Jak信号通路

目的:高迁移率族蛋白B1(High mobility group box 1,HMGB1)作为重要的晚期炎症递质有促炎活性,会在牙龈炎症过程中迅速释放[1],感染促进牙周组织分泌HMGB1,分泌的HMGB1参与牙周炎的持续加重[2]。另一项研究报道,HMGB1从上皮细胞的细胞核脱位,定位于牙周炎患者的牙龈上皮细胞质[3]。除了促炎活性外,最近在小鼠牙周炎模型中HMGB1还被证明促进骨吸收[4]。吸烟是牙周炎的独立危险因素,会抑制免疫系统的激活,损害上皮细胞的宿主防御功能,增加宿主对牙周病原菌的易感性[5]。但吸烟对HMGB1在牙周炎中相关作用的影响并不明确,目前研究较少,且结果不一,没有做相关性分析。本实验通过研究吸烟对牙周炎患者牙龈组织的HMGB1表达水平的影响及香烟烟雾提取物(Cigarette smoke extract,CSE)对HMGB1刺激巨噬细胞分化为破骨细胞的影响,探讨HMGB1、吸烟之间相互作用对牙周炎的炎症发展和破骨细胞表达的影响。方法:1.吸烟对牙龈组织HMGB1表达的影响1.1牙龈组织的收集:将收集的牙龈分为健康组,吸烟组,牙周炎组,伴吸烟牙周炎组。1.2 HMGB1蛋白检测:将牙龈组织制成切片,HE染色观察各组牙龈组织学差异,免疫组织化学染色法检测牙龈组织中HMGB1蛋白的分布和表达。1.3 HMGB1 m RNA检测:RT-PCR法检测各组牙龈组织HMGB1m RNA的表达2.CSE对HMGB1刺激破骨细胞分化的影响2.1小鼠骨髓来源单核巨噬细胞(Bone marrow-derived monocytes macrophages,BMMs)的培养:提取6-8周c57/BL6小鼠股骨、胫骨骨髓间充质细胞,10ng/ml M-CSF诱导其分化为BFer-1抑制剂MMs,分为空白对照组、阴性对照组(1μg/ml anti-HMGB1),阳性对照组(40ng/ml TNF-α),1%CSE组,1μg/ml r HMGB1组,1%CSE+1μg/ml r HMGB1组。2.2 TRAP染色鉴定破骨细胞:BMMs培养基中加入50ng/ml RANKL,继续诱导7-10d[6],镜下观察细胞核>3个,TRAP染色阳性的多核巨细胞为成熟破骨细胞。2.3 RT-PCR检测破骨细胞相关基因m RNA表达情况:检测CSE刺激后破骨细Torin 1生产商胞相关基因integrin 3,MMP 9,TRACP,cathepsin K和calcitonin R的表达。结果:1.HMGB1在伴吸烟牙周炎病变牙龈组织表达1.1四组牙龈的组织形态学表现不同,与健康组牙龈组织相比,吸烟组可见少量炎症细胞分布,牙周炎牙龈组织钉突下方可见有大量炎症细胞浸润,胶原纤维排列紊乱,部分纤维结构发生断裂、破坏,毛细血管增生、扩张,伴吸烟牙周炎组炎症最严重。1.2四组牙龈均有HMGB1蛋白的表达,IHC结果显示HMGB1主要分布在固有层中,健康组中的HMGB1多集中在细胞核内,吸烟组、牙周炎、牙周炎伴吸烟组中HMGB1部分分布于细胞质及细胞外,伴吸烟牙周炎组表达量显著大于其他各组(P<0.001)。1.3四组牙龈组织中均有HMGB1 m RNA的表达,且牙周炎伴吸烟组>吸烟组>健康组,牙周炎伴吸烟组>牙周炎组>健康组(P<0.05);牙周炎组>吸烟组(P>0.05)。2.BMMs原代培养所有实验组均培养出BMMs,镜下观察呈圆形,形态均一。3.破骨细胞诱导所有实验组均诱导出清晰、多核的破骨细胞,TRAP染色阳性。4.CSE对HMGB1刺激破骨细胞分化的影响4.1 HMGB1刺激破骨细胞分化4.1.1 TRAP染色计算TRAP阳性细胞占比,结果为1μg/ml r HMGB1组>空白组>anti-HMGB1组(P<0.05)4.1.2 HMGB1刺激破骨细胞相关基因的表达1μg/ml r HMGB1组>空白组>anti-HMGB1组(P<0.05)4.2 CSE促进HMGB1刺激破骨细胞分化4.2.1 TRAP染色阳性细胞占比为1%CSE+1μg/ml r HMGB1组>1μg/ml r HMGB1组>空白组(P<0.05);1%CSE+1μg/ml r HMGB1组>1%CSE组>空白组(P<0.05)4.2.2 CSE促进HMGB1刺激破骨细胞相关基因的表达1%CSE组>空白对照组>1μg/ml anti-HMGB1组(P<0.05);1%CSE+1μg/ml r HMGB1组>1%CSE组(P<0.05);1%CSE+1μg/ml r HMGB1组>1μg/ml r HMGB1(P<0.05)结论:1.