Jak信号通路

自俄国科学家次维特发明色谱法以来,色谱分离技术已经得到了ABT-199小鼠很广泛的应用,也产生了很多的分支,其中高效液相色谱在分离外消旋体时显示出了独特的优势。纤维素和直链淀粉衍生物作为手性固定相一直是手性分离工作者研究的重点。其中纤维素和淀粉苯基氨基甲酸酯是分离效果最好和分离对映体最多的多糖衍生物,除上述被人熟知的多糖手性固定相之外,多糖如甲壳素,壳聚糖,也被用作手性材料且表现出一定的手性分离能力。对其它多糖的开发与利用拓宽了手性材料的领域,为后续寻找其它的手性材料奠定了理论和实验基础。魔芋葡甘聚糖(KGM)作为一种天然多糖,已经在医药,食品等各个领域被相继开发和利用且展现出其独特的优良特性,但是作为手性固定相却鲜有报道。KGM相对于纤维素和直链淀粉等多糖来说水溶性良好,它是由葡萄糖和甘露糖通过β-1,4糖苷键连接而成,每个葡萄糖和甘露糖都有三个手性碳原子,为识别手性化合物创造了手性环境。综合以上要点,KGM是一种潜在的手性分离材料。本论文以KGM为原料通过化学改性,均相合成了系列涂敷型魔芋葡甘聚糖高效液相色谱手性固定相(HPLC-CSP),并测试了其手性分离性能。验证了其作为潜在手性分离材料的可能性。以丙烯酰胺为醚化剂在碱性条件下合成了羧乙基魔芋葡甘聚糖(AMKGM)。将其涂敷于3-氨丙基硅烷化硅胶表面制成羧乙基魔芋葡甘聚糖固定相。利用傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)、X-射线衍射仪、热重分析仪对其进行表征。以正己烷/异丙醇为流动相,用10种手性药物测试了其分离能力,发现对其中的7种手性化合物有分离效果,且对其中的两种手性化合物达到了基线分离。以甲醇为流动相,用12种氨基酸对映体测试其分离能力,发现对其中的8种氨基酸对映体有分离效果。以丙烯腈为醚化剂在碱性条件下合成了氰乙基魔芋葡甘聚糖(ANKGM)。将其涂敷于3-氨丙基硅烷化硅胶表面制成氰乙基魔芋葡甘聚糖固定相。利用傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)、X-射线衍射仪、热重分析仪对其进行表征。以正己烷/异丙醇为流动相,用10种手性化合物测试了其拆分能力。发现对其中的4种手性化合物有分离效果,且对更多其中Software for Bioimaging的两种手性化合物达到了基线分离。以环氧乙烷为醚化剂在碱性条件下合成了羟乙基魔芋葡甘聚糖(EOKGM)将其涂敷于3-氨丙基硅烷化硅胶表面制成羟乙基魔芋葡甘聚糖固定相。利用傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)、X-射线衍射仪、热重分析仪对其行表征,以正己烷/异丙醇为流动相,用10种手性化合物测试了其拆分能力。发现对其中的4种手性化合物有分离效果,且对其中的两种手性化合物达到了基线分离。以环氧丙烷为醚化剂在碱性条件下合成了羟丙基魔芋葡甘聚糖(POKGM)。将其涂敷于3-氨丙基硅烷化硅胶表面制成羟丙基魔芋葡甘聚糖手性固定相。利用傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)、X-射线衍射仪、热重分析仪对其进行表征,以正己烷/异丙醇为流动相,用10种手性化合物测试了其拆分能力。结果表明对其中的4种手性化合物有分离效果,且对其中的两种手性化合物达到了基线分离。以正己烷/异丙醇为流动相,测试了松香基色谱柱对10种手性化合物的拆分能力,结果表明对其中的3种手性化合物有拆分效果。以甲醇为流动相,测试了松香基色谱柱对12种氨基酸对映体的拆分能力,结果表明对其中的4种氨基酸有拆分效果,且对其中的3种氨基酸对映体达到了基线分离。

背景与目的：ATP结合盒（ABC）转运蛋白家族的成员ABCA5在多种肿瘤中发挥着重要的作用。然而，ABCA5在胰腺癌中的研究尚不清楚。因此，本研究通过生物信息学分析及临床样本验证，探讨ABCA5在胰腺癌中的表达及与患者预后的关系，同时对ABCA5在胰腺癌中的可能作用机制进行分析。方法：使用TCGA和GEO数据库，分析ABCA5在胰腺癌组织及正常组织中的表达情况，并用KaplanMeier方法绘制生存曲线，Cox比例风险模型进行单因素与多因素分析。采用免疫组织化学法检测65例胰腺癌组织和癌旁组织中ABCA5的表达，并分析其与预后及胰腺癌临床病理特征的关系。使用TIMER、STRING和Gene MANIA数据库对ABCA5与免疫细胞浸润、蛋白互相作用网络（PPI）和基因-基因互作网络进行分析。利Shell biochemistry用基因富集分析（GSEA）和相关性分析对ABCA5在胰腺癌中可能参与的信号通路及其可能的作用机制进行探索。通过癌症药物敏感性基因组学（GDSC）分析ABCA5与治疗药物敏感性的关系。结果：在TCGA和GEO数据集中，ABCA5在胰腺癌组织中的表达明显低于正常组织（均P<0.05）。