Ran结合的GDP/GTP转换，在染色质缩合起始、核质转运和有丝分裂过程中起关键作用，但其在丝状真菌中的功能尚未见报道。本研究通过基因敲除的方法，获得了禾谷镰孢中基因FgRCC1的敲除突变体ΔFgRCC1和互补菌株ΔFgRCC1-C。通过表Torin 1价格型测定分析，发现敲除突变体ΔFgRCC1的生长速率较野生型菌株PH-1和ΔFgRCC1-C降低约8.5%,且菌丝分枝变多。敲除突变体ΔFgRCC1的分生孢子产量降低约8.8%,并且隔膜数在4https://www.selleck.cn/products/smoothened-agonist-sag-hcl.html和5个的分生孢子比例明显增多。此外，敲除突变体ΔFgRCC1对杀菌剂戊唑醇变得敏感，而对多菌灵、刚果红、SDS、KCl、CaCl_2、MgCl_2的抗性增强。致病性测定发现，ΔFgRCC1在小麦上的致病力下降，并且其体内毒素体形成受阻，DON毒素生物合成显著减少，7种TRIs转录水平显著降低。研究结果表明，染色质缩合调节因子FgRCC1在禾谷镰孢菌丝生长、参与逆境胁迫以及致病和产毒过程中有重要作用。

由于电子产品的不断普及和不健康的用眼习惯,眼科疾病的患者数量不断攀升,其中糖尿病视网膜病变、青光眼、白内障、年龄相关性黄斑病变、高血压和高度近视等六种眼底病变是引起眼科疾病的主因,当前眼科疾病的筛查主要依靠专业医生人工诊断,耗时耗力且诊断成功率低,而智能辅助诊断系统大多专注于检测单一的眼科疾病,因此本文针对视网膜眼底多种疾病的分类问题,综合考虑眼底图像的复杂性和眼底血管结构的重要性,提出了一种眼底多疾病联合诊断算法,可同时对视网膜眼底六种疾病进行识别分类,并取得较好效果,优化眼底疾病筛查流程,有效提升诊断效率、降低诊断成本。本文主要包含以下内容:(1)完成视网膜眼底图像的数据集整理分析和图像处理。汇总和整理收集得到的多个数据集,并对其进行规范化和统一化处理,清除异常图像并剔除干扰标签;进行数据类别不平衡处理,运https://www.selleck.cn/products/Lapatinib-Ditosylate.html用数据增强、重采样、类别权重调整等方法扩充数据集中少数样本数量;进行眼底图像预处理,以去除图像冗余、放大病症细节特征、增强图像的视觉效果和识别性能。(2)完成视网膜眼底图像血管结构分割。设计了两种眼底图像血管分割方法,分别是运用滤波器滤波、形态学处理和阈值分割的基于形态学处理的眼底图像血管分割方法,和向标准U-Net模型添加双向卷积长短记忆网络模块、密集连接卷积模块、BN模块和注意HER2 immunohistochemistry力机制的基于深度学习的眼底图像血管分割方法(BCL-Net模型);并实验证明BCL-Net模型相较传统算法和标准U-Net模型准确率分别提升11.87%和1.56%。(3)完成视网膜眼底图像六疾病联合诊断。提出了基于四通道多任务学习的多病症联合诊断算法(FCML算法),融入了四通道输入、多任务学习和多模型融合模块,并添加注意力机制、双目监督学习和模型随机化等优化策略改善算法性能。综确认细节合多个评价指标并选定VGG-16、Inception-V3、Res Net-50、Efficient Net-B4作为后续算法的基础模型;设计算法消融实验,证明模型优化策略的有效性和眼底血管结构的重要辅助作用,其中添加SE模块后二分类模型准确率从83.45%提升到90.31%,添加不同模型优化策略后FCML算法准确率分别提升1.11%和1.71%,而去除血管图像输入后算法准确率下降5.21%;设计算法对比实验,证明本算法已达到与ODIR竞赛一流模型相当水平,并在准确率、灵敏度等指标超过同类模型。

背景:脑胶质瘤是原发性脑恶性肿瘤中发病率最高,治疗最为棘手的疾病。传统的放化疗难以凑效,因此,迫切需要寻找新的治疗方式来改善胶质瘤患者的预后。分子靶向治疗是一种很有前景的治疗方式,但是其高度依赖准确的分子标志物检测和精准的分子分型。迄今为止,尽管多种分子标志物在胶质瘤中被陆续发现,但是由于胶质瘤的高度异质性,仍然需要持续不断的寻找新的分子标志物用于分子分型、预后预测或开发新的靶点。平足蛋白(Podoplanin,PDPN)是一种跨膜黏液型糖蛋白,在肾小球足细胞表面特征性表达,与维持足细胞胞体足突的正常形态有关,在肾小球基底膜的完整性维持和保障正常的肾小球通透性中发挥着重要的寻找更多生理功能。最近研究发现,PDPN同时也在多种恶性肿瘤中异常表达,并且和恶性肿瘤的淋巴结转移及不良预后有关,有作为肿瘤分子标志物的潜在价值。然而,PDPN在胶质瘤组织中的表达特征、和临床病理参数及其与患者生存时间的相关性尚未在组织标本中得到验证;其在脑胶质瘤发生发展中的分子机制、生物学特性及其功能尚未被完全了解。