吸烟加重牙周炎症2.吸烟促进牙周炎牙龈组织中HMGB1蛋白分泌,并促使HMGB1蛋白由细胞核转移到细胞质及细胞外,并促进HMGB1 m RNA表Bio-compatible polymer达3.HMGB1促进巨噬细胞分化为破骨细胞4.CSE促进HMGB1刺激巨噬细胞分化为破骨细胞

目的：分析龙血通络胶囊联合吲哚布芬治疗脑梗死患者的疗效。方法：选取2021年11月—2022年10月我院收治的102例脑梗死患者，通过黑白双色球法随机分为西药组(51例)和联合组(51例)。两组均给予常规神经内科治疗，西药组则加用吲哚布芬治疗，联合组在西药组基础上加用龙血通络胶囊治疗。比较两组临床疗效、不良反应发生情况及治疗前后的脑部血液循环、血脂水平、细胞因子水平。结果：联合组治疗总有效率为96.08%,比西药组的78.43%显著更高(P<0.05)。治疗后两组大脑中动脉(MCA)、大脑后动脉(PCA)、大脑前动脉(ACA)、基底动脉(BA)平均血流速度均显著提高，且联合组高于西药组(P<0.05)。治疗后两组低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平均显著下降，且联合组低于西药组；高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平均显著提高，且联合组高于西药组(P<0.05)。治疗后两组胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)水平均显著下降，且联合组低于西药组；血管内皮生长因子(VEGF)水平均显著提高，且联合组高于西药Glycopeptide antibiotics组(P<0.05)。两组不良反应总发生率比较无统计学PR-171分子量差异(P>0.05)。结论：应用龙血通络胶囊联合吲哚布芬治疗脑梗死患者效果显著，可明PLX-4720浓度显改善患者脑部血液循环、血脂水平、细胞因子水平，且安全性较高。

目的 探究糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)血瘀证大鼠肾损害与肾脏铁死亡的潜在机制。方法 将50只SPF级雄性SD大鼠分为对照组、DKD组、DKD血瘀证组。采用腹腔注射链脲佐菌素的方法复制DKD大鼠模型，采用尾静脉注射右旋糖酐的方法复制DKD血瘀证模型。实验过程中观察大鼠血瘀证表现及检测24 h尿蛋白、血清肌酐、血尿素氮、血液流变学指标，采用苏木精-伊红染色、Masson染色、PAS染色观察肾脏的组织形态，采用透射电子显微镜观察铁死亡典型细胞的线粒体变化；采用免疫组织化学法、WestCP-456773浓度ern blot法检测肾组织铁死亡相关蛋白[长链酯酰辅酶A合成酶4(Acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)、谷胱甘肽过氧BMS-354825体外化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)]及肾脏纤维化指标[纤维连接蛋白(fibronectin, FN)、Ⅳ型胶原蛋白(typeⅣcollagen, Col-Ⅳ)]的表达水平。结果 与对照组比较，DKD组大鼠肾脏病理变化加重，线粒体损伤明显，24 h尿蛋白含量，血清肌酐、血尿素氮水平及全血黏度、血浆黏度明显升高(P<0.05),肾脏ACSL4、FN和Col-Ⅳ及其mRNA表达水平明显升高(P<0.05),GPX4蛋白及其mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。DKD血瘀证大鼠出现唇色黯淡、眼球黯红、耳廓紫红、舌下脉络紫黯等血瘀证表现，24 h尿蛋白和血清肌酐、血尿素氮水平明显高于DKD组，光学显微镜下可见肾脏出现明显的系膜基质增生、肾小球萎缩、肾间质胶原沉积和纤维化，电子显微镜下可见肾组织细胞线粒体损伤明显，嵴基bioaccumulation capacity本断裂，ACSL4、FN、Col-Ⅳ及其mRNA表达水平较DKD组明显上升(P<0.05),GPX4蛋白及其mRNA表达水平较DKD组明显下降(P<0.05)。结论 DKD血瘀证大鼠肾脏损害更加严重，其机制可能与GPX4、ACSL4介导的铁死亡有关。

