Jak信号通路

目的：探讨双氢青蒿素（DHA）对急性髓系白血病（AMLPS-341体外）的潜在治疗价值及其作用机制。方法：通过CCK-8检测细胞活力，明确DHA对AML细胞活力的影响；通过荧光探针染色及流式细胞术检测DHselleckA对AML细胞内氧化还原状态的影响；通过免疫印迹技术、腺病毒转染和激光共聚焦分析DHospital acquired infectionHA对细胞自噬水平的影响，并利用不同小分子抑制剂进行实验，进一步探究DHA诱导AML细胞死亡的可能机制。结果：DHA可抑制AML细胞株HL-60和Kasumi-1的活力，同时可显著提高细胞内氧化应激水平，经10μmol/L DHA处理后，HL-60细胞内活性氧含量可升至原来的2.6倍，Kasumi-1细胞内活性氧含量可升至原来的2.0倍。此外，DHA还可上调AML细胞内自噬相关蛋白的表达，增加胞内自噬流，激活自噬。进一步检测发现，自噬抑制剂可降低DHA诱导的细胞死亡，而且通过清除胞内自由基抑制氧化应激水平可抑制自噬的发生进而恢复细胞活力。结论：DHA可通过诱导氧化应激激活AML细胞发生自噬性死亡。

背景：已有研究表明汉防己甲素可以通过激活AMPK信号Canagliflozin作用通路诱导细胞自噬从而抑制肿瘤细胞增殖，但目前汉防己甲素诱导破骨细胞自噬和分化的相关研究甚少。目的：探究汉防己甲素在不同浓度下对破骨细胞分化和自噬的影响，并分析诱导破骨细胞自噬能否起到抑制其分化的作用。方法：(1)第一部分：使用重组小鼠巨噬细胞集落刺激因子和核因子κB受体活化因子配体两种细胞因子对小鼠RAW264.7巨噬细胞进行诱导，使其向破骨细胞转化。细胞诱导及药物干预分组如下：空白对照组(完全培养基)，阳性对照组(含两种细胞因子)，低、中、高剂量汉防己甲素干预组(阳性对照组分别添加0.1,0.5,1.0μmol/L汉防己甲素)。抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察成熟破骨细胞数量变化；Western blot法检测组织蛋白酶K(CTSK)、自噬微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和自噬底物泛素结合蛋白(p62)的蛋白相对表达量；RT-PCR检测CTSK、LC3-Ⅱ和p62的mRNA相对表达量；丹酰尸胺(MDC)染色观察诱导过程中破骨细胞中自噬小体的Z-IETD-FMK分子量数量变化。(2)第二部分：选取抑制破骨细分化效果最明显的汉防己甲素浓度(1.0μmol/L)进行回复性验证。各组处理如下：阳性对照组(含两种细胞因子)，自噬抑制剂组(巴佛洛霉素处理immediate weightbearing)，药物干预组(汉防己甲素干预)，药物干预+自噬抑制剂组。抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察成熟破骨细胞数量变化；Western blot法检测CTSK的蛋白相对表达量。结果与结论：(1)一定浓度汉防己甲素能够对破骨细胞的分化起抑制作用，并且抑制作用随药物浓度升高而提升；(2)汉防己甲素在一定浓度下能够激发破骨细胞分化过程中自噬标志物的表达及减少自噬特异性底物累积，并在破骨细胞分化过程中可刺激自噬小体形成；(3)使用自噬抑制剂后，汉防己甲素抑制破骨细胞分化的作用受到显著影响；(4)综上，一定浓度的汉防己甲素能够通过激活自噬抑制破骨细胞的分化。