基于以上背景,本研究目的在于探讨以下几个问题:第一,PDPN在胶质瘤中的表达特征及其与临床预后的相关性分析;第二,PDPN在传统组织学分型和2021年第五版世界卫生组织中枢神经系统肿瘤分类(the fifth edition of the WHO Classification of Tumors Belumosudil molecular weightof the Central Nervous System,WHO CNSimmediate early gene5)中的预后预测价值;第三,探索PDPN在胶质瘤发生发展中的生物学功能和可能参与的信号通路。方法:本研究收集了2009年—2016年间安徽医科大学第二附属医院和中国医学科学院肿瘤医院手术治疗的脑胶质瘤标本227例,其中22例有匹配的非肿瘤脑组织。应用免疫组化技术,检测了组织样本中PDPN、IDH、ATRX和p53的表达情况。应用Sanger测序技术检测了组织样本中TERT启动子突变发生情况。采用χ~2检验分析PDPN和IDH、TERT、ATRX、p53、性别、年龄、Karnofsky功能状态评分(Karnofsky performance status,KPS评分)和WHO分级等临床病理参数之间的相关性。按照WHO CNS5分类标准采用IDH、TERT启动子突变和ATRX三个标志物将227例胶质瘤分为IDH突变型星形细胞瘤、IDH野生型胶质母细胞瘤、少突胶质细胞瘤和IDH野生型星形细胞瘤四组。然后,采用Kaplan-Meier法分析了PDPN在传统组织学分类和WHO CNS5分子分型中的预后预测价值。最后,利用Cox回归单因素和多因素分析探索了影响胶质瘤患者预后的主要因素。在功能实验中,我们构建了瞬时敲减PDPN的U87MG和U118MG细胞系,利用CCK-8技术检测了PDPN对胶质瘤细胞增殖能力的影响;利用Transwell体外迁移和侵袭实验,检测了PDPN对胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。在动物体内实验中,我们构建了稳定敲减PDPN的U87MG细胞系,应用裸鼠皮下成瘤实验,检测了PDPN对裸鼠皮下成瘤能力的影响。在机制研究中,首先采用GO分析和KEGG分析预测了PDPN的生物学功能和可能参与的信号转导通路。然后,通过敲减PDPN,利用Western blot技术检测了U87MG和U118MG细胞中下游分子的变化情况。最后,采用Akt/mTOR通路激动剂SC79联合PDPN敲减来观察U87MG和U118MG的细胞活力、迁移和侵袭能力,从而探索PDPN可能参与的信号通路。结果:PDPN表达在227例胶质瘤组织中的阳性率为44.9%(WHO 2级28.1%,WHO 3级32.4%,WHO 4级55.1%),在22例配对的非肿瘤脑组织中未检测到阳性表达,PDPN表达阳性率在胶质瘤和非肿瘤脑组织之间具有统计学差异(p<0.001)。PDPN高表达与患者发病年龄(p<0.001)和WHO分级(p=0.001)呈正相关,与性别(p=0.802)和KPS评分(p=0.754)等临床病理参数无明显相关性。此外,PDPN高表达与IDH野生型状态和TERT启动子突变状态呈正相关(p<0.001),与1p/19q联合缺失和ATRX缺失状态呈负相关(p<0.01),和p53无明显相关性(p>0.05)。进一步按照WHO CNS5分类标准分型后发现,PDPN表达阳性率在少突胶质细胞瘤中明显低于星形细胞瘤(11.8%vs48.0%,p<0.004)。PDPN在IDH突变型星形细胞瘤中的阳性率为11.9%,在少突胶质细胞瘤中的阳性率为11.8%,在IDH野生型星形细胞瘤中的阳性率为43.2%,在IDH野生型胶质母细胞瘤中的阳性率为71.3%,不同分子亚型之间的PDPN表达水平存在显著差异(p<0.001)。IDH野生型弥漫性星形细胞瘤(WHO 2-4级)中,PDPN表达阳性率随着WHO分级的升高逐渐增高(2级37.9%、3级53.3%,4级71.3%;p=0.003)。但是,在IDH突变型星形细胞瘤(WHO 2-4级)、少突胶质细胞瘤(WHO 2-3级)和IDH野生型星形细胞瘤(WHO 2-3级)中,PDPN表达阳性率和WHO分级之间无明显相关性。此外,在WHO 4级胶质瘤中,PDPN在IDH野生型胶质母细胞瘤中的阳性率明显高于WHO 4级的IDH突变型星形细胞瘤(71.3%vs 16.7%;p<0.001)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,PDPN高表达在低级别胶质瘤组和胶质母细胞瘤组中均与患者的不良预后呈正相关(p=0.004,p=0.001)。按照WHO CNS5分类标准细分后发现,在IDH突变型星形细胞瘤、IDH野生型胶质母细胞瘤和IDH野生型星形细胞瘤中,PDPN高表达患者的总生存时间均显著短于PDPN低表达的患者(p=0.01,p=0.012和p=0.017)。此外,在接受了术后放化疗的低级别胶质瘤和胶质母细胞瘤患者中,PDPN高表达患者的中位生存时间也明显缩短(p<0.001,p=0.001)。单因素Cox回归分析显示,年龄、KPS评分、WHO分级、术后放化疗、IDH、TERT启动子突变、p53和PDPN均是影响患者预后的重要因素。