目的 探讨不同药对配伍对栀子引起的大鼠肝损伤的保护作用。方法 大鼠随机分为正常对照组、栀子组（1.17 g·kg~(-1)）、栀子+大黄组（栀子-大黄=3∶8）、栀子+黄连组（栀子-黄连=1∶1）、栀子+黄芩组（栀子-黄芩=1∶1）。按照上述配比，各组大鼠每日灌胃给予相应药物1次，连续进行7 d。给药结束后检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、乳酸脱氢酶（LDH）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素（IL）-6(IL-6)、IL-1β水平；计算脏器系数；HE染色检测肝组织病理变化；检测超氧化物歧化酶（SOD）活性，还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二GSK J4临床试验醛（MDA）及铁含量；Western blot检测肝组织谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、血红素氧合酶（HO-1）、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白的表达；qRT-PCR检测GPX4和SLC7A11 mRNA的水平。结果 与正常对照组比，栀子组血清ALT、AST、ALP、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显上升；肝脏系数显著上升，胸腺系数明显下降；病理切片检测发现明显的肝细胞坏死及炎性细胞浸润；GSH和SOD水平显著下降；MDA和铁structured medication review含量显著升高。GPX4和SLC7A11的蛋白及mRNA表达降低，HO-1蛋白表达增加。与大黄、黄连、黄芩配伍后，ALT、AST、ALP、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平及肝脏系数明显降低，肝组织病理得到改善；GSH和SOD水平明显提升；MDA和铁含量减少。GPX4、SLC7A11的蛋白和mRNA及HO-1的蛋白表达水平升高。结论 大黄、黄连、黄芩与栀子药对配伍可有效减轻栀子肝脏毒性，点击此处其作用机制与抑制氧化应激和铁死亡有关。

目的 探究经尿道前列腺切除术不同术式治疗良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia,BPH）合并糖尿病的临床效果。方法 选取2021年1月至12月台州市立医院收治的94例BPH合并2型糖尿病患者，根据随机数字表法将其分为观察组和对照组，每组各47例。对照组患者采用经尿道前列腺汽化电切术，观察组患者采用经尿道前列腺等离子电切术。比较两组患者的血糖、神经生长因子（nerve growth factor,NGF）、尿动力学指标和并发症情况。结果 术中，观察组患者的血糖显著低于对照组（P<0.05）。观察组患者的NGF阳性细胞率显著低于对照组（P<0.05Dolutegravir）。术后1个月，观察组患者的最Humoral immune response大尿流率、膀胱顺应性均显著高于对照组，残余尿量显著低于对照组（P<0.05）。术后1个月内，观察组患者的并发症发生率显著低于对照组（P<0.05）。结论 经尿道前列腺等离子电切术治疗BPH合并糖尿病患者可减轻手GSK126体外术对血糖的影响，改善逼尿肌功能及尿动力学，提升治疗效果的同时降低并发症发生率。