猪支原体肺炎活疫苗(168株)是一种以肺内注射途径免疫的弱毒活疫苗。为了拓展猪支原体肺炎活疫苗的免疫途径，评估猪支原体肺炎活疫苗(168株)配合佐剂以肌肉注射方式免疫猪群后的攻毒保护效果，选取20头7日龄猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)阴性仔猪，将其随机平均分成4组，分别为健康对照组、感染对照ankle biomechanics组、肌肉注射免疫组和肺内注射免疫组。在免疫后采集血样并检测其中的Mhp IgG抗体，在首次免疫后42 d人工感染Mhp组织毒(JS株),攻毒28 d后评估肺脏的病变情况并测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中的Mhp含量。结果显示：免疫后肌肉LY-188011注射免疫组动物产生了明显的Mhp特异性血清IgG抗体，而肺内注射免疫组动物在攻毒前未见明显的血清抗体；肌肉注射免疫组和肺内注射免疫组的攻毒保护率分别平均为88.89%和75.93%,且组间无显著性差异；感染对照组的BALF中Mhp单位含量极显著高于肌肉注射免疫组和肺内注射免疫组(P<0Tofacitinib采购.01),2个免疫组间无显著性差异。结果表明：猪支原体活疫苗配合佐剂后经肌肉注射免疫可产生较好的免疫攻毒保护效果。本研究为猪支原体肺炎活疫苗(168株)实施肌肉注射免疫提供了临床数据支撑。

目的 总结腋窝入路腔镜下双target-mediated drug disposition侧乳房皮下切除Ⅰ期假体重建术的相关GSK J4抑制剂经验，并探讨其优越性及患者满意度。方法 回顾性分析2021年6月至2022年6月期间于中山大学附属第六医院行腋窝入路腔镜下双侧乳房皮下切除Ⅰ期假体重建术的23例女性乳腺癌患者的临床资料，总结相关的手术流程、手术安全性和术后患者满意度。结果 23例患者均成功行腔镜下双侧乳房皮下切除Ⅰ期假体重建术，无乳头重建，其中9例患者行双主刀手术，14例行单主刀手术。手术时间3.5～7.0 h，平均4.76 h，且双主刀模式的平均手术时间短于单主刀模式；术中出血量20～150 mL，平MRTX1133浓度均45.7 mL；术后住院时间0～24 d，平均10.7 d。术后发生并发症4例：1例患者假体上移，2例乳头乳晕部分缺血坏死，1例皮下气肿。本组患者术后均获访，随访时间均为3个月。随访期间所有患者均无复发、转移、死亡等事件发生。与术前相比，术后1个月时性生活满意度、社会心理状况及胸部功能有所下降，但是术后3个月均有明显回升，且乳房满意度在术后3个月较术前大大提高。结论 双侧乳房切除的患者行腔镜下Ⅰ期乳房重建可以获得很好的美容效果和手术安全性。双主刀模式能在一定程度上缩短手术时间，进而降低患者麻醉风险。

目的 研究异喹啉生物碱克班宁对肝癌细胞株Huh7的生长抑制作用及促凋亡Genital mycotic infection作用。方法用不同浓度的克班宁作用于Huh7细胞后，按照CCK-8法检测克班宁对肝癌细胞增殖的影响，并据此将后面的实验分为对照组和给药组（36、48、60μg·mL~(-1)）；利用形态学实验观察克班宁对肝癌细胞生长和状态的影响，平板克隆实验观察细胞克隆形成能力；Hoechst 33258实验和流式细胞术检测细胞凋MLN8237细胞培养亡状态和水平；Western blot检测细胞中BAX、Bcl-2、PARP凋亡相关蛋白及AKT、p-AKT、FoxO3a、p-FoxO3a的表达情况。结果 与对照组相比，克班宁可明显抑制Huh7细胞的增殖能力，抑制作用呈剂量和时间依赖性；且可诱导Huh7细胞出现明显的形态学变化；并在长时间内影响其克隆形成能力；同时还显著促进细胞凋亡，上调PARP、BAX蛋白的表达，下调Bcl-2、p-AKT、p-FoxO3a蛋白的表达。结论 克班宁不仅能抑制肝癌细胞株Huh7的增殖，还能促进细胞凋亡，且其促凋亡作用有可能是通过抑制AKT/FoxO3a信号通路产生Enasidenib配制的。

目的：探讨A型肉毒毒素(Botulinum toxin A，BTX-A)对大鼠皮瓣的缺血再灌注的保护机制与自噬的关系，为提高皮瓣成活率提供新的靶点。方法：将大鼠随机分为四组：假手术组、I/R组、BTX-A+I/R组和BTX-A+I/R+3-MA组。制作大鼠腹部岛状皮瓣，诱导缺血8 h。术前7 d在靠近蒂的皮下层给予BTX-A或0.9%生理盐水。BTX-A+I/R+3-MA组再灌注前20 min通过腹腔注射给药自噬阻滞剂3-MA。术后第7天，评估皮瓣存活率。HE染色检测血管数目。免疫组织化学染色用于Human papillomavirus infection评估CD34和LC3的表达水平。凋亡细胞数量通过Tunel染色显示。结果：BTX-A+I/R组皮瓣存活面积大于I/R组。与I/R组相比，BErdafitinib IC50TX-A+I/R组减少了皮瓣坏死，血管生成增加、LC3表达增加并抑制细胞凋亡。3-MA处理可以抑制BTX-Aselleck CX-5461对皮瓣的保护。结论：BTX-A通过增强自噬保护皮瓣缺血再灌注损伤。本研究为提高皮瓣移植成功率提供了一种新的理论方法。