多因素Cox回归分析显示,WHO分级、术后放化疗和PDPN高表达是影响胶质瘤患者不良预后的独立因素。在体外和体内实验中显示,敲减PDPN后可以抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力并且可以抑制裸鼠的皮下成瘤能力。Western blot结果显示敲减PDPN后可以下调p-Akt和p-mTOR的表达,但是不影响Akt和mTOR的表达。使用Akt/mTOR通路激动剂SC79可以部分逆转PDPN敲低对胶质瘤细胞恶性表型的影响,提示PDPN参与了Akt/mTOR信号转导通路,并通过影响Akt和mTOR的磷酸化状态发挥调控作用。结论:PDPN在胶质瘤组织中的表达水平显著高于非肿瘤脑组织。PDPN和IDH野生型状态、TERT启动子突变状态呈正相关;和1p/19q联合缺失、ATRX缺失状态呈负相关;和p53无明显相关性。PDPN在星形细胞中表达水平显著高于少突胶质细胞。在IDH野生型弥漫性星形细胞瘤中PDPN的表达水平和病理级别呈正相关。PDPN高表达和患者的不良预后相关,且是独立的危险因素,可以作为胶质瘤不良预后的预测标志物。敲减PDPN可以抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,并在体内抑制胶质瘤的生长。PDPN参与了Akt/mTOR信号转导通路,并通过调控Akt和mTOR的磷酸化状态发挥促癌作用。PDPN有望作为一个潜在的靶点用于胶质瘤的靶向治疗。

第一部分LncRNA MEG3在POCD小鼠模型中通过抑制炎性因子改善动物认知功能目的:术后认知功能障碍(Postoperative cognitive dysfunction,POCD)是一种临床常见的术后并发症,此种并发症可明显延迟患者出院、加重患者的经济负担,会对患者的预后和中远期生活质量造成明显的负面影响,额外占用患者家庭和社会两方面大量的可用资源。尽管针对POCD的研究很多,但其发病机制复杂,具体的发病机制仍不清楚。因此目前对POCD尚缺乏有效的预防以及治疗措施。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)是一种核苷酸长度在200个以上的非编码RNA。近年来,也有部分学者试图阐明lncRNA在POCD中的作用及其机制,但关于lncRNA MEG3在POCD中发挥怎样的功能及通过何种分子机制影响POCD尚不得而知。本部分研究拟构建POCD小鼠模型,探究lncRNA MEG3在POCD中的表达情况及过表达MEG3在POCD小鼠中对动物认知功能、炎性因子分泌、小胶质细胞激活的影响。方法:本研究采用C57BL/6雄性小鼠以截骨手术建立POCD小鼠模型。对照组小鼠行假手术。采用过表达lncRNA MEG3的慢病毒质粒(Lentiviral overexpression vector of MEG3,LV-MEG3),于POCD建模前接受尾静脉注射lv-MEG3以在小鼠体内过表达MEG3,以lv-NC作为阴性对照。采用RT-qPCR检测小鼠海马组织中的MEG3表达。在动物建模及处理一周后,采用水迷宫实验检测动物认知功能。IBA-1荧光染色检测小胶质细胞活化情况。酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测POCD小鼠海马组织匀浆液中炎性因子TNF-α及IL-1β的表达。结果:1)在POCD小鼠海马组织中,MEG3的表达相比对照组降低了近50%,两组间差异具有显著性(P=0.0024)。2)水迷宫实验结果表明,POCD模型小鼠相比对照小鼠于目标象限的时间显著降低,其差异具有统计学意义(P<0.001)。而在小鼠体内过表达MEG3后,相比lv-NC组小鼠,lv-MEG3过表达组的小鼠其于目标象限的时间显著升高,其差异具有统计学意义(P=0.026)。同时,POCD小鼠60 s内穿越平台的频率相比对照组小鼠显著降低(P<0.001),而在小鼠体内过表达MEG3后,相比lv-NC组小鼠,lv-MEG3过表达组的小鼠60 s内穿越平台的频率显著升高,其差异具有统计学意义(P=0.0074)。3)POCD小鼠海马组织匀浆液中的TNF-α及IL-1β表达相比对照小鼠显著升高(P<0.001)。而在POCD小鼠体内过表达MEG3后,lv-MEG3组小鼠海马组织匀浆液中的TNF-α及IL-1β表达相比lv-NC阴性对照组显著降低(P<0.05)。4)在POCD小鼠海马组织中,IBA-1的荧光强度显著升高,相比对照组差异具有统计学意义(P<0.01)。而在采用尾静脉注射过表达MEG3的慢病毒质粒lv-MEG3于小鼠体内过表达MEG3后,lv-MEG3组小鼠海马组织中IBA-1的荧光强度相比lv-NC阴性对照组显著降低,其差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:1.MEG3在POCD小鼠体内低表达。2.过表达MEG3改善了POCD小鼠的认知功能。3.