目的：探讨鸦胆子苦醇调节核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)/溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)信号通路对皮肤鳞癌（cutaneous squamous cell carcinoma,cSCC）细胞铁死亡的影响。方法：CCK-8法检测0、100、250、500、700、900 nmol/L鸦胆子苦醇处理后人cSCC细胞系A431细胞增殖率，筛选出合适的鸦胆子苦醇作用浓度。体外培养的A431细胞随机分为对照组、鸦胆子苦醇低剂量组、鸦胆子苦醇高剂量组、特丁基对苯二酚（tert-butylhydroquinone,TBHQ;Nrf2激活剂）组、鸦胆子苦醇高剂量+TBHQ组，以鸦胆子苦醇和TBHQ分组处理后，采用CCK-8法、Hoechst 33342染色法检测各组A431细胞增殖与凋亡；采用试剂盒检测各组A431细胞抗氧化因子[谷胱甘肽（glutathi更多one,GSH）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）]水平及铁死亡指标[铁含量、活性氧（reactive oxygen species,ROS）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）]水平；采用免疫印迹实验检测各组A431细胞增殖、凋亡及NrfDiagnostics of autoimmune diseases2/SLC7A11/GPX4信号通路相关蛋白表达。结果：与对照组相比，鸦胆子苦醇低、高剂量组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平，以及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达均降低（P<0.05），凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达均升高（P<0.05）；鸦胆子苦醇高剂量组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平，以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达相比鸦胆子苦醇低剂量组进一步降低（P<0.05），凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达进一步升高（P<0.05）;TBHQ组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平，以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高（P<0.05），凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达降低（P<0.05）。与鸦胆子苦醇高剂AZD2281浓度量组相比，鸦胆子苦醇高剂量+TBHQ组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平，以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高（P<0.05），凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达降低（P<0.05）。结论：鸦胆子苦醇通过下调Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路而促进铁死亡，诱导cSCC细胞凋亡，并抑制其增殖。

