Jak信号通路

目的:比较动态增强MRI检查和超声检查在乳腺肿瘤诊断上的临床价值PEG300价格。方法:选取2019年3月至2021年3月期间内于我院接受检查和治疗的68例乳腺肿瘤患者作为主要研究对象,所有患者均接受超声检查、动态增强MRI检查,且均经手术病理确诊,Trichostatin A分子量比较超声检查与动态增强MRI检查的诊断准确率,并对乳腺癌与乳腺良性病变患者的影像学表现进行对比。结果:68例乳腺肿瘤患者经手术病理检查,35例确诊为乳腺癌,33例确诊为乳腺良性病变。经超声检查确诊61例,诊断准确率为89.71%,误诊4例,误诊率为5.88%,漏诊3例,漏诊率为4.41%。经动态增强MRI检查,68例患者均确诊,与病理的诊断符合率为100.0%。动态增强MRI与超声的诊断准确率比较,存在显著差异(P<0.05)。乳腺癌与乳腺良性病变患者在病灶形态、边缘、强化特Cell-based bioassay征和TIC分型上均存在明显差异(P<0.05),乳腺癌患者的形态以分叶状和不规则形状为主,边缘呈现出毛刺和不规则,TIC分型以Ⅲ型为主,强化特征多表现为不均匀强化,而乳腺癌患者的早期强化率相对较高,但峰值强化率与乳腺良性病变患者相比无明显差异。结论:在乳腺肿瘤的临床诊断上,动态增强MRI的诊断准确率更高,并且乳腺癌与乳腺良性病变患者的影像学表现差异明显,可为手术方案的制定提供辅助和指导,从而提高手术成功率,降低手术风险,因此,动态增强MRI检查可在临床上进一步推广和应用。

小单孢菌和游动放线菌属于稀有放线菌,能够产生多种多样的具有独特化学结构和生物活性的次级代谢产物,是微生物天然产物药物的重要来源之一。因此,本论文期望从小单孢菌和游动放线菌中发现具有生物活性的新次级代谢产物,为创新微生物药物研发提供先导化合物。本论文总共包含两部分实验内容,第一部分是对Micromonospora sp.C-3509的发酵产物进行新次级代谢产物的发现、结构确定和生物活性初步筛选;第二部分是对创新霉素产生菌——Actinoplanes tsinanensis CPCC 200056的发酵产物进行创新霉素新组分的发现和生物活性研究。小单孢菌Micromonospora sp.C-3509是由中国医学科学院医药生物技术研究所从我国湖北省武汉市蛇山土壤中分离得到,其能产生烯二炔类抗生素一一Calicheamicin。对这株菌进行了全基因组测序,结合antiSMASH分析,其中除了含有预期的Calicheamicin基因簇,还发现了 26个次级代谢产物基因簇,表明该菌株具有丰富的次级代谢产物合成潜力,值得深入研究。通过对该菌株进行固体和液体发酵,从发酵产物中获得了6个单体化合物,其中5个为肽类新结构化合物(化合物1-5),将其命名为敏泰霉素(mintaimycins),其中敏泰霉素A1为主要组分;1个为已知化合物购买GSK11202121-methoxycarbonyl-β-carboline(化合物6),其属于β-Carboline生物碱类,文献报道该化合物在体外对人类卵巢癌细胞株(A2780和SKOV3)有细胞毒活性。通过NMR确定了敏泰霉素的平面化学结构。其组分以β-甲基苯丙氨酸(或苯丙氨酸)为核心结构,其氨基与5-甲基-2-己烯酸通过酰胺键结合;5-羟基-正亮氨酸或亮氨酸的羧基与己酸衍生物(或4-甲基戊酸衍生物)经碳碳键连接后的片段,再与其羧基通过酰胺键结合,形成敏泰霉素。采用Marfey法确定了 mintaimycins A1与B结构中经酸水解下的β-甲基苯丙氨酸(MePhe)为(2S,3S)-MePhe,mintaimycins A2 与 A3 结构中的苯丙氨酸(Phe)残基来源于L-苯丙氨酸;采用Mosher法确定了 mintaimyCompound 3试剂cin A1中C-6″为S型,mintaimycin B中C-10″为R型,mintaimycin A2中C-6″为S型;此外,对主组分mintaimycin A1采用量子化学计算NMR法,确定了其余手性碳构型C-2″为S、C-5″为R、C-7″为S。至此,敏泰霉素A1的立体结构得到完全解析。根据敏泰霉素的结构特点,推测它属于NRPS-PKS杂合基因簇调控产物。