过表达MEG3降低了POCD小鼠海马组织的炎性因子分泌并抑制了小胶质细胞的炎性活化。第二部分LncRNA MEG3在LPS诱导的BV-2小胶质细胞模型中对炎性反应、氧化应激及miR-106a-5p/SIRT3轴的调控目的:在POCD的发展过程中,小胶质细胞诱发的炎性反应扮演着极为关键的角色。小胶质细胞炎性活化可释放出大量炎性因子,同时激活炎性通路和氧化应激通路,最终造成微环境中的神经元损伤,导致神经损伤并引发认知功能障碍。但目前为止,POCD中小胶质细胞的炎性活化受到何种分子通路的调控并不明确。在前一部分研究中,我们阐明了lncRNA MEG3在POCD小鼠模型中对小鼠认知功能的改善作用及其对小鼠海马组织中炎性反应及小胶质细胞炎性活化的抑制作用。在本部分研究中,我们拟采用BV-2小胶质细胞,以LPS诱导建立炎性诱导的细胞模型,同时探究MEG3在LPS诱导的小胶质细胞模型中对miR-106a-5p/SIRT3轴、炎性因子分泌及氧化应激的调控作用。方法:使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导BV-2细胞建立炎性模型。于LPS诱导的BV-2小胶质细胞中采用pc DNA3.1-MEG3转染细胞以过表达MEG3。采用RT-qPCR检测细胞中的MEG3、miR-106a-5p及SIRT3表达。采selleck HPLC用蛋白印迹检测SIRT3的蛋白表达。IBA-1荧光染色检测小胶质细胞活化。采用ELISA检测细胞上清中TNF-α及IL-1β的表达。购买剂盒检测各组细胞中丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶浓度。双荧光素酶报告分析检测lncRNA MEG3与miR-106a-5p间的结合关系。结果:1)在LPS诱导的BV-2细胞中,炎性因子TNF-α、IL-1β的表达都显著升高,且与对照组细胞相比差异具有统计学意义(P=0.0033及0.0019)。同时,MEG3的表达显著降低,其差异相比对照组细胞具有统计学意义(P=0.0379)。2)RT-qPCR结果表明转染pc DNA3.1-MEG3的BV-2细胞其MEG3表达显著增加(P<0.001),表明细胞转染成功建立了MEG3过表达的模型。ELISA结果表明,LPS的诱导显著升高了BV-2细胞中TNF-α、IL-1β的表达(P<0.001)。而在细胞中过表达MEG3后,TNF-α及IL-1β的表达都显著降低,其差异与LPS+pc DNA3.1的阴性对照组相比具有统计学意义(P<0.001)。3)在LPS诱导的BV-2细胞中,IBA-1的荧光强度显著升高,对比对照组细胞的差异具有统计学意义(P<0.001)。而在过表达MEG3后,表达升高的MEG3显著降低了LPS诱导的BV-2细胞中的IBA-1的荧光强度,相比LPS+pcDNA3.1的阴性对照组其差异存在统计学意义(P<0.001)。4)促氧化应激因子MDA的表达在LPS诱导的BV-2小胶质细胞中表达显著升高,其相对对照细胞差异具有统计学意义(P<0.001)。而在采用pc DNA3.1-MEG3过表达MEG3后,MDA的表达相比LPS+pc DNA3.1阴性对照组其表达显著降低,其差异具有统计学意义(P<0.001)。LPS诱导的BV-2小胶质细胞中抗氧化应激SOD及GSH-PX的表达显著降低,在用pc DNA3.1-MEG3过表达MEG3后,SOD及GSH-PX的表达显著升高,且相比LPS+pc DNA3.1阴性对照组差异具有统计学意义(P=0.0142)。5)生物信息学分析平台Starbase预测了MEG3与miR-106a-5p间的结合位点。在MEG3-WT野生型的293T细胞中,荧光素酶活性在过表达miR-106a-5p时显著降低(P<0.05),而在MEG3-MUT突变型的细胞中过表达miR-106a-5p则对荧光素酶活性无显著影响。RT-qPCR及蛋白印迹的结果表明,在BV-2细胞中过表达MEG3显著降低了miR-106a-5p的表达(P<0.05),同时过表达MEG3显著升高了SIRT3的m RNA和蛋白质表达(P<0.001)。结论:1.过表达MEG3可以抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞中的炎性反应。2.过表达MEG3可以抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞中的氧化应激反应。3.MEG3可与miR-106a-5p结合并负调控miR-106a-5p/SIRT3轴。第三部分miR-106a-5p通过调控SIRT3逆转lncRNA MEG3在POCD中对炎性因子分泌及氧化应激的抑制作用目的:虽然已有lncRNA对小胶质细胞炎性因子分泌及氧化应激的调控作用,但lncRNA MEG3通过何种分子信号通路影响小胶质细胞的炎性反应及氧化应激,进而影响POCD的发展还不甚明了。