在TCGA和GSE62452数据集中，ABCA5低表达的患者生存时间明显缩短（均P<0.05);ABCA5的表达是胰腺癌患者预后的独立影响因素（HR=0.458,P=0.001;HR=0.439,P=0.017）。65例临床病例分析显示，ABCA5在癌组织与癌旁组织相比处于低表达水平，且ABCA5低表达患者的预后更差（均P<0.05），单因素与多因素Cox回归分析表明ABCA5的表达是胰腺癌患者预后的独立影响因素（HR=0.327,P=0.032）。TIMER数据库结果显示，ABCA5表达与免疫浸润密切相关。PPI蛋白互作网络显示，有14个与ABCA5相关的互作蛋白；基因-基因互作关系网络图得到20个与ABCA5相关的互作基因。基因富集分析与相关性分析结果显示，ABCA5在胰腺癌中可能与细胞周期和铁Liraglutide抑制剂死亡有关。ABCA5高表达患者对5种治疗药物的IC_(50)明显低于ABCA5低表达患者（均P<0.05）。结论：ABCA5在胰腺Crizotinib小鼠癌组织中低表达并与患者不良预后相关，其表达水平是胰腺癌患者预后的独立影响因素，ABCA5在胰腺癌中的作用机制可能与细胞周期、免疫调节和铁死亡有关。

本实验旨在研究lncRNA在地方品种苏姜猪不同生长发育阶段的差异表达及其与脂肪沉积的关系。选择1、3、6、8月龄（M1、M3、M6、M8）4个生长时期苏姜猪背膘组织进行转录组测序，分别筛选4个阶段差异表达lncRNA，对4个阶段共同差异表达lncRNA进行顺式和反式靶基因预测，并对medial ulnar collateral ligament其进行GO功能和KEGGGNE-140生产商通路富集分析，最后利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术验证转录组测序结果。本研究共鉴定出134个共同差异表达lncRNA，功能富集显示，不同阶段共同差异表达的lncRNA的靶基因显著富集于基因表达、脂肪代谢、细胞核及发育过程等GO条目中；KEGG分析表明，共同差异表达lncRNA的靶基因主要富集在胰岛素信号通路、MAPK信号通路、钙沉积通路、脂肪酸生物合成、PI3K-Akt信号通路和磷脂酶D信号通路等。通过qRT-PCR验证发现，定量结果和测序结果基本一致。本研究分析了苏姜猪在不同生长阶段lncRNA的表达谱差异，为进一步研究lncR购买RapamycinNA在苏姜猪不同生长阶段脂肪发育的调节机制奠定了重要基础。

目的 探究雌二醇片/雌二醇地屈孕酮片对围绝经期综合征患者的疗效及性激素的影响,为提升该疾病的临床治疗效果提供依据。方法 选取昆山宗仁卿纪念医院2021年3月至2022年9月收治的86例围绝经期综合征患者,根据治疗方式分为两组。对照组患者(43例)采用戊酸雌二醇片治疗,观heterologous immunity察组患者(43例)采用雌二醇片/雌二醇地屈孕酮片复合包装治疗,均持续治疗3个疗程(每28 d为1个疗程)。对比两组患者临床疗效,治疗前后性激素水平、改良更年期综合征自我诊断评定表(KNirogacestat化学结构upperman)评分、生活质量评分变化,以及不良反应、子宫内膜增生过长的发生情况。结果 观察组患者治疗总有效率为95寻找更多.35%(41/43),高于对照组的72.09%(31/43);观察组不良反应总发生率、子宫内膜增生过长发生率均低于对照组;与治疗前比,治疗后两组患者血清雌二醇(E_2)水平均升高,且观察组更高;血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平均降低,且观察组更低;治疗后两组患者改良Kupperman评分与围绝经期综合征生存质量表(MENQOL)评分均降低,且观察组更低(均P<0.05)。结论 围绝经期综合征患者使用雌二醇片/雌二醇地屈孕酮片治疗效果更佳,可改善患者生活质量,降低雌激素持续作用于子宫内膜增加增生或致癌的风险,安全性较高,且疗效显著。

成熟的卵母细胞与获能的精子融合后形成受精卵,代表着人类生物学生命的开始,随后受精卵经历几次连续的的有丝分裂和分化形成囊胚,植入子宫以建立正常妊娠,以上任何过程发生异常均可导致不孕。近年来曾先后报道多个导致人卵母细胞成熟障碍、受精障碍、早期胚胎发育阻滞等不孕类型的致病基因,但是受精卵分裂障碍(卵裂障碍)患者的致病基因鲜有报道,更无有效治疗方法。为鉴定患者卵裂障碍的致病基因并解析其致病机制,本研究第一章中,我们收集卵裂障碍的不孕患者和家系进行全外显子组测序,经过系列位点筛选与验证后,鉴定到CHK1基因的致病突变;深入机制研究表明这些突变可能影响CHK1蛋白结构,改变蛋白核质定位,导致CHK1激酶活性升高,通过CDC25C/CDK1通路引起细胞周期阻滞,从而使患者表现为卵裂障碍,这为卵裂障碍患者的诊断提供了新的分子靶标。考虑到携带CHK1致病突变的患者还伴有明显的原核核膜破裂障碍,为深入探讨其可能机制,本研究第二章中,我们通过患者受精卵的核Protein Analysis质互换与单细胞转录组测序分析发现CHK1突变受精卵内F-肌动蛋白网络破坏,突变CHK1蛋白可能通过改变与MICAL3蛋白之间的互作而影响后者的酶活从而导致F-肌动蛋白解聚,影响原核核膜破裂,这为哺乳动物受精卵原核核膜破裂的调控阐明了具体机理。