在Micromonospora sp.C-3509基因组antiSMASH分析中,虽不能准确预测出编码mintaimycins的基因簇,但在此初步推测Region 3为潜在的编码mintaimycins的基因簇,后续研究需生物学实验进行分析及验证。现发现主组分mintaimycin A1在10.0 μmol/L时能将3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞,随后证实了 mintaimycin B和mintaimycin A2也具有此生物活性。对mintaimycins进行了抗革兰氏阳性及阴性菌、细胞毒性和抗病毒等生物活性测定,发现它们均不具有显著的抗菌、细胞毒性和抗HIV-1病毒等活性。游动放线菌A.tsinanensis CPCC 200056是早年从我国山东济南土壤中分离得到,其能产生一一创新霉素(Chuangxinmycin,CM)。创新霉素具有新颖独特的骨架结构,是一种具有含氮、硫的杂环抗生素,是20世纪70年代的候选抗菌药物。创新霉素是细菌色氨酸tRNA合成酶抑制剂,目前临床上尚未有该类抑制剂作为抗菌药物应用于临床。在当前细菌耐药问题日益严重的背景下,开发新靶点、新作用机制的抗菌药物显得更加迫切,对创新霉素进行深入研究具有一定的现实意义。最近,文献报道了创新霉素生物合成基因簇及其生物合成途径,为通过生物技术手段获得创新霉素衍生物奠定了基础。根据创新霉素生物合成研究结果,基因簇中编码维生素B12依赖性SAM自由基甲基转移酶cxnA基因及其辅助蛋白cxnA1基因,在其共同作用(CxnA/A1)下完成创新霉素生物合成前体——3-去甲创新霉素(3-demethylchuangxinmycin,DCM)的甲基化反应,形成创新霉素。根据对CxnA的生物信息学分析,与CxnA同源关系密切的甲基转移酶具有多重(迭代)甲基化的生物学活性。据此,我们对A.tsinanensis CPCC 200056产生的创新霉素类似物进行了深入研究,首次发现了 3-甲基创新霉素(3-methylchuangxinmycin,MCM)。在此基础上,将cxnA和cxnA1基因在Streptomyces coelicolor M1152中异源过表达(文献报道该类甲基转移酶的分离纯化一般需要在厌氧等严苛条件下完成[1])。体内生物转化实验表明,CM可以被酶CxnA/A1催化转化为MCM,从而证实了CxnA/A1具有多重(迭代)甲基化的生物学活性。此研究结果,延伸了创新霉素的生物合成途径。对CM、MCM的抗菌活性进行了测定,MCM与CM相比,抗菌活性丧失。同时,也测定了创新霉素及其类似物的抗结核分枝杆菌acquired antibiotic resistance活性:与CM相比,DCM和MCM的活性降低,例如对Mycobacterium tuberculosis H37Rv,其MIC分别为CM 1μg/mL、DCM 4μg/mL、MCM 32μg/mL。上述活性测定结果表明,创新霉素结构中的C-3及其甲基化是决定其抗菌活性的关键点,这丰富了人们对创新霉素构效关系的认识;CM、DCM以及MCM抗结核活性的发现与测定,为开发抗结核药物提供了潜在的先导分子。此外,在对A.tsinanensis CPCC 200056产生的创新霉素类似物研究过程中,还发现了另一个创新霉素新组分,为2-脱羧-2-氨基-3-甲基创新霉素(2-decarboxyl-2-amino-3-methylchuangxinmycin)。由于该化合物产量极低,后续有待深入研究。

目的:探究抑制芳基烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)对柯萨奇B3病毒(coxsackievirus 3,CVB3)诱导的小鼠病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)心肌损伤及细胞焦亡的影响。方法:将60只BALBBiomolecules/c小鼠随机分为对照组(Control)、AhR抑制剂组(AhR inhibitor)、模型组(VMC)、VMC+AhR抑制剂组(VMC+AhR inhibitor)，每组15只。VMC组和VMC+AhR抑制剂组小鼠腹腔注射CVB3建立心肌炎模型后，AhR抑制剂组和VMC+AhR抑制剂组小鼠腹腔注射AhR抑制剂CH223191(10mg/kg)。