miR-106a-5p已在一些研究中被证明可以促进炎性进程,而其下游的靶标m RNA SIRT3则已被诸多研究发现可发挥抗炎、抗氧化作用。但目前,并无研究关注miR-106a-5p/SIRT3通路在POCD中与MEG3的相互作用及其对POCD中小胶质细胞炎性及氧化应激的影响。在本部分研究中,我们通过POCD动物模型及LPS诱导的BV-2细胞模型,探究miR-106a-5p/SIRT3在POCD及BV-2炎性细胞中的表达情况,同时探究过表达miR-106a-5p对MEG3影响BV-2细胞的逆转作用,同时阐明SIRT3在此作用中扮演的角色。方法:研究采用C57BL/6雄性小鼠以截骨手术建立POCD小鼠模型。对照组小鼠行假手术。采用LPS诱导的BV-2小胶质细胞建立体外模型。RT-qPCR检测miR-106a-5p及SIRT3在POCD小鼠海马组织及LPS诱导的BV-2小胶质细胞中的表达情况。ELISA检测细胞上清中TNF-α及IL-1β的表达。市售试剂盒检测各组细胞中MDA、SOD、GSH-PX的含量。采用生物信息学分析平台Targetscan预测miR-106a-5p与SIRT3之间存在的结合位点。双荧光素酶报告分析Drug immunogenicity检测了miR-106a-5p在293T细胞中与SIRT3的结合作用。结果:1)在POCD小鼠海马组织中,miR-106a-5p的表达相比对照小鼠显著升高且差异具有统计学意义(P=0.0021)。而SIRT3在POCD小鼠的海马组织中表达显著降低,相比对照小鼠具有统计学意义(P=0.0025)。在LPS诱导的BV-2小胶质细胞中,miR-106a-5p的表达也显著升高,且相比对照组细胞其差异具有统计学意义(P=0.0247)。而SIRT3在LPS诱导的BV-2小胶质细胞中的表达则显著降低,且差异相比对照小鼠具有统计学意义(P=0.0076)。2)在LPS诱导的BV-2细胞中过表达MEG3显著降低了TNF-α及IL-1β的表达水平,其差异相比阴性对照组具有统计学意义(P<0.001)。在过表达MEG3的同时采用miR-106a-5p mimics转染BV-2细胞则显著升高TNF-α及IL-1β的表达,其差异相比单独过表达MEG3具有统计学意义(P<0.001)。3)在LPS诱导的BV-2细胞中过表达MEG3显著降低了MDA的表达水平,其差异相比阴性对照组具有统计学意义(P<0.001)。在过表达MEG3的同时采用miR-106a-5p mimics转染BV-2细胞则显著升高MDA的表达,其差异相比单独过表达MEG3具有统计学意义(P<0.001)。相反,在LPS诱导的BV-2细胞中过表达MEG3显著升高了抗氧化因子SOD及GSH-PX的表达水平,其差异相比阴性对照组具有统计学意义(P<0.001)。在过表达MEG3的同时采用miR-106a-5p mimics转染BV-2细胞则显著降低了SOD及GSH-PX的表达,其差异相比单独过表达MEG3具有统计学意义(P<0.05)。4)生物信息学分析平台Target Scan预测了miR-106a-5p与SIRT3的结合作用。在SIRT3-WT野生型的293T细胞中,荧光素酶活性在过表达miR-106a-5p时显著降低(P<0.05),而在SIRT3-MUT突变型的细胞中过表达miR-106a-5p则对荧光素酶活性无显著影响。RT-qPCR及蛋白印迹的结果表明,在BV-2细胞中过表达miR-106a-5p显著降低了SIRT3的表达(P<0.05)。结论:1.miR-106a-5p在POCD小鼠海马组织及LPS诱导的BV-2小胶Tezacaftor配制质细胞中表达都显著升高,而SIRT3表达则显著降低。2.miR-106a-5p逆转MEG3在LPS诱导的BV-2小胶质细胞中对炎性因子分泌及氧化应激的抑制作用。3.miR-106a-5p可以与SIRT3结合并负调控其表达。

目的:双相情感障碍是一种临床上常见的精神疾病。该疾病不仅可以导致患者出现病理性的情绪波动,还会增加患者自伤自杀风险以及躯体疾病的发病率,严重危害患者健康以及社会功能。但该疾病与多种精神疾病存在症状学以及遗传学重叠,导致难以对该疾病进行精准的识别诊断。寻找与双相情感障碍发病相关的致病基因是目前的研究热点。本研究旨在通过生物信息学方法探究双相情感障碍的潜在核心基因,以此探究该疾病与其他精神类疾病共有的致病基因,并为未来Human hepatic carcinoma cell双相情感障碍的诊断及治疗提供新的思路。方法:在GEO(Gene Expression Omnibus)数据库进行数据检索,选择3个双相情感障碍相关的系列表达矩阵数据集,通过差异基因分析工具GEO2R分析双相情感障碍患者组与对照组的基因表达差异,并对分析出的结果按照阈值标准进行筛选,挑选出符合P<0.05且|log FC|>0.1的差异基因。使用DAVID在线分析工具对筛选出的差异表达基因进行GO以及KEGG pathway富集分析,通过此步骤对差异表达基因的功能以及其作用通路进行探究。