明确致病机理后,为探索该类卵裂障碍患者可能的治疗策略,本研究第三章中,应用了一种CHK1蛋白的抑制剂——PF477736来抑制CHK1突变蛋白增高的激酶活性,小鼠携带突变的受精卵应用PF477736处理后发育成囊胚并能产生健康后代,患者突变受精卵应用PF477736后同样可以获得优质且有发育潜能的囊胚,这为携带CHK1基因突变不孕患者的治疗提供了有效干预手段。第一章 CHK1突变导致患者卵裂障碍的致病机制目的通过辅助生殖技术所获得的胚胎有很大一部分比例阻滞在早期胚胎发育阶段,其中受精卵阶段发育阻滞被称为“卵裂障碍”。卵裂障碍患者经过多周期的体外助孕治疗均无法获得可移植胚胎,但其病因机制不清,本章研究旨在深入挖掘其遗传病因并解析具体致病机制。方法为了阐明卵裂障碍罕见患者的遗传病因,我们收集了 2013年至2018年从我院行体外助孕的29例卵裂障碍患者(原核大都不消失)与其家系的外周血。首先,进行患者全外显子组测序,通过生信分析方法过滤和筛选可能的致病位点,将候选位点在300例正常对照女性中进行验证。其次,为明确最终筛选出的CHK1突变的致病性,通过小鼠受精卵显微注射过表达CHK1突变模拟患者卵裂障碍表型。为初步研究CHK1突变对蛋白功能的影响,我们利用同源建模构建了突变蛋白的结构模型并利用蛋白免疫荧光检测了其在细胞内的定位。再次,为深入研究CHK1突变导致患者卵裂障碍的机制,我们利用蛋白激酶活性检测技术检测了突变CHK1蛋白的活性,并通过蛋白免疫印迹检测了其下游细胞周期因子CDC25C与CDK1的磷酸化水平。最后,为验证CDC25C/CDK1通路在CHK1突变导致卵裂障碍中的重要作用,我们通过点突变技术将CDC25C与CDK1的关键磷酸化位点突变,而后与CHK1突变一起通过显微注射的方式在小鼠受精卵内过表达,观察其对受精卵分裂的影响。结果1.卵裂障碍患者CHK1致病突变的鉴定我院病例系统记录了一个有三位不孕女性的较大家系,家系先证者在我院行三个周期的助孕治疗均无法获得可移植胚胎;当正常对照受精卵发育到8细胞阶段时,患者受精卵分裂受阻且大部分受精卵仍可见清晰原核;患者的姐姐和一个姑姑同样有相似不孕症病史,呈现常染色体显性遗传模式,我们随后对家系中的先证者与两个正常对照女性进行了全外显子组测序。经过严格的位点筛选与验证,最终定位到CHK1基因的一个突变(p.R379Q)。接下来,我们在另外26位表现为受精卵阻滞且伴明显原核的患者中又发现了另外了三个CHK1突变(p.F441fs*16,p.R442Q,p.R420K),并分别追踪到三个家系,其突变率在患者中可达到24%。这四个遗传或新发的CHK1突变在我院300例正常对照女性中均不存在,经软件(SIFT、Polyphen、MutationTaster)预测有害性高,ACMG评分均为可能致病,在公共数据库中未见报道,并且突变对应的氨基酸残基在各个物种间高度保守。2.小鼠受精卵携带CHK1突变可模拟患者卵裂障碍卵母细胞与植入前早期胚胎的免疫印迹和定量PCR等结果显示CHK1在人和小鼠的受精卵和2-细胞阶段高表达,提示其在受精卵阶段可能发挥重要作用。过表达突变型CHK1的小鼠受精卵卵裂率显著低于过表达野生型CHK1的受精卵,尤其以截短突变组最为显著;而且,当表达野生型CHK1的受精卵发育到2细胞阶段时,各突变组受精卵仍不分裂且可见清晰原核,这与携带CHK1突变患者的表型一致。3.突变CHK1蛋白的结构与核质定位改变CHK1突变蛋白同源建模显示,除外截短突变可导致明显的蛋白截短外,错义突变R379Q与R442Q改变了与周围氨基酸残基间的氢键连接;同时由于氨基酸性质的改变,突变还会影响蛋白表面电势。野生型CHK1蛋白以核内定位为主,突变型CHK1胞质定位信号增强,其中截短突变以胞质定位为主。CHK1的这四个致病突变位于CHK1 C-端的保守基序内,并分别定位于其出核信号与核定位信号区。用出核转运抑制剂将出核信号抑制后发现,除外截短突变仍保持胞质定位外,其余各组错义突变均恢复核定位,表明这些突变定位的改变是由于出核信号或核定位信号的破坏,CHK1突变后核质定位的改变可能影响其生物学功能。4.CHK1突变通过CDC25C/CDK1通路导致卵裂障碍激酶活性检测显示突变各组CHK1激酶活性增加,酶活增高的突变CHK1可引起抑制性磷酸化的CDC25C和CDK1的表达增高;CDC25C与CDK1关键的磷酸化位点分别突变失活后突变受精卵的卵裂率明显升高。综上,CHK1蛋白突变后激酶活性活性升高,通过CDC25C/CDK1通路导致卵裂障碍。结论我们在四个独立家系中分别发现了四个CHK1基因的遗传或新发杂合致病突变,并且小鼠受精卵过表达CHK1突变可模拟患者卵裂障碍的表型。深入机制研究发现这四个CHK1突变改变了蛋白构象,影响CHK1在细胞内的定位,导致蛋白激酶活性增高并通过下游CDC25C/CDK1通路引起卵裂障碍。本章的研究为卵裂障碍型不孕症患者的诊断提供了新的分析靶标,并解析了具体致病机制。