10d后，通过高分辨率Vevo2100小动物超声成像系统检测各组小鼠心脏超声指标，ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白l(cardiac troponin l,cTnl)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18的含量，苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理学变化，TUNEL染色检测心肌组织细胞的凋亡情况，免疫组织化学染色测定心肌组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain coPidnarulex分子式ntaining 3,NLRP3)与消皮素D(Gasdermin-D,GSDMD)的阳性表达水平，实时荧光定量PCR和Western blot检测心肌组织焦亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase-1)、细胞凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、NLRP3及GSDMD在mRNA和蛋白上的表达水平。结果:与对照组比较，VMC组小鼠FS和EF下降，LVIDd和LVAWd增加，血清中cTnl、TNF-α、IL-1β以及IL-18的含量均上升，心肌组织内细胞排列紊乱，伴随大量炎性细胞浸润，心肌组织内TUNEMC3试剂L阳性率升高，NLRP3阳性表达率和GSDMD阳性表达率也升高，caspase-1、ASC、NLRP3及GSDMD的mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均上调，差异均具有统计学意义(P <0.05);与VMC组比较，VMC+AhR抑制剂组小鼠FS和EF升高，LVIDd和LVAWd减小，血清中cTnl、TNF-α、IL-1β以及IL-18的含量均降低，心肌组织病理损伤明显减轻，心肌组织内TUNEL阳性率下降，同时，NLRP3阳性表达率和GSDMD阳性表达率均降低，caspase-1、ASC、NLRP3及GSDMD的mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均下调，差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制AhR对CVB3诱导的小鼠病毒性心肌炎起保护作用，能够减轻心肌组织损伤，并抑制心肌细胞焦亡。

目的 评价基于磁微粒化学发光法的肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CA16）IgM抗体检测试剂盒的精密度、稳定性及方法学比对，并初步评价其临床应用价值。方法 参照美国PF-02341066浓度临床实验室标准化协会（CLSI）相关文件和标准，对柯萨奇病毒A16型IgM抗体检测试剂盒（磁微粒化学发光法）（CA16 IgM CMIA）和肠道病毒71型IgM抗体检测试剂盒（磁微粒化学发光法）（EV71 IgM CMIA）进行分析性能评价。采用受试者工作特征曲线评估CB-839说明书CA16 IgM CMIA及EV71 IgM CMIA与已上市酶联免疫法检测试剂的符合率。结果 CA16 IgM CMIA批内精密度CV为1.10%和1.63%，中间精密度CV为5.70%～7.20%,EV71 IgM CMIA批内精密度CV为2.80%和1.59%，中间精密度CV为2.91%～4.49%，试剂机载稳定性良好。临床病症与手足口病相似或病原结构与肠道病毒相近的其他病原体的高浓度抗体特异性血清对CA16 IgM CMIA和EV71 IgM CMIA的检测结果无影响，不存在交叉反应。CA16 IgM CMIA和EV71 IgM CMIA与已上市酶联免疫法检测试剂的总符合率分别为96.4%和98.9%。结论 基于磁微粒化学发光法的肠道病毒71型IgM抗体检测试剂盒和柯萨奇病毒A16型IgM抗体检测试剂盒具有良好的精密度和机载稳定性，与已上市酶免试剂对比性能良好，bacterial and virus infections适用于临床大规模样本的检测。