目的:胃癌是全球高发恶性肿瘤之一,在中国胃癌新发病率及致死率均位居恶性肿瘤第三位,严重危害人类身体健康。热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)是调控细胞生命的不可或缺的关键蛋白,同时也参与多种肿瘤发生、发作的调控。DNAJ热休克蛋白40家族成员A1(DNAJ heat shock protein 40 family member AFoodborne infection1,DNAJA1)是课题组前期筛选出的与肿瘤发生、进展紧密相关的基因,但其在不同肿瘤中扮演着不同角色。本课题组前期利用公共生物数据库分析发现DNAJA1在胃癌中可能表达上调,但其在胃癌中的具体表达情况及机制并不明确。本研究拟检测DNAJA1在胃癌石蜡组织中的表达情况并分析其与临床病理特征的相关关系,初步探讨DNAJA1对胃癌细胞生物学行为的影响。为DNAJ点击此处A1成为新的胃癌分子生物标记奠定基础,为胃癌的诊断、预后评估以及药物治疗提供新的研究靶点。方法:1.利用免疫组化检测胃癌组织、癌旁正常胃黏膜、淋巴结转移病灶中DNAJA1的表达水平,并且通过统计学方法分析其与临床病理特征的相关关系。2.利用Real-time PCR及Western blot分别检测4株人胃癌细胞株中DNAJA1表达水平。3.采用小干扰RNA和慢病毒质粒分别瞬时转染构建DNAJA1干扰胃癌细胞株和DNAJA1过表达胃癌细胞株。4.通过MTT、平板克隆形成实验、Transwell和划痕实验研究DNAJA1对胃癌细胞生物学行为的影响。结果:1.免疫组化检测结果表明,与癌旁正常的胃黏膜相比,胃癌组织和淋巴结转移病灶中DNAJA1的表达水平显著上调。但将胃癌原发病灶与淋巴结转移病灶相比较分析,发现两者中DNAJA1表达差异无统计学意义。此外,胃癌组织中DNAJA1的高表达与淋巴结转移、p53突变、HER-2状态、浸润深度及WHO分型(P<0.05)具有相关性,而与年龄、性别、分化程度无相关关系(P>0.05)。高表达DNAJA1组的患者比低表达DNAJA1组的患者5年生存率明显降低(P<0.05)。2.DNAJA1促进胃癌细胞的增殖、侵袭能力。根据DNAJA1在4株胃癌细胞中的内源性表达情况,选择HGC-27细胞株过表达DNAJA1,AGS细胞株干扰DNAJA1。MTT实验和平板克隆形成实验结果表明过表达DNAJA1促进胃癌细胞的体外增殖能力(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果表明过表达DNAJA1促进胃癌细胞的体外侵袭能力(P<0.05)。划痕实验结果表明过表达DNAJA1促进胃癌细胞的体外迁获悉更多移能力(P<0.05)。结论:1.DNAJA1在胃癌和淋巴结转移灶中的表达明显高于正常胃黏膜组织。2.DNAJA1高表达与胃癌淋巴结转移、p53状态、HER-2状态、浸润深度及WHO分型相关。3.高表达DNAJA1与胃癌患者不良预后有关。4.过表达DNAJA1促进胃癌细胞的增殖、侵袭以及迁移能力。

研究目的:电离辐射(Ionizing radiation,IR)在人类的生产生活中越来越广泛,人们受到IR的损伤风险也随之大大提高。IR会引起相关器官和系统的病理性改变,从而造成机体严重损伤。其中,造血系统对IR高度敏感,是IR后最早出现和最严重的损伤部位之一。IR会引发骨髓(Bone marrow,BM)造血功能障碍,甚至会导致造血系统衰竭。这主要是骨髓造血干祖细胞(Hematopoietic stem and progenitor cells,HSPCs)受到IR损伤后无法维持机体的正常造血所致。然而目前始终缺乏保护辐射损伤后的造血系统的有效手段,故预防和减轻IR导致的造血系统损伤已成为当下亟待解决的重要科学问题。本课题拟通过建立IR对小鼠造血系统损伤模型,使用增强转录反式激活因子-蛋白磷酸酶1B(Enhance transactivator of transcription-protein phosphatase 1B,eTAT-PPM1B)干预建立小鼠造血系统辐射损伤后的保护模型,探究eTAT-PPM1B能否减轻IR导致的造血系统损伤并研究其机制,为预防和保护IR导致的造血系统辐射损伤提供新方法及策略。方法:体内实验:1.将SPF级8周龄C57BL/6小鼠随机分为2组:未辐射对照组和辐射模型组。对模型组小鼠进行4Gy全身X射线辐射建立辐射造血系统损伤模型,对照组不进行辐射。