在STRING在线数据库检索筛选出的差异表达基因,以此进行蛋白质相互作用(PPI)网络的构建,再凭借Cytoscape软件通过蛋白质相互作用网络文件筛选出核心基因。富集分析进一步揭示核心基因的功能及作用通路并完成核心基因的进一步筛选。再从GEO数据库选择3个精神分裂症相关的系列表达矩阵数据集使用上述分析工具,同样采用P<0.05且|log FC|>0.1的阈值标准进行相同过程的生物信息学分析,筛选出精神分裂症的核心基因,观察精神分裂症的核心基因是否与双相情感障碍存在交集,以此探究两种疾病的共同核心基因,尝试揭示两种疾病的联系。最后借助ROC曲线判断核心基因对于双相情感障碍的诊断价值。结果:1.差异基因筛选阶段共挑选并使用了3个系列表达矩阵数据集(GSE5388、GSE5389及GSE46416)根据P<0.05且|log FC|>0.1的阈值标准进行基因差异表达的分析。三个数据集单独进行分析后再将结果取交集。共发现117个表达上调的差异基因,38个表达下调的差异基因(均符合P<0.05且|log FC|>0.1)。其中2个核心基因SRC和CDKN1A均表达上调。2.富集分析表明,核心基因SRC和CDKN1A均在催产素信号通路、癌症的蛋白多糖表达、膀胱癌的发病等通路上明显富集(P<0.05)。3.再次通过GEO数据库选择3个精神分裂症相关的系列表达矩阵数据集(GSAdavosertib化学结构E53987、GSE21138和GSE27383)进行生物信息学分析,三个数据集单独进行分析后再将结果取交集。共发现差异表达基因61个,其中表达上调的差异表达基因共30个,而表达下调的差异表达基因共31个(均符合P<0.05且|log FC|>0.1)。最终结果中显示,精神分裂症组的核心基因为:JUN、NFKBIA、HSPA8、CDKN1A、CD44、GADD45B、NOTCH2、BTG2、BCL6、CHD2。结果提示CDKN1A同样是精神分裂症的核心基因,故CDKN1A是双相情感障碍与精神分裂症的共同核心基因,该基因可能会导致两种疾病的共同性状。4.诊断价值验证阶段,ROC曲线提示SRC、CDKN1A作为单独指标时对于双相情感障碍均有较显著的诊断价值。两个核心基因作为联合指标时同样对于双相情感障碍同样具有显著诊断价值,且相较于单独指标更为显著。结论:1.本研究使用生物信息学方法首次发现了与双相情感障碍的发病密切相关的两个核心基因SRC和CDKN1A。2.SRC、CDKN1A无论是作为单独指Protein Tyrosine Kinase抑制剂标还是作为联合指标对于双相情感障碍均具有显著的诊断价值,且作为联合指标时诊断价值相对较高。3.CDKN1A在双相情感障碍组和精神分裂症组的生物信息学分析中均被验证为核心基因,该基因为两种精神疾病的共同核心基因。CDKN1A可以为解释两种疾病的症状学重叠和遗传学联系提供可能。

酿酒酵母作为一种研究广泛的单细胞真核模式生物,其生理以及遗传背景清晰,是优良的碳代谢研究模型。酿酒酵母代谢特征独特:在批次培养过程中,当葡萄糖充足,无论通氧情况如何,酿酒酵母首先利用葡萄糖进行强酵解代谢,TCA循环和呼吸链均被抑制,造成代谢溢流,积累大量乙醇。当葡萄糖耗尽,酵母通过级联的信号途径做出响应精确调控代谢网络转变为呼吸代谢模式,利用前期积累的乙醇进行二次生长。这种特殊代谢模式引起科学家的长期关注,目前大量工作在转录和蛋白磷酸化修饰等水平对其进行了解释。赖氨酸乙酰化是真核生物和细菌中普遍存在的蛋白质翻译后修饰(PTM),在许多细胞生理和病理过程中起着重要的作用。乙酰化最初是在组蛋白中被发现,它主要通过改变染色质结构进而对基因转录进行调控。而随着质谱技术的发展,越来越多的非组蛋白MLN4924 IC50乙酰化位点被鉴定出来,例如在酵母中发现大量代谢酶被乙酰化,这也说明乙酰化修饰在细胞中广泛存在。然而,关于蛋白乙酰化修饰是否参与二次生长的研究还相对较少,本文探讨了蛋白乙酰化修饰参与酿酒酵母二次生长的调控机制,具体研究内容如下:1、本研究第一部分工作是明确酿酒酵母中非组蛋白乙酰化是否参与二次生长调节。首先利用高分辨质谱探查了酿酒酵母在批次发酵过程葡萄糖耗尽前后,即酵母利用发酵性碳源葡萄糖生长时和利用前期积累的非发酵性碳源乙醇进行二次生长时,蛋白乙酰化组的差异。组学结果显示,在两种碳源条件下,大量的非组蛋白乙酰化状态存在差异,表明蛋白乙酰化修饰涉及酿酒酵母的多个代谢通路。之后对碳代谢途径代谢蛋白在酵解代谢以及呼吸代谢阶段的乙酰化差异分析表明乙酰化修饰在碳源切换时是动态的,并且这种动态修饰广泛存在。之后,我们选择了两种碳源条件下乙酰化状态有明显差异的部分中心碳代谢途径蛋白,研究其发生乙酰化、脱乙酰化修饰时对酿酒酵母生理代谢的影响。在我们研究的10个酶蛋白的14个乙酰化位点中,Acs2、Ald6、Pck1、Pdc1等代谢酶的乙酰化、脱乙酰化模拟突变体呈现影响酵母细胞生长及生理代谢的特征。