目的 探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)C677T基因多态性以及同型半胱氨酸(homocysteine, HCY)与早发冠心病(premature coronary artery disease, PCAD)的关系，为早期发现和干预疾病提供新证据。方法 入选454例冠心病患者，根据男性是否≤65岁、女性是否≤55岁将患者分为PCAD组(n=174)和非PCAD组(n=280)。使用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态分析法测定患者MTHFR-677基因型，采用水解循环酶法测定两组患者HCY水平，同时收集患者的临床及病史资料，并对患者进行12个月的随访记录。比较两组患者生化指标、病变特点、再发心血管事件差异，并通过二元Logistic回Wnt-C59分子式归分析MTHFR、HCY、叶酸(folic acid, FA)、TG、TC、性别等是否为PCAD的危险因素。结果 PCAD组MTHFR-677C>T突变率、女性比例、TG、HCY水平显著高于非PCAD组(P<0.01),TC水平高于非PCAD组(P<0.05),而FA水平低于非PCAD组(P<0.05)。二元Logistic回归分析表明：MTHFR-677C>T突变导致PInstitute of MedicineCAD发病风险增加106%(OR=2.06,95%CI 1.13～3.75),HCY是PCAD的发病危险因素(OR=1.04,95%CI 1.01～1.06),而女性PCAD发病风险是男性的2.12倍(OR=2.12,95%CI 1.39～3.24)。女性PCAD患者MTHFR-677C>T突变率高于男性患者(P<0.05),HCY水平显著高于男性患者(P<0.01)。PCAD组单支病变比例高于非PCAD组(32.18%vs 21.07%,P<0.01),多支病变比例明显低于非PCAD组(43.10%vs 54.29%,P<0.05)。12个月后PCAD组总心血管事件发生率与非PCAD组之间差异无统计学意义(P>0.05),但PCAD组女性总心血管事件发生率显著高于男性(16.09%vs 5.75%,P<0.05)。结论 MTHFR-677C>T基因突变、HCDolutegravir供应商Y是PCAD的独立危险因素，对PCAD的发生有重要影响。

目的 以人Ⅳ型胶原α3链非胶原区结构域1[α3(Ⅳ)NC1]上的线性多肽α3127-148作为抗原，建立抗肾小球基底膜(GBM)肾炎大鼠模型。方法 7～8周龄雌性WKY大鼠30只，体重100～150 g,随机分为3组(10只/组):对照组、低剂量多肽免疫组(低剂量组)、高剂量多肽免疫组(高剂量组)。selleck抑制剂多肽α3127-148一次性注射于大鼠后足垫来进行建模，低剂量组注射200μg/kg、高剂量组注射300μg/kg、对照组仅注射等体积溶剂。每周定时收集24 h尿测尿蛋白浓度。所有动物在第6周末处死，检测血清肌酐和尿素氮。大鼠肾组织切片进行PAS染色、Masson染色及免疫荧光染色。结果 与对照组相比，高剂量组24 h尿蛋白浓度自第3周末开始明显升高(P<0.05),第6周末血清尿素氮和肌酐水平均明显升高(P<0.05),PAS染色可见肾小球硬化、弥漫性新月体形成，荧光染色可见IgG在GBM呈明显线性沉积。与对照组比较，低剂量组第6周末24 h尿蛋白浓度明显升高(P<0.0NSC 119875价格5),PAS染色亦见肾小球有明显损伤，但较高liquid optical biopsy剂量组轻。结论 本研究采用线性多肽α3127-148免疫WKY大鼠，成功地建立了抗GBM肾炎模型，该方法简单、效率高。