目的 采用不同方法预处理流式细胞术多细胞因子检测结果异常升高的血浆样本，比较其消除NASH non-alcoholic steatohepatitis分析干扰的效果。方法选取流式细胞术多细胞因子检测结果异常升高的血浆样本32例，分别采用样本稀释、20%聚乙二醇6000 (PEG-6000)沉淀法和嗜异性抗体阻断管（HBT）预处理上述血浆样本后，检测白细胞介素（IL）-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、γ干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子（TNF） 7种细胞因子的表达水平，并与电化学发光法的IL-6检测结果进行比较。结果 流式细胞术细胞因子检测结果异常升高的血浆样本经过倍比稀释后，7种细胞因子检测结果与稀释倍数未呈线性关系的比例>60%；与稀释倍数未呈线性关系的血浆样本经过PEG-6000沉淀法和HBT预处理后，与未经预处理的样本相比，7种细胞因子流式细胞术检测结果均明显下降（均P <0.05）；与稀释倍数呈线性关系的血浆样本经过PEG-6000沉淀法和HBT预处理后，与未经预处理的样本相比，IL-6、IL-10、selleck激酶抑制剂IFN-γ和TNF亦呈下降趋势（均P <0.05）。PEG-6000沉淀法和HBT预处理后血浆样本的流式细胞术IL-6检测结果与电化学发光法检测结果均呈较好的相关性，且PEG-6000沉淀法预处理后的相关性高于HBT购买Ferrostatin-1。结论 应用PEG-6000沉淀法和HBT预处理样本，有助于消除流式细胞术多细胞因子检测中的分析干扰。

人血清中前列腺特异抗原蛋白质(PSA)是前列腺癌的肿瘤标志物,由其制作成的检测试剂盒具有大量需求。由于PSA在人血清中含量极低,需要开发分离提浓工艺。论文以建立抗干扰的PSA检测方法为出发点,设计与研究从血清中分离PSA的工艺,获得PSA分离提浓的优化工艺条件,以特征肽段-液质法对提浓PSA进行检immune modulating activity测。论文主要研究内容如下。首先建立测量PSA浓度的特征肽段-液质法,PSA浓度的准确检测是其分离工艺的基础。该方法是基于PSA的特异性肽段在液质谱上有专一响应的原理,对PSA的浓度进行检测。在建立方法时,先通过模拟酶解肽段并结合酶解实验数据,得出HR、FR和LK是PSA的特征肽段,并合成标记肽段;再以胰蛋白酶作为酶解剂将PSA酶解为特征肽段,采用单因素试验法,考察酶解剂用量和酶解时间对酶解效果的影响,实验结果表明,当酶解剂与PSA质量比为1:70时,酶解效果最好;进一步考察酶解时间因素,发现最佳酶解时间为10小时。在优化的条件下,以特征肽段-液质法对6组浓度为75.31μg/g的PSA溶液进行检测,测定浓度为74.74μg/g,RSD值为0.96%,表明本研究所建立的方法可靠准确,且由于该方法是基于特征肽段的检测方法,因此具有抗干扰性强且适用性广的特点。然后,基于PSA与制备的抗体-磁珠存在亲和作用的原理,设计分离提浓PSA的工艺。该工艺的组成单元为(1)利用抗体-磁珠富集吸附血清PSA的亲和单元;(2)利用磁吸原理分离出富集PSA的抗体-磁珠的富集分离单元;(3)通过洗脱剂洗脱与分离磁珠,获得PSA浓缩液的洗脱单元;JAK抑制剂(4)通过特征肽段-液质法检测PSA浓缩液浓度的检测单元。本研究以添加PSA的人血清为原料,首先在亲和单元通过表面等离子共振技术选择与PSA具有良好亲和力的抗体制备抗体-磁珠溶液,然后探究抗体-磁珠溶液体积对血清PSA富集效率的影响,发现当其与血清体积比为1:10时,PSA的富集效率达到95.53%,基本分离完全。在此基础上,采用单因素试验法,系统研究洗脱单元的洗脱剂种类、用量及洗脱时间等因素对PSA分离浓缩效果的影响。实验结果表明,以与血清体积比为1:5的5 vol%乙酸溶液为洗脱剂,洗脱2分钟时,洗脱效果最好,在优化条件下,按照设计的工艺对血清PSA进行分离实验,分离效率为61.52%,满足企业项目的分离要求。良好的分离效果主要是因为优选PSA抗体对PSA的高效亲和PLX4032作用作用,亲和单元是从血清中富集PSA的关键单元。