其中,Ald6的K474位乙酰化修饰参与酿酒酵母二次生长的调节,首先,Ald6的K474在葡萄糖酵解代谢阶段处于去乙酰化状态,乙醛脱氢酶活性高,部分乙醛转化为乙酸,这一过程可以生成NADPH,为细胞快速生长时所需生物大分子的合成Adverse event following immunization提供还原力;其次,进入乙醇呼吸代谢阶段后,Ald6的K474位处于乙酰化修饰状态,酶活性降低,NADPH生成减少,和该阶段细胞生长减慢,所需NADPH减少的需求相匹配。因此,乙酰化修饰可以作为一种适应性策略来参与酿酒酵母二次生长的调节。此外,当表达Ald6的K474Q突变子以模拟组成型乙酰化时,能够显著降低菌株的乙酸积累,提高甘油、乙醇产量,这种表型在工业生产中有一定的应用价值。2、本工作第二部分主要研究Ald6的乙酰化影响酶活的结构基础,并尝试寻找催化Ald6乙酰化和去乙酰化的乙酰转移酶(KATs)以及脱乙酰化酶(KDACs)。Ald6同源蛋白的结构分析和突变模拟结构显示,AAZD2281体内实验剂量ld6的K474位不处于酶活性中心,不是NADP的结合位点,但是对于正确形成乙醛脱氢酶的同源四聚体比较重要。因此,我们推测,当K474位被乙酰化时,四聚体形成的结构不完全正确,降低了酶活性从而影响代谢。这是本工作首次揭示的乙酰化修饰参与二次生长调节的一个范例。之后,我们初步探查了酿酒酵母乙醛脱氢酶Ald6的KATs和KDACs,发现目前已知的KATs和Ald6都有相互作用,虽然我们尚未鉴定出具体催化Ald6乙酰化的KATs,但考虑到Ald6上有多个乙酰化位点,其乙酰化修饰有极大的可能由多个KATs催化。在KDACs方面,Ald6的K414位去乙酰化修饰主要由HDACs家族的脱乙酰化酶催化,而K474位的去乙酰化,则是HDACs和Sirtuins家族的脱乙酰化酶都有参与。

目的：分析实施前列腺增生（Benign prostatic hyperplasia,BPH）患diABZI STING agonist配制者治疗的过程中奥林巴斯ESG400高频电刀经尿道等离子前列腺电切术所获得的临床疗效。方法：研究对象为在医院接受BPH治疗的患者44例，按照随机数字表法实现患者分组，其中22例患者为实验组，治疗方法为奥林巴斯ESG400高频电刀经尿道www.selleck.cn/products/gsk1120212-jtp-74057等离子前列腺电切术，另外22例患者为对比组Hereditary thrombophilia，治疗方法为经尿道前列腺电切术。结果：实验组患者手术、膀胱冲洗、置管和住院时间以及术中出血量、术后残余尿量、围术期并发症发生率均差别于对比组患者，P<0.05。术前两组患者最大尿流率、前列腺症状严重程度、疼痛严重程度均无显著差异，P>0.05；术后实验组患者上述指标显著差别于对比组患者，P<0.05。结论：奥林巴斯ESG400高频电刀经尿道等离子前列腺电切术属于BPH患者的理想治疗方法。

联苄化合物作为一类广泛存在于植物界内的天然产物,具有显著的抗肿瘤、抗炎、抗氧化及抗真菌等生物活性。由于其独特的结构与广泛的生物活性,针对联苄类化合物及其类似物进行结构改造Tezacaftor半抑制浓度与修饰衍生已成为新药开发领域的研究热点。天然联苄类化合物一般可分为双联苄类genetic rewiring和单联苄类。研究表明,地钱素C(Marchantin C)作为一个经典的大环双联苄类化合物,其具有抗肿瘤、抗真菌和抗炎等多种生物学活性,可作为先导化合物应用于抗肿瘤药物和抗真菌药物的研发过程中。白藜芦醇(Resveratrol)具有类似于单联苄结构的二苯乙烯骨架,并表现出多种生物活性,如抗肿瘤、抗菌、抗氧化及化学预防等,具有广阔的应用和改造前景。在实验室前期研究中以白藜芦醇为先导化合物设计制得一系列化合物,皆表现出显著的NQO2酶抑制活性,展现了其在化学预防药物研制领域中的巨大潜力。本文以地钱素C为先导化合物,首先依据生物电子等排体原理设计并分别经14步和13步合成,首次制得10个全新的二苯胺类大环双联苄化合物,并在此基础上进一步设计、制备了 22个衍生物。另一方面,通过将吡啶环结构引入地钱素C中并经13步合成,首次制得3个全新的吡啶类大环双联苄化合物。上述化合物的细胞毒活性测试结果表明,相较于地钱素C,化合物39a、39g、41、42c和47的细胞毒活性皆有明显提高,其中含氮烷基化衍VP-16配制生物普遍表现出明显的细胞毒活性,半数抑制浓度(IC50)为1.16 μM～6.93μM。抗真菌测试结果表明,相较于地钱素C,化合物21、38、39e、39f、39g、41和48针对白色念珠菌的最低抑菌浓度(MIC)皆小于等于128 μg/mL,其中化合物38活性最佳(MIC=32 μg/mL)。本文同时针对单联苄类化合物和白藜芦醇类似物进行改造研究,以期为大环双联苄类化合物的改造修饰提供新思路。首先,设计并合成3个开环单联苄化合物,并测定细胞毒活性。其次,在实验室前期研究基础上,针对白藜芦醇类似物的NQO2酶抑制活性进一步深入研究,设计并合成8个苯基稠环化合物。酶抑制测试结果表明,相较于白藜芦醇,8个苯基稠环化合物的活性皆有显著提升,其中化合物95活性最佳(IC50=1.6nM),为后续新型化学预防药物的设计提供了新思路。最终,本文设计并经5步合成,首次制得1个生物素标记的大环双联苄衍生物探针,为此类化合物作用靶点与作用机制的深入研究打下坚实基础。