旨在通过构建PLC-γ1真核过表达载体并制备其多克隆抗体，为探索绵羊PLC-γ1基因对卵母细胞激活作用及早期胚胎发育的影响提供基础数据。本研究以实验室保存的Puc57-P2Aeye infections-Flag-PLC-点击此处γ1菌株为模板设计引物并引入HindⅢ、AgeⅠ酶切位点，利用PCR扩增并纯化P2A-Flag-PLC-γ1基因，将其连入pcDNA3.1-EGFP载体，进行转化，通过菌液PCR、双酶切及测序鉴定后提取质粒。随后将构建好的重组质粒转染HEK-293T细胞24 h,分为control组、空载组和PLC-γ1过表达组，通过显微镜观察细胞荧光，实时荧光定量PCR(qPCR)及Western blot(WB)检测转染后细胞中PLC-γ1的表达情况；Anti-Flag免疫磁珠纯化PLC-γ1蛋白；以10月龄的新西兰大白兔(健康状态良好，体重约50 kg,n=2)为对象制备多克隆抗体，间接ELISA法测定多克隆抗体效价，WB鉴定其特异性。通过显微注射重组质粒及离子霉素(Ion)结合6-DMAP孤雌激活卵母细胞，qPCR及WGSK1120212 molecular weightB检测PLC-γ1在卵裂后不同时期(2细胞期、4细胞期、8细胞期、桑椹胚期)的绵羊早期胚胎细胞中的表达情况。结果显示，成功构建真核过表达载体；转染24 h后，与空白对照及阴性对照相比，过表达组PLC-γ1表达量明显升高(P<0.01);WB结果显示成功获得并纯化PLC-γ1蛋白，大小为149 ku;测得PLC-γ1多克隆抗体效价为1∶12 800,并可与PLC-γ1蛋白发生免疫反应。将重组质粒注射到绵羊MⅡ期卵母细胞胞质中，qPCR及WB结果显示PLC-γ1在绵羊早期胚胎发育各时期均有表达。综上所述，本研究成功构建了PLC-γ1真核过表达载体并制备了其多克隆抗体，通过显微注射技术将重组质粒注入卵母细胞并实现表达，证明PLC-γ1在绵羊早期胚胎发育各时期均有表达，且具有作为新的卵母细胞激活因子的潜能。既为探索绵羊PLC-γ1基因对卵母细胞激活作用及早期胚胎发育的影响提供了科学依据，也为进一步提升绵羊的繁殖性能奠定基础。

【研究背景和目的】PCI术后再狭窄是影响冠脉介入治疗患者预后的主要威胁,新生内膜形成在PCI术后再狭窄发病机理中起着关键作用,而平滑肌细胞的增殖、迁移是新生内膜形成的重要因素。泛素-蛋白酶体系统(UPS)参与多种生物学过程:细胞分裂增殖、细胞周期、细胞内信号转导和细胞凋亡等,介导真核生物大部分蛋白质的降解。去泛素化酶(DUBs)在UPS中扮演着重要的角色,目前发现的DUBs有100多种,参与了各种心血管疾病的发生发展,包括动脉粥样硬化、心肌肥大、心肌纤维化等,但其对新生内膜形成的调控机制尚不清楚。本研究旨在探讨DUB在血管新生内膜形成的作用及分子机制,以期为PCI术后再狭窄的治疗提供新的思路。【研究方法】1.通过结扎小鼠颈动脉和PDGF-BB刺激血管平滑肌细胞构建体内外新生内膜形成模型,检测USP10的表达。2.运用不同处理抑制平滑肌细胞中USP10的作用(Spautin-1抑制USP10的活性、si RNA干扰USP10的表达),研究USP10对平滑肌细胞增殖、迁移的调控作用。3.运用不同处理抑制平滑肌细胞中USP10的作用(Spautin-1抑制USP10的活性、si RNA干扰USP10的表达),研究USP10对细胞周期分子(P-Rb、Rb、CDK4、Cyclin D1、P27)的调控。4.在体外细胞增殖模型上,运用不同处理抑制USP10的作用(Spautin-1抑制USP10的活性、si RNA干扰USP10的表达),探讨USP10对平滑肌细胞中Skp2的调控作用。5.采用免疫共沉淀、免疫荧光及激光共聚焦技术,研究USP10与Skp2的相互作用。6.在体外过表达Skp2,研究USP10对平滑肌细胞增殖的影响。7.动物模型中在抑制或沉默USP10的情况下,研究USP10对新生内膜形成的影响。【研究结果】1.新生内膜形成时USP10表达增加:免疫荧光及免疫组化结果显示USP10在新生内膜中表达增加,Western blot结果显示USP10在PDGF-BB刺激的平滑肌细胞中表达增加。2.抑制或敲低USP10可抑制平滑肌细胞增殖:MTS结果显示抑制或敲低USP10可降低细胞活力,克隆形成实验结果显示Spautin-1可抑制平滑肌细胞长期insect biodiversity增殖,Ed U实验结果显示Spautin-1抑制细胞的DNA复制,Brd U实验结果显示抑制或敲低USP10可减少Brd U的渗入。3.USP10介导VSMC细胞周期进程影响细胞增殖和迁移:流式细胞术结果显示抑制或敲低USP10可阻滞细胞周期从G0/G1期到S期的转换,Western blot结果显示抑制或敲低USP10降低周期蛋白分子的表达,细胞划痕及Transwell实验结果显示抑制或敲低USP10可阻碍平滑肌细胞迁移。