14天后取小鼠右侧股骨和胫骨进行流式分析,左侧股骨和胫骨固定、切片后续进行苏木精和伊红(Hematoxylin and eosin,HE)染色。2.用Cy5-NHS eater标记eTAT/eTAT-PPM1B蛋白,将SPF级8周龄C57BL/6小鼠随机分为2组:对照组(eTAT组)和给药组(eTAT-PPM1B组)。eTAT组和eTAT-PPM1B组分别尾静脉注射Cy5-NHS eater标记好的空质粒eTAT蛋白和eTAT-PPM1B蛋白,注射结束后3h取小鼠双侧骨髓进行流式分析。3.将未辐射SPF级8周龄C57BL/6小鼠随机分为2组:对照组(eTAT组)和给药组(eTAT-PPM1B组)。eTAT组和eTAT-PPM1B组尾selleckchem Smoothened Agonist静脉两次注射eTAT或eTAT-PPM1B蛋白(5mg/kg),两次注射间隔时间4h,注射结束后两组小鼠继续常规饲养。14天后取小鼠右侧股骨和胫骨进行流式分析,左侧股骨和胫骨固定、切片后续进行HE染色。4.将辐射后SPF级8周龄C57BL/6小鼠随机分为2组:对照组(4Gy-eTAT组)和治疗组(4Gy-eTAT-PPM1B组),2组小鼠接受4Gy全身X射线辐射后2h和6h尾静脉注射eTAT或eTAT-PPM1B(5mg/kg),注射结束后小鼠继续常规饲养14天后取材,后续分析同上。体外实验:1.eTAT-PPM1B蛋白在体外培养骨髓细胞中的分布:用Cy5-NHS eater标记eTAT/eTAT-PPM1B蛋白,4℃孵育过夜。将孵育好的蛋白加入提前铺好板的BM中,分别在3h、24h后荧光显微镜下拍照观察荧光染色情况,取细胞做流式分析。2.不同剂量辐射对c-Kit~+细胞数量的影响:为观察辐射对c-Kit~+细胞影响的剂量关系,本课题采用1Gy、2Gy、3Gy和4Gy X射线辐射c-Kit~+细胞,并在辐射后24h对各组细胞进行细胞计数。3.Genetics research不同浓度eTAT-PPM1B对辐射后的c-Kit~+细胞数的影响:在含有c-Kit+细胞培养基中分别给予0、25、50和100nmol/m L的eTAT-PPM1B处理,3h后对细胞进行2Gy辐射,24h后对各组细胞进行计数。4.辐射后c-Kit~+细胞程序性死亡与炎症相关基因的表达量变化:将小鼠c-Kit~+细胞分为对照组(0Gy)与辐射组(4Gy),辐射组进行4Gy X射线辐射,对照组不辐射。24h后采取实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,q RT-PCR)技术检测程序性死亡与炎症相关基因的表达量变化。5.eTAT-PPM1B对辐射后c-Kit~+细胞数量与相关基因表达量的影响:将c-Kit~+细胞分为eTAT组和eTAT-PPM1B组。两组细胞分别给予eTAT或eTAT-PPM1B(50nmol/m L)处理,3h后进行2Gy X射线辐射。在给药后24h进行细胞计数,并通过q RT-PCR检测细胞死亡与炎症相关基因的表达量变化。结果:1.4Gy辐射后14天小鼠骨髓HE染色结果显示:与未辐射组比较,辐射组骨髓腔内细胞排列较为松散,且骨髓细胞数量减少(P<0.01)。辐射组BM中各类HSPCs比例与数量均有不同程度的改变,其中Lin~-细胞数下降(P<0.01),HPCs细胞比例与细胞数量下降(P<0.001),HSCs细胞数减少(P<0.05),MPP1细胞比例与细胞数量下降(P<0.01),MPP2细胞比例与细胞数量上升(P<0.05)。Lin~-细胞、HPCs、LSK细胞、HSCs、MPP1和MPP3.4(P<0.05)的凋亡比例均有不同程度的升高。2.eTAT-PPM1B经尾静脉注射可以进入骨髓内,体外细胞孵育eTAT及eTAT-PPM1B后也检测到了明显的荧光,说明eTAT及eTAT-PPM1B在体内和体外均能很好地递送到目标位置。3.与未辐射组相比,辐射组的炎症因子IL-18(P<0.001)和IL-1β(P<0.0001)表达升高,凋亡与程序性细胞死亡相关基因RIPK3(P<0.001)、MLKL(P<0.0001)和Caspase-3(P<0.0001)表达均有上升。