第二章 CHK1突变影响受精卵原核核膜破裂的机制目的哺乳动物受精卵原核核膜破裂是成功启动第一次有丝分裂的重要保证,但其调控机制仍不明确。携带CHK1突变的患者发育阻滞的受精卵还伴有明显的原核核膜不破裂现象,本章的研究旨在解析CHK1调控受精卵原核核膜破裂的具体分子机制。方法鉴于突变CHK1蛋白的胞质定位增强,为明确突变是否主要影响受精卵胞质内的生物学事件,我们首先利用前原核移植技术对患者突变的受精卵与正常供体受精卵进行核质互换,并观察患者核质互换后受精卵的发育情况。接下来,为研究CHK1突变影响的关键生物学过程或通路,我们收集患者捐科研的受精卵进行S63845 IC50单细胞转录组测序分析。鉴于转录组测序结果提示患者受精卵细胞骨架成分改变,随后利用过表达突变的小鼠受精卵验证关键细胞骨架成分F-肌动蛋白对原核核膜破裂的调控作用。随后,为探索CHK1突变具体如何调控受精卵内F-肌动蛋白的解聚,我们通过免疫共沉淀、邻位连接、蛋白-蛋白分子对接等技术鉴定CHK1在受精卵内的互作底物并检测突变对底物互作的影响。而后,利用单分子荧光共振能量转移、过氧化氢产量检测、F-肌动蛋白解聚速率测定等技术检测了突变CHK1蛋白对其底物MICAL3的酶活影响。最后,为进一步验证MICAL3在介导CHK1调控原核核膜破裂过程中的重要作用,利用MICAL3的抑制剂处理突变受精卵观察卵裂情况与胚胎发育情况。结果1.患者突变受精卵胞质替换成正常胞质后可发育成囊胚用正常受精卵胞质替换突变受精卵胞质后可使突变原核与正常胞质组成的重构受精卵成功发育到囊胚,而突变胞质与正常原核组成的重构受精卵则不能发育;且可将重构囊胚建成具有多能性、基因组倍性完整的胚胎干细胞系,提示突变对胞质影响更大。2.突变CHK1蛋白可能通过促进F-肌动蛋白解聚而影响原核核膜破裂患者受精卵单细胞转录组结果提示突变造成细胞骨架通路改变。鉴于小鼠受精卵过表达CHK1突变后核膜同样不破,与患者表型一致。我们随后通过小鼠受精卵显微注射观察突变受精卵F-肌动蛋白的表www.selleck.cn/products/Lapatinib-Ditosylate达,结果显示突变受精卵F-肌动蛋白的表达水平明显降低。抑制F-肌动蛋白和微管蛋白的组装均可使受精卵发育阻滞,但仅抑制F-肌动蛋白组装可阻碍受精卵原核核膜破裂,表明CHK1突变受精卵可能通过调控F-肌动蛋白的组装或解聚而影响原核核膜的破裂。3.突变CHK1蛋白可改变与MICAL3的互作通过体外受精收集6000颗小鼠受精卵进行免疫共沉淀与质谱检测鉴定到了 CHK1的互作底物MICAL3,并且MICAL3主要定位在卵母细胞和HEK-293细胞的细胞质内。我们进一步通过细胞系免疫共沉淀、细胞系和人卵与胚胎的邻近连接等技术验证了CHK1与MICAL3间的互作。随后蛋白同源建模与单分子荧光共振能量转移实验证实,突变后CHK1的“自我抑制”构象破坏。进一步使用蛋白-蛋白分子对接、蛋白免疫共沉淀技术发现构象破坏的突变CHK1改变了与MICAL3之间的互作。4.突变CHK1蛋白通过增加MICAL3酶活促进F-肌动蛋白解聚MICAL家族属于单加氧酶,可介导肌动蛋白纤维氧化解聚,我们的结果显示突变CHK1蛋白可增强MICAL3活性,促进F-肌动蛋白解聚。此外,应用MICAL3抑制剂EGCG抑制MICAL3活性,可使突变受精卵恢复卵裂并发育至囊胚。结论将CHK1突变患者受精卵前原核转移入正常去核受精卵胞质后,可获得发育正常的囊胚,提示突变可能严重破坏了胞质内的生物学事件。深入研究表明CHK1突变通过破坏受精卵内F-肌动蛋白网络而影响原核核膜破裂过程。进一步研究发现CHK1可与受精卵内的MICAL3互作,并且构象改变的CHK1突变增加了 MICAL3的活性,从而降低小鼠受精卵胞质内F-肌动蛋白的聚集网络。本章的研究为哺乳动物受精卵原核核膜破裂这一重要生物学过程的调控机制提供了理论依据。第三章 应用CHK1抑制剂探索卵裂障碍患者的干预策略目的卵裂障碍患者目前无有效的治疗方法,明确了其遗传病因与具体发病机制后,深入挖掘其潜在的治疗策略有望造福该类不孕症患者。本章的研究旨在探索卵裂障碍患者的干预措施,并验证其有效性与安全性。方法为了初步测试CHK1抑制剂PF477736是否可使携带CHK1突变的受精卵正常分裂,我们首先利用已报道的作用浓度处理突变小鼠受精卵并观察其卵裂情况;随后利用不同浓度的PF477736处理并观察突变受精卵的囊胚发育情况以测试最佳作用浓度,并通过胚胎移植技术检测抑制剂处理后的胚胎是否能发育成正常后代。为进一步检测抑制剂对患者受精卵的挽救效果,我们接下来首先利用患者在体外培养了三天但仍不分裂的受精卵测试PF477736的药效;而后进一步在患者新鲜受精卵体外培养的过程中加入PF477736观察其能否发育成囊胚;最后为测试抑制剂处理所获囊胚的发育潜能,我们将其构建成胚胎干细胞系并通过免疫荧光、全基因组拷贝数分析和基因型鉴定进行检测。结果1.CHK1抑制剂使携带突变的小鼠受精卵发育成囊胚并产生后代鉴于突变CHK1酶活增高,我们尝试应用CHK1抑制剂PF477736进行挽救实验。