目的:高迁移率族蛋白B1(High mobility group box 1,HMGB1)作为重要的晚期炎症递质有促炎活性,会在牙龈炎症过程中迅速释放[1],感染促进牙周组织分泌HMGB1,分泌的HMGB1参与牙周炎的持续加重[2]。另一项研究报道,HMGB1从上皮细胞的细胞核脱位,定位于牙周炎患者的牙龈上皮细胞质[3]。除了促炎活性外,最近在小鼠牙周炎模型中HMGB1还被证明促进骨吸收[4]。吸烟是牙周炎的独立危险因素,会抑制免疫系统的激活,损害上皮细胞的宿主防御功能,增加宿主对牙周病原菌的易感性[5]。但吸烟对HMGB1在牙周炎中相关作用的影响并不明确,目前研究较少,且结果不一,没有做相关性分析。本实验通过研究吸烟对牙周炎患者牙龈组织的HMGB1表达水平的影响及香烟烟雾提取物(Cigarette smoke extract,CSE)对HMGB1刺激巨噬细胞分化为破骨细胞的影响,探讨HMGB1、吸烟之间相互作用对牙周炎的炎症发展和破骨细胞表达的影响。方法:1.吸烟对牙龈组织HMGB1表达的影响1.1牙龈组织的收集:将收集的牙龈分为健康组,吸烟组,牙周炎组,伴吸烟牙周炎组。1.2 HMGB1蛋白检测:将牙龈组织制成切片,HE染色观察各组牙龈组织学差异,免疫组织化学染色法检测牙龈组织中HMGB1蛋白的分布和表达。1.3 HMGB1 m RNA检测:RT-PCR法检测各组牙龈组织HMGB1m RNA的表达2.CSE对HMGB1刺激破骨细胞分化的影响2.1小鼠骨髓来源单核巨噬细胞(Bone marrow-derived monocytes macrophages,BMMs)的培养:提取6-8周c57/BL6小鼠股骨、胫骨骨髓间充质细胞,10ng/ml M-CSF诱导其分化为BFer-1抑制剂MMs,分为空白对照组、阴性对照组(1μg/ml anti-HMGB1),阳性对照组(40ng/ml TNF-α),1%CSE组,1μg/ml r HMGB1组,1%CSE+1μg/ml r HMGB1组。2.2 TRAP染色鉴定破骨细胞:BMMs培养基中加入50ng/ml RANKL,继续诱导7-10d[6],镜下观察细胞核>3个,TRAP染色阳性的多核巨细胞为成熟破骨细胞。2.3 RT-PCR检测破骨细胞相关基因m RNA表达情况:检测CSE刺激后破骨细Torin 1生产商胞相关基因integrin 3,MMP 9,TRACP,cathepsin K和calcitonin R的表达。结果:1.HMGB1在伴吸烟牙周炎病变牙龈组织表达1.1四组牙龈的组织形态学表现不同,与健康组牙龈组织相比,吸烟组可见少量炎症细胞分布,牙周炎牙龈组织钉突下方可见有大量炎症细胞浸润,胶原纤维排列紊乱,部分纤维结构发生断裂、破坏,毛细血管增生、扩张,伴吸烟牙周炎组炎症最严重。1.2四组牙龈均有HMGB1蛋白的表达,IHC结果显示HMGB1主要分布在固有层中,健康组中的HMGB1多集中在细胞核内,吸烟组、牙周炎、牙周炎伴吸烟组中HMGB1部分分布于细胞质及细胞外,伴吸烟牙周炎组表达量显著大于其他各组(P<0.001)。1.3四组牙龈组织中均有HMGB1 m RNA的表达,且牙周炎伴吸烟组>吸烟组>健康组,牙周炎伴吸烟组>牙周炎组>健康组(P<0.05);牙周炎组>吸烟组(P>0.05)。2.BMMs原代培养所有实验组均培养出BMMs,镜下观察呈圆形,形态均一。3.破骨细胞诱导所有实验组均诱导出清晰、多核的破骨细胞,TRAP染色阳性。4.CSE对HMGB1刺激破骨细胞分化的影响4.1 HMGB1刺激破骨细胞分化4.1.1 TRAP染色计算TRAP阳性细胞占比,结果为1μg/ml r HMGB1组>空白组>anti-HMGB1组(P<0.05)4.1.2 HMGB1刺激破骨细胞相关基因的表达1μg/ml r HMGB1组>空白组>anti-HMGB1组(P<0.05)4.2 CSE促进HMGB1刺激破骨细胞分化4.2.1 TRAP染色阳性细胞占比为1%CSE+1μg/ml r HMGB1组>1μg/ml r HMGB1组>空白组(P<0.05);1%CSE+1μg/ml r HMGB1组>1%CSE组>空白组(P<0.05)4.2.2 CSE促进HMGB1刺激破骨细胞相关基因的表达1%CSE组>空白对照组>1μg/ml anti-HMGB1组(P<0.05);1%CSE+1μg/ml r HMGB1组>1%CSE组(P<0.05);1%CSE+1μg/ml r HMGB1组>1μg/ml r HMGB1(P<0.05)结论:1.吸烟加重牙周炎症2.吸烟促进牙周炎牙龈组织中HMGB1蛋白分泌,并促使HMGB1蛋白由细胞核转移到细胞质及细胞外,并促进HMGB1 m RNA表Bio-compatible polymer达3.HMGB1促进巨噬细胞分化为破骨细胞4.CSE促进HMGB1刺激巨噬细胞分化为破骨细胞