4.eTAT与eTAT-PPM1B对未辐射小鼠骨髓腔内细胞密度与细胞数量均无影响;eTAT与eTAT-PPM1B对未辐射小鼠骨髓HSPCs的细胞比例及细胞数量无影响,不会增加给药后HSPCs的凋亡比例。5.eTAT-PPM1B能够减少4Gy全身X射线辐射小鼠骨髓损伤:与eTAT组相比,eTAT-PPM1B给药后的辐射骨髓腔内细胞密度变大,数量增加(P<0.05)。Lin~-细胞、HSCs和MPP1的比例在eTAT-PPM1B注射后高于eTAT组(P<0.05);其他HSPCs在两组之间无统计学差异,LSK和MPP3.4在eTAT-PPM1B注射后细胞比例存在上升的趋势;辐射后HSPCs小鼠在eTAT组和eTAT-PPM1B组的凋亡比例均无差异。6.体外实验表明,与未辐射组相比,2Gy X射线辐射后24h的细胞数量降低(P<0.05);与对照组相比较,给药后细胞数量无显著差异。7.辐射后的c-Kit~+细胞数量明显低于未辐射细胞,且未辐射细胞在eTAT-PPM1B处理之后与无明显改变;辐射后细胞在eTAT-PPM1B给药后SCH727965分子式的细胞数量高于eTAT组(P<0.05),这说明eTAT-PPM1B在体外给药后会对c-Kit~+细胞起到辐射保护作用。8.对辐射后细胞进行的q RT-PCR结果显示:程序性细胞死亡相关基因RIPK3、细胞凋亡相关基因Puma及细胞炎症因子IL-1β的表达下调(P<0.05);但MLKL、Bcl2和TNF-α在给药组之间的差异不明显(P>0.05)。这提示eTAT-PPM1B对骨髓中造血干祖细胞的保护机制可能与降低炎症反应,抑制凋亡与程序性细胞死亡有关。结论:1.辐射会导致骨髓中的各类造血干/祖细胞数量减少,比例下降,同时坏死性细胞凋亡途径被激活,引起骨髓抑制。2.eTAT-PPM1B蛋白能够有效传递PPM1B蛋白进入骨髓造血干细胞,保护辐射损伤的造血干祖细胞。

【目的】探究川党参转录组SSR位点信息和分布特征。【方法】对川党参叶片进行转录组测序，通过MISA软件鉴定川党参转录组序列SSR位点，并对含有SSR位点的Unigenes进行功能注释。采用Primer 3.0设计EST-SSR引物，基于不同产地的川党参种质DNA模板，验证EST-SSR引物的扩增稳定性。【结果】从川党参转录组序列中共鉴定124 179个Unigene,其中26 084个Unigene序列包含35 827个SSR位点，SSR发生频率为21.01%。这些SSR位点共有165种SSR重复基元类型，从重复基元分布比例来看，单核苷酸重复基元A/T占SSR位点总数比例最高，为37.59%;从核苷酸重复基元平均距离来看，五核苷酸平均距离最大，为1288.54 kb;从基元重复次数比例来看，重复10次的最多，有7722个，占SSR总数的21selleck化学.55%。川党参转录组SSR序列长度集中在12～19 bp,共19 628个，频率为54.79%, SSR长度在20 bp以上的潜在多态性位点有6933个，占总数的19.35%。筛选出27对扩增稳定的SSR引物，对川党参基因组Dorganelle geneticsNA进行扩增，扩增片段大小范围为124～393 bp。基于不同产地川党参种质资源的基因组DNA模板，筛选了部分多态性标记，扩增条带清晰，多态性较好。此外对26 084个含有SSR序列的Unigenes进行Go和KEGG注释，这些selleckchem ColforsinUnigenes极显著富集于转录调控、DNA结合、催化、信号转导等生物过程。【结论】川党参转录组SSR序列具有较高的潜能多态性，挖掘的潜能SSR标记将为川党参遗传多样性分析、种质鉴定、辅助育种等提供研究基础。