与预期一致,PF477736可以降低突变CHK1下游CDC25C/CDK1磷酸化蛋白的水平。初步测试发现,PF477736可显著提高各突变受精卵的卵裂率。随后,利用过表达CHK1突变的小鼠受精卵探索到PF477736的最佳作用浓度(10nM),在该浓度下小鼠突变受精卵可发育成基因组倍性完整的囊胚,并产生健康后代。2.CHK1抑制剂使患者受精卵发育成优质且有发育潜能的囊胚患者体外发育阻滞而后冻存的的受精卵,解冻后应用PF477736处理可发生卵裂;随后我们对患者捐赠的新鲜受精卵应用PF477736处理,值得庆幸的是,患者捐赠的5颗受精卵中有2颗发育成优质囊胚,并且这些囊胚建成了基因组倍性完整且具有多能性的胚胎干细胞系,这为该类患者的精准治疗提供了有效方法。结论使用CHK1抑制剂有效地挽救了突变所致的小鼠和患者受精卵阻滞表型,并可产生具有良好发育潜能的囊胚。本章的研究为这种疾病的精准治疗提供了有效方法。

目的 分析2020年上海市市售食品中单核细胞增生李斯特菌（listeria monocytogenes,LM）的基因分型特征。方法 采用脉冲场凝胶电泳（plused-field gel electrophoreisi,PFGE）和全基因组测序（whole genome sequencing,WGS）对2020年所获得的62株菌株进行分析。结果 62株单核细胞增生李斯特菌的PFGE聚类分析得到17种型别，1型为优势带别，通过MRTX849全基因组测序数据分析多位点序列分型（multilocus sequence typing,MLST）得到12种序列型（sequence type,ST）型、ST9为优势型别，均携带磷霉素抗性基因（fosfomycin antibiotic gene,fosX）、毒力岛1(listeria pathogenicity island-1,LIPI-1)、毒力岛2(listeria pathogenicity island-2,LIPI-2)、毒力岛3(listeria pathogenclinicopathologic featureicity island-3,LIPI-3)及其他毒力基因，部分菌株携带氨基糖苷类抗性基因（aminoglycoside antibiotic gene,ANT(6)-la）、大环内酯类抗性基因（macrolide antibiotic gene,ErmB）、甲氧苄氨嘧啶抗性基因（trimethoprim resistant gene,dfrG）、四环素抗性基因（tetracycline resistant gene,tetM）、林可酰胺抗性基因（lincosamide antibiotic gene,lin）、氯霉素抗性基此网站因（chloramphenicol antibiotic gene,cat）等，出现对四环素、氯霉素、红霉素耐药的菌株，血清型分布为1/2a、1/2b、1/2c和4b型。结论 2020年上海市市售食品中食源性单增李斯特菌的分子分型具有多态性，存在多种致病型别，同源性比较效果MLST>PFGE>血清型，携带多种毒力基因，部分菌株出现耐药特征。

背景:糖尿病(diabetes mellitus,DM)可引起心肌细胞损伤,导致糖尿病性心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM),目前仍缺乏特异性治疗。研究表明大量的糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)、活性氧((Reactive oxygen species,ROS)的生成以及脂类的异常累积在DCM发生发展过程中起着重要作用,特别是脂质过氧化和炎症反应贯穿疾病全程,脂质过氧化及炎症反应可诱发细胞发生一种新型的非调节性细胞死亡方式—铁死亡(Ferroptosis)。铁死亡如不能Biodiesel Cryptococcus laurentii及时得到抑制,最终引起更显著的氧化应激和铁过载,从而加重DCM。因此,靶向抑制铁死亡可能是改善DCM的重要手段之一。既往研究表明,核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)能通过参与调节抗氧化基因谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达,从而抑制铁死亡。姜黄素(curcumin)作为一种抗氧化剂,可通过Nrf2/HO-1通路起到抗炎、抗氧化作用,对于心血管有保护作用。基于以上研究背景,此研究旨在:以DCM小鼠为动物模型,探讨姜黄素抑制铁死亡过程改善DCM的作用机制,为DCM的治疗提供新的理论基础。方法:把24只小鼠共分为4组,每组6只小鼠,分别为空白组(A组)、DCM组(B组)、DCM小鼠低剂量姜黄素干预组(C组)及DCM小鼠高剂量姜黄素干预组(D组)。姜黄素干预结束后,采集小鼠静脉血检测血清中TG、LDL-C、LDH、CK-MB、c点击此处 TnⅠ、MDA、Fe2+、SOD、GSH-Px水平;并通过心脏超声观察小鼠心脏结构功能。