目的 探讨硫培非格司亭长效与重组人粒细胞刺激因子在老年非骨髓恶性肿瘤患者中预防中性粒细胞减少的效果。方法 112例老年非骨髓恶性肿瘤患者根据治疗方法随机分为观察组和对照组各56例。结果 观察组初始纳入56例，男28例，女28例；年龄60～75岁，点击此处平均(61.52±3.26)岁；对照组56例，男31例，女25例；年龄61～75岁，平均(63.45±3.73)岁。两组年龄、身高及体重差异显著(P<0.05)。经计算倾向性评分，匹配相似评分患者后，观察组53例，男25例，女28例；对照组53例，男28例，女25例，所有基线指标差异无统计学意义(P>0.05)。两组化疗前均无中性粒细胞减少的情况，观察组第1、2周期出现3、4级中性粒细胞减少症的患者例数少于对照组，但无统计学差异(P>0.05);第3、4周期出现3、4级中性粒细胞减少症的患者例数明显少于对照组(P<0.05)。化疗前，两组中性粒细胞水平无统计学差异(P>0.05);治疗后3、7、14、21 d观察组明显高于对照组，两组均在治疗后第9天达到最高值，均有统计学差异(均P<0.001)。观察组各周期发热与使用抗生素例数少于对照组，Baf-A1采购其中第2周期使用抗生素的患者例数及第3、4周期有统计学差异(P<0.05)。观察组各周期骨痛及肌肉酸痛少于对照组，其中第2周期肌肉酸痛及第3、4周期有统计学差异(P<0.05)。结论 硫培非格司亭长效与重组人粒细胞刺激因子可很好预防老年非骨髓恶性肿purine biosynthesis瘤患者中性粒细胞减少情况，且可减少患者不良事件发生。

目的 探讨柴胡桂枝汤加减治疗程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)/程序性死亡配体-1(PD-L1)免疫抑制剂治疗肿瘤后腹泻的疗效。方法 方便选取2019年1月—2021年6月在菏泽市立医院肿瘤科就诊的92例癌症患者作为研究对象，根据是否使用柴胡桂枝汤加减治疗，将92例癌症患者分为两组，研究组46例、对照组46例。研究组采用柴胡桂枝汤加减联合免疫抑制剂PD-1/PD-L1的治疗方案；对照组只采用免疫抑制剂PD-1/PD-L1的治疗方案。记录并统计两组患者发生腹泻、恶心等情况，对影响PD-1/PCrizotinib采购D-L1抑制剂治疗肿瘤后腹泻的因素进行分析。结果 研究组腹泻持续时间是（6.39±2.82）d短于对照组（8.65±2.63）d，差异有统计学意义(t=3.975,P<0.001)；研究组D-Lin-MC3-DMA结肠炎持续时间是（4.94±2.32）d短于对照组的（7.46±2.37）d，差异有统计学意义(t=5.153,P<0.001)；研究组恶心持续时间是（4.90±2.88）d短于对照组（6.05±2.35）d，差异有统计学意义(t=2.098,P=0.039)。单因素与多因Forensic pathology素回归分析表明，是否使用柴胡桂枝汤加减治疗是影响PD-1/PD-L1抑制剂治疗肿瘤后腹泻的独立影响因素，可以显著降低腹泻和结直肠炎的持续时间。结论 柴胡桂枝汤加减能够有效预防并缓解PD-1/PD-L1免疫抑制剂治疗肿瘤后的腹泻情况。