4.USP10通过降低Skp2的降解调控其表达:Western blot结果显示抑制或敲低USP10可降低Skp2蛋白表达。5.USP10与Skp2相互作用且USP10稳定Skp2的表达:免疫共沉淀结果显示USP10与Skp2相互作用,抑制或敲低USP10增加了Skp2泛素化水平。6.USP10调控平滑肌细胞增殖依赖selleckchem Etoposide于Skp2:流式细胞术结果显示过表达Skp2可逆转抑制或敲低USP10诱导的细胞周期阻滞,Western blot结果显示过表达Skp2可挽救抑制或敲低USP10导致的p27、Cyclin D1改变。7.USP10促进新生内膜的形成:HE、免疫组化及免疫荧光染色结果显示抑制或沉默USP10新生内膜的厚度明显减少。【结论】去泛素化酶USP10通过稳定血管平滑肌细胞中Skp2蛋白促进STM2457溶解度新生内膜形成。

目的：探讨双氢青蒿素（DHA）对急性髓系白血病（AMLPS-341体外）的潜在治疗价值及其作用机制。方法：通过CCK-8检测细胞活力，明确DHA对AML细胞活力的影响；通过荧光探针染色及流式细胞术检测DHselleckA对AML细胞内氧化还原状态的影响；通过免疫印迹技术、腺病毒转染和激光共聚焦分析DHospital acquired infectionHA对细胞自噬水平的影响，并利用不同小分子抑制剂进行实验，进一步探究DHA诱导AML细胞死亡的可能机制。结果：DHA可抑制AML细胞株HL-60和Kasumi-1的活力，同时可显著提高细胞内氧化应激水平，经10μmol/L DHA处理后，HL-60细胞内活性氧含量可升至原来的2.6倍，Kasumi-1细胞内活性氧含量可升至原来的2.0倍。此外，DHA还可上调AML细胞内自噬相关蛋白的表达，增加胞内自噬流，激活自噬。进一步检测发现，自噬抑制剂可降低DHA诱导的细胞死亡，而且通过清除胞内自由基抑制氧化应激水平可抑制自噬的发生进而恢复细胞活力。结论：DHA可通过诱导氧化应激激活AML细胞发生自噬性死亡。

背景：已有研究表明汉防己甲素可以通过激活AMPK信号Canagliflozin作用通路诱导细胞自噬从而抑制肿瘤细胞增殖，但目前汉防己甲素诱导破骨细胞自噬和分化的相关研究甚少。目的：探究汉防己甲素在不同浓度下对破骨细胞分化和自噬的影响，并分析诱导破骨细胞自噬能否起到抑制其分化的作用。方法：(1)第一部分：使用重组小鼠巨噬细胞集落刺激因子和核因子κB受体活化因子配体两种细胞因子对小鼠RAW264.7巨噬细胞进行诱导，使其向破骨细胞转化。细胞诱导及药物干预分组如下：空白对照组(完全培养基)，阳性对照组(含两种细胞因子)，低、中、高剂量汉防己甲素干预组(阳性对照组分别添加0.1,0.5,1.0μmol/L汉防己甲素)。抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察成熟破骨细胞数量变化；Western blot法检测组织蛋白酶K(CTSK)、自噬微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和自噬底物泛素结合蛋白(p62)的蛋白相对表达量；RT-PCR检测CTSK、LC3-Ⅱ和p62的mRNA相对表达量；丹酰尸胺(MDC)染色观察诱导过程中破骨细胞中自噬小体的Z-IETD-FMK分子量数量变化。(2)第二部分：选取抑制破骨细分化效果最明显的汉防己甲素浓度(1.0μmol/L)进行回复性验证。各组处理如下：阳性对照组(含两种细胞因子)，自噬抑制剂组(巴佛洛霉素处理immediate weightbearing)，药物干预组(汉防己甲素干预)，药物干预+自噬抑制剂组。抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察成熟破骨细胞数量变化；Western blot法检测CTSK的蛋白相对表达量。结果与结论：(1)一定浓度汉防己甲素能够对破骨细胞的分化起抑制作用，并且抑制作用随药物浓度升高而提升；(2)汉防己甲素在一定浓度下能够激发破骨细胞分化过程中自噬标志物的表达及减少自噬特异性底物累积，并在破骨细胞分化过程中可刺激自噬小体形成；(3)使用自噬抑制剂后，汉防己甲素抑制破骨细胞分化的作用受到显著影响；(4)综上，一定浓度的汉防己甲素能够通过激活自噬抑制破骨细胞的分化。