随后剥离小鼠心脏组织,使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌细胞中LDH、MDA、SOD、Fe~(2+)及ROS含量;利用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测GPX4、Nrf2及HO-1蛋白表达水平。将心肌组织进行石蜡包埋切片,使用HE染色和TUNEL染色观察心室肌细胞凋亡状况;通过透射电镜观察心肌细胞微结构线粒体形态学变化。结果:和空白组相比,各实验组心肌细胞凋亡显著增加,心脏结构发生改变,心室泵血功能下降,伴随着CK-MB、c TNT、LDH、MDA、ROS及Fe~(2+)含量的升高,SOD、GSH-Px降低;同时,实验组Nrf2、HO-1及GPX4蛋白表达均有所降低(P<0.05);B组与C、D组比较,后两者上述指标均得到改善,且以D组为甚;在对照组中小鼠心肌细胞线粒体结构基本正常,未见明显线粒体嵴断裂,未见线粒体内外膜消失,DCM组小鼠心肌细胞发生形态学改变,包括线粒体变小,膜密度增高,线粒体皱缩,线粒体嵴减少或消失,而姜黄素组则有不同程度的改善。结论:姜黄素通过抑制心肌细胞铁死亡对DCM小鼠具有一定保护作用,可以改善3-MA分子式心脏组织病理损伤,减少心肌细胞的病理性死亡,这可能与激活Nrf2/HO-1/GPX4通路有关。

<正>地质调查是地质科技创新的源头。2Erdafitinib化学结构022年，中国地质调查局在圆满完成地质调查任务的同时，在地质科技创新领域也取得了众多新进展。2023年1月，经专家评审，推出了中国地质调查局、中国地Automated medication dispensers质科学院2022年度地质调查十大进展和地质科技十大进展。因篇幅所限，现介绍地质科技十大进展如下，以飨读者（地质调查十大进展已在本刊2023年第2期介绍）。一、我国首套三轴稳定平台航空重力测量系统成功研发并应用研制出具有自主知识产权的三轴稳定平台式航空重力仪，实现了“角秒级”极高平台稳定精度，领先于国外同类产品；攻克航空重力测量微弱信号提取方法等核心技术，成为国内三轴稳定平台式航空重力数据处理技术“领跑者”；解决了宽频减振、质量控制等技术难题；基于直Adezmapimod价格升机等平台成功集成了航空重力/重磁勘查系统，成为继俄罗斯、加拿大之后世界上第3家突破0.6 mGal精度的系统。完成单位：中国自然资源航空物探遥感中心，北京自动化控制设备研究所；首席专家：周锡华、周道卿、胡平华等。

背景:皮肤损伤后易受细菌感染,这不仅会延长伤口的愈合时间,还可能导致其他严重问题,如全身感染、败血症、器官衰竭,甚至死亡。糖尿病患者由于自身免疫系统紊乱,更易遭受细菌感染。在这些感染中,皮肤伤口感染最为常见。金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌是从糖尿病足部感染中分离出来的最常见病原体,与伤口愈合时间密切相关。随着耐药菌株(如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)的不断出现,治疗感染变得越来越困难。此外,炎症也是延缓伤口愈合的关键因素之一。巨噬细胞是免疫系统中重要的成员,由于炎症刺激而分化为M1型巨噬细胞,这种细胞会释放大量的促炎性物质,如肿瘤坏死因Berzosertib纯度子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6),从而延缓伤口的愈合。传统抗生素在一定程度上可以减缓细菌感染的进展,但过度使用抗生素会导致细菌耐药现象的普遍存在。因此,需要新型的治疗方法和概念来治疗伤口感染,包括控制高血糖、预防感染和调节伤口微环境。近年来,生物相容性多功能水凝胶被广泛用于治疗受感染的伤口。水凝胶的多孔结构、适当的膨胀率、高含水量、较好的理化性质和药理活性使其能够吸收伤口渗出物,保持水分平衡,抑制细菌感染以及缓解炎症反应,从而有利于加速伤口的愈合。此外,水凝胶还可以用作细胞因子、间充质基质细胞、细胞外囊泡等功能分子的载体,以促进伤口修复。近年来,越来越多的天然药物分子被用于制备水凝胶。与传统水凝胶相比,天然药物分子衍生的水凝胶最大优点是,它不仅可以作为凝胶的框架,还具有内在的药理活性。但是,利用天然药物分子设计水凝胶仍然是一项非常复杂、充满挑战的任务,因为通常需较高浓度的天然药物才能形成自组装的水凝胶,而这样往往会导致不可避免的细胞毒性。因此,如何在较低浓度下构建天然药物分子自组装多功能水凝胶并成功应用于感染性伤口的治疗,是一个值得深入研究的问题。基于上述背景,本论文以甘草酸(GA)、氯化亚铁(FeCl2)和硫化钠(Na2S)为研究对象,首先,GA在较低浓度条件下,可通过金属配位作用,组装形成Fe2+/GA水凝胶。