本研究旨在探讨包被苯甲酸(Coated benzoic acid,BA)对产肠毒素大肠杆菌(Enterotorigenic Escherichia coli,ETEC)感染小鼠肠道损伤的保护作用及其机理。选取90只3周龄BALB/c雌鼠,随机分为5组,每组6个重复,每个重复3只小鼠。对照组(CON组)和攻毒组(ETEC组)饲喂基础饲粮,3个包被苯甲酸组分别饲喂在基础饲粮中添加1.0%(BA-L),1.5%(BA-M),2.0%(BA-H)包被苯甲酸的试验饲粮。正式试验前适应3 d,试验第15 d,CON组小鼠腹腔注射PBS溶液,其余四组小鼠腹腔均注射产肠毒素大肠杆菌菌液(1×10~5 CFU/m L),注射量为0.1 m L/10 g体重。之后继续饲喂各组相应饲粮。试验期共21 d。试验结果表明:(1)攻毒后,ETEC组和BA-L组小鼠体重显著低于CON组小鼠(P<0.05)。与CON组相比,ETEC组小鼠脾脏指数(1、7 d;P<0.05)和肾脏指数(1 d;P<0.05)均显著增加,BA-L组、BA-M组和BA-H组小鼠心脏指数和肾脏指数均显著增加(1 d,P<0.05)。与ETEC组相比,BA-M组小鼠血清中IL-1β(1、7 d)、TNF-α(1 d)和INF-γ(1、7 d)含量显著降低(P<0.05),BA-H组小鼠血清中TNF-α(1 d)和INF-γ(1 d)含量显著降低(P<0.05)。(2)与ETEC组相比,BA-M组小鼠空肠绒毛高度和V/C显著增加(1、7 d;P<0.05),BA-H组小鼠空肠V/C显著增加(7 d;P<0.05)。与ETEC组相比,BA-L组可以显著下调ETEC诱导的空肠黏膜中My D88 m RNA表达量(1 d;P<0.05),BA-M组可以显著下调ETEC诱导的TLR-2 m RNA(1 d)和My D88 m RNA(1、7 d)的表达量(P<0.05),BA-H组可以显著抑制ETEC诱导的My D88 m RNA表达量上调(7 d;P<0.05)。与ETEC组相比,BA-L组、BA-M组和BA-H组小鼠血清中D-LA含量和DAO活性显著降低(1 d;P<0.05)。与ETEC组相比,BA-M组可以显著上调ETEC诱导的小鼠CX-5461细胞培养空肠黏膜中ZO-1 m RNA(7 d)和Occludin m RNA(1、7 d)的表达量(P<0.05),BA-H组可以显著上调ETEC诱导的小鼠空肠黏膜中Occludin m RNA(7 d;P<0.05)的表达量。(3)与ETEC组相比,BA-L组和BA-M组的observed＿species指数均显著提高(7 d;P<0.05);BA-H组的simpson指数显著高于ETEC组(7 d;P<0.05)。PCo A结果显示,BA-H组肠道菌群组成向CON组明显偏移(7 d)。攻毒后,小鼠肠道微生物中优势菌门主要有拟杆菌门和厚壁菌门(1、7 d),优势菌属主要有粪杆菌属(1、7 d)。与CON组相比,ETEC组Erysipelatoclostridiaceae菌科,丹毒荚膜菌属丰度显著提高(1 d;P<0.05)。BA-M组小鼠肠道微生物中丹毒丝菌科和粪杆菌属相对丰度显著提高(7 d;P<0.05)。BA-L组小鼠盲肠食糜中乙酸和丁酸含量较ETEC组显著提高(1 d;P<0.05),BA-M组小鼠盲肠食糜中乙酸(1 d)和丁酸(7 d)含量较ETEC组显著提高(P<0.05),BA-H组丁酸含量较ETEC组显著提高(7 d;P<0.05)。在属水平上,攻毒后1 d,Bacteroides相predictive genetic testing对丰度与血清中INF-γ、DAO和D-LA呈显著正相关(P<0.05)。Parasutterella相对丰度与血清中DAO活性呈显著正相关(P<0.05),而与盲肠食糜中丁酸含量呈极显著负相关(P<0.01)。攻毒后7 d,Megasphaera和Prevotella＿9相对丰度与血清中IL-1β含量和DAO活性呈极显著负相关(P<0.01),而与盲肠CP-690550食糜中丁酸含量呈显著正相关(P<0.05)。Staphylococcus相对丰度与血清DAO活性呈显著正相关(P<0.05),而与盲肠食糜中丁酸含量呈极显著负相关(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加包被苯甲酸可通过增强小鼠免疫机能、肠道屏障功能并改善肠道菌群结构从而缓解ETEC诱导的肠道损伤。