实验详细研究了 Fe2+/GA水凝胶的形貌、结构、抗菌和抗炎活性,以及Fe2+/GA水凝胶对小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)增殖和迁移的影响。同时本文评价了 Fe2+/GA水凝胶在细菌感染的小鼠皮肤伤口模型中的治疗效果。其次,为了进一步提高GA水凝胶的抗菌及抗炎活性,在Fe2+/GA体系中引入硫化钠(Na2S),原位合成了 FeS/GA水凝胶。实验详细研究了 FeS/GA水凝胶的形貌、结构、抗菌活性和作用机制,以及FeS/GA水凝胶对巨噬细胞极化的调控和对小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)增殖和迁移的影响,同时本文还评价了 FeS/GA水凝胶在细菌感染的糖尿病小鼠皮肤伤口模型中的治疗效果。期望通过本文的开展,研发天然小分子水凝胶敷料提供新思路和策略。目的:(1)在较低浓度的GA条件下,利用GA与Fe2+之间的配位作用,组装形成Fe2+/GA水凝胶,探究其抗菌和抗炎活性以及在小鼠感染伤口中的愈合情况。(2)在GA水凝胶中原位合成FeS纳米颗粒,构建FeS/GA水凝胶,探究其抗菌和免疫调节作用及对糖尿病小鼠感染伤口的治疗效果。方法:第一章:亚铁诱导甘草酸水凝胶的形成用于促进金黄色葡萄球菌感染的伤口愈合本章成功构建了 Fe2+/GA水凝胶。首先,采用扫描电子显微镜(SEM)及旋转流变仪对Fe2+/GA水凝胶进行表征。接着,研究了 Fe2+/GA水凝胶的抗菌活性及机理,包括平板计数、细菌形态观察、激光共聚焦拍摄、水凝胶中GA和Fe2+的累积释放量的测定、水凝胶中Fe价态的测定、细菌内丙二醛(MDA)含量和活性氧(ROS)的检测以及细菌核酸降解情况分析。随后,研究了 Fe2+/GA水凝胶的抗炎活性,包括酶联免疫吸附剂(ELISA)测定和Western blotting(WB)分析。此外,通过MTT法和划痕实验评估了 Fe2+/GA水凝胶对小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)的增殖和迁移的影响。最后,在对Fe2+/GA水凝胶的生物安全性评价之后,构建了金黄色葡萄球菌感染的小鼠皮肤伤口模型,综合评价了 Fe2+/GA水凝胶的体内抗菌、抗炎作用及促进伤口愈合效果。第二章:原位合成硫化亚铁/甘草酸水凝胶用于促进耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的糖尿病伤口愈合本章在Fe2+/GA体系中,通过引入硫化钠(Na2S),利用Fe2+与S2-之间的反应,原位合成FeS/GA水凝胶。实验采用透射电子显微镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)和旋转流变仪对FeS/GA水凝胶进行表征,并通过X射线衍射光谱(XRD)分析其组成和结构。随后,研究了 FeS/GA水凝胶的抗菌活性及机理,主要包括平板计数、细菌形态观察、激光共聚焦拍摄、水凝胶中GA、Fe2+和H2S的累积释放量的测定、水凝胶中Fe价态的测定、细菌内脂质过氧化的测定、细菌内活性氧(ROS)的检测、细菌核酸降解、细菌内谷胱甘肽(GSH)和ATP含量的测定。此外,采用流式细胞术评价了FeS/GA水凝胶对巨噬细胞极化的调控,并通过MTT法和划痕实验评估了 FeS/GA水凝胶对小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)的增殖和迁移的影响。最后,在对FeS/GA水凝胶的生物安全性评价之后,构建耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的糖尿病小鼠皮肤伤口模型,评价了 FeS/GA水凝胶对糖尿病伤口感染的治疗效果。结果:第一章:本章制备的Fe2+/GA水凝胶具有均匀和相互连接的多孔微观结构。流变学分析结果表明,Fe2+/GA水凝胶具有良好的稳定性、可注射性和自愈合性能。抑菌实验结果表明,Fe2+/GA水凝胶对金黄色葡萄球菌(S.aureus)和大肠杆菌(E.coli)均有显著的抑制作用。抗菌机制研究表明,Fe2+/GA水凝胶主要通过持续释放Fe2+,导致细菌内ROS的过量产生和脂质过氧化反应的发生,从而触发细菌中DNA的降解,导致细菌的死亡。此外,GA可以提供一个还原环境,防止Fe2+氧化为Fe3+,从而保持水凝胶的抗菌活性。Fe2+/GA水凝胶可以通过下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞中NF-κB信号通路来缓解炎症反应,并显著促进小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)的增殖和迁移。通过金黄色葡萄球菌感染的小鼠皮肤伤口模型的实验证明,Fe2+/GA水凝胶具有良好的生物相容性,并能有效杀死细菌,加速伤口愈合。第二章:本章通过原位合成FeS/GA水凝胶,其水凝胶中的FeS纳米颗粒呈现出均匀的球形形态,尺寸约为800 nm。从扫描电子显微镜图像中可见,水凝胶具有均匀且相互连接的微观结构,并且在表面观察到FeS小颗粒。流变学分析结果表明,FeS/GA水凝胶具有良好的稳定性、可注射性和自愈合性能。抑菌实验结果表明,FeS/GA水凝胶对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)和大肠杆菌(E.coli)ABT-263研究购买均有显著的抑制效果。抗菌机制研究表明,除了 GA本身抗菌作用外,FeS/GA水凝胶可持续释放Fe2+,导致细菌内ROS的过量产生、脂质过氧化反应的发生和细菌内谷胱甘肽含量的消耗,从而触发细菌中DNA的降解,进而导致细菌发生铁死亡。同时,水凝胶中硫化氢(H2medical testingS)的释放,可抑制细菌的能量代谢。铁死亡与能量代谢干扰的相互协同可快速杀死细菌。此外,FeS/GA水凝胶可有效调节巨噬细胞的M1/M2表型,并显著促进小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)的增殖和迁移。经耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的糖尿病小鼠皮肤伤口模型实验证明,FeS/GA水凝胶具有良好的生物相容性,能有效杀死耐药细菌,加速伤口愈合和血管生成。

西兰花(Brassica oleracea var.italica)为十字花科芸薹属甘蓝变种,20世纪初从意大利引入在我国栽培历史悠久。它营养成分丰富,具有“蔬菜皇冠”的美称。然而西兰花往往是在它的萼片开口之前收获的,而此时的西兰花还不成熟。在西兰花的生长过程中,过早采收西兰花可能会加速其衰老,从而导致小花变黄,严重影响了西兰花的视觉质量和商品价值。二氧化氯是一种黄绿色带有刺激性气味的气体,其氧化能力是氯气的2.5倍。由于其杀菌能力强并且不会产生大量有毒副产品,常用于公共水处理设施和造纸厂的消毒杀菌。然而关于二氧化氯处理对采后西兰花的黄化的影响研究还比较少。基于此本文采用对照(蒸馏水)及50 mg/L、100 mg/L、150 mg/L二氧化氯对西兰花浸泡处理,在10℃下贮藏,初步探究二氧化氯处理对西兰花表观和营养品质的影响。随后再通过对0 d西兰花鲜样,贮藏3 d对照处理西兰花和贮藏3 d 100mg/L二氧化氯处理西兰花进行转录组测序分析筛选出二氧化氯延缓西兰花黄化的关键通路和差异基因,为二氧化氯延缓西兰花黄化提供依据。最后探究二氧化氯处理对西兰花叶绿素降解的影响,深入研究二氧化氯处理延缓西兰花黄化的机理。主要结果如下:(1)二氧化氯处理可以有效抑制失重率、L~*值、a~*值、b~*值和电导率的上升,防止丙二醛的积累,同时有效维持其可溶性固形物、Vc、总酚、类黄酮和叶绿素含量,提高过氧化物酶和过氧化氢酶活性,更好地保持西兰花的采后品质和营养价值,研究结果表明100 mg/L二氧化氯处理保持西兰花品质、延缓西兰花黄化效果最佳。(2)转录组测序获得了69.09 Gb高质量数据集,在贮藏3 d的对照西兰花和贮藏3 d的二氧化氯处理西兰确认细节花的差异基因表达分析统计结果中,产生了5710个差异表达的基因,其中有2692个基因表达上调,3018个基因表达下调。对其进行GO富集分析,表明差异基因主要参与的途径是细胞部分、结合和细胞过程等。此外对差异基因进行KEGG富集分析结果表明,在第三组(CK-3 vs Cl Biostatistics & BioinformaticsO_2-3)中鉴定出差异基因显著富集在核糖体、光合作用-触角蛋白、光合作用、MAPK信号通路-植物和真核生物中的核糖体生物发生通路上。接着对色素相关的叶绿素代谢、类胡萝卜素生物合成通路和富集大量差异基因的植物激素信号转导通路进行差异基因的筛选和挖掘。在叶绿素代谢过程中,二氧化氯处理下调了编码叶绿素b还原酶、叶绿素酶、脱镁螯合酶、脱镁叶绿酸a加氧酶、红色叶绿素代谢产物还原酶基因的表达。在类胡萝卜素生物合成过程中,二氧化氯处理下调了编码15-顺式八氢番茄红素合酶、β-胡萝卜素羟化酶、番茄红素ε-环化酶和玉米黄质环氧酶的基因。在植物激素信号转导过程中,二氧化氯处理上调AUX1、ARF、B-ARR、CTR1、EIN3、EBF1/2、ERF1/2、BSK、NPR1蛋白调控的基因表达,下调TIR1、AHP、PP2C、Sn RK2、BAK1、BIN2、TGA蛋白调控的基因表达。由此,初步证明二氧化氯处理通过调控西兰花叶绿素代谢、类胡萝卜素生物合成和植物激素信号转导通路上差异表达基因,进而延缓西兰花的黄化。(3)二氧化氯处理维持了西兰花的表观质量,降低了贮藏期间的黄化指数、L~*值、a~*值和b~*值,并保持较高的总Panobinostat研究购买叶绿素、叶绿素a和叶绿素b含量;这说明二氧化氯处理可以通过延缓西兰花中叶绿素降解来延缓黄化。其次,在贮藏期间,二氧化氯处理抑制了采后西兰花中的叶绿素酶、脱镁螯合酶、脱镁叶绿素酶、脱镁叶绿酸a加氧酶和红色叶绿素分解还原酶活性,因此,通过进一步研究验证,二氧化氯处理可以通过抑制西兰花的叶绿素降解相关酶活性来延缓西兰花黄化。