Jak信号通路

目的 以人Ⅳ型胶原α3链非胶原区结构域1[α3(Ⅳ)NC1]上的线性多肽α3127-148作为抗原，建立抗肾小球基底膜(GBM)肾炎大鼠模型。方法 7～8周龄雌性WKY大鼠30只，体重100～150 g,随机分为3组(10只/组):对照组、低剂量多肽免疫组(低剂量组)、高剂量多肽免疫组(高剂量组)。selleck抑制剂多肽α3127-148一次性注射于大鼠后足垫来进行建模，低剂量组注射200μg/kg、高剂量组注射300μg/kg、对照组仅注射等体积溶剂。每周定时收集24 h尿测尿蛋白浓度。所有动物在第6周末处死，检测血清肌酐和尿素氮。大鼠肾组织切片进行PAS染色、Masson染色及免疫荧光染色。结果 与对照组相比，高剂量组24 h尿蛋白浓度自第3周末开始明显升高(P<0.05),第6周末血清尿素氮和肌酐水平均明显升高(P<0.05),PAS染色可见肾小球硬化、弥漫性新月体形成，荧光染色可见IgG在GBM呈明显线性沉积。与对照组比较，低剂量组第6周末24 h尿蛋白浓度明显升高(P<0.0NSC 119875价格5),PAS染色亦见肾小球有明显损伤，但较高liquid optical biopsy剂量组轻。结论 本研究采用线性多肽α3127-148免疫WKY大鼠，成功地建立了抗GBM肾炎模型，该方法简单、效率高。

旨在通过构建PLC-γ1真核过表达载体并制备其多克隆抗体，为探索绵羊PLC-γ1基因对卵母细胞激活作用及早期胚胎发育的影响提供基础数据。本研究以实验室保存的Puc57-P2Aeye infections-Flag-PLC-点击此处γ1菌株为模板设计引物并引入HindⅢ、AgeⅠ酶切位点，利用PCR扩增并纯化P2A-Flag-PLC-γ1基因，将其连入pcDNA3.1-EGFP载体，进行转化，通过菌液PCR、双酶切及测序鉴定后提取质粒。随后将构建好的重组质粒转染HEK-293T细胞24 h,分为control组、空载组和PLC-γ1过表达组，通过显微镜观察细胞荧光，实时荧光定量PCR(qPCR)及Western blot(WB)检测转染后细胞中PLC-γ1的表达情况；Anti-Flag免疫磁珠纯化PLC-γ1蛋白；以10月龄的新西兰大白兔(健康状态良好，体重约50 kg,n=2)为对象制备多克隆抗体，间接ELISA法测定多克隆抗体效价，WB鉴定其特异性。通过显微注射重组质粒及离子霉素(Ion)结合6-DMAP孤雌激活卵母细胞，qPCR及WGSK1120212 molecular weightB检测PLC-γ1在卵裂后不同时期(2细胞期、4细胞期、8细胞期、桑椹胚期)的绵羊早期胚胎细胞中的表达情况。结果显示，成功构建真核过表达载体；转染24 h后，与空白对照及阴性对照相比，过表达组PLC-γ1表达量明显升高(P<0.01);WB结果显示成功获得并纯化PLC-γ1蛋白，大小为149 ku;测得PLC-γ1多克隆抗体效价为1∶12 800,并可与PLC-γ1蛋白发生免疫反应。将重组质粒注射到绵羊MⅡ期卵母细胞胞质中，qPCR及WB结果显示PLC-γ1在绵羊早期胚胎发育各时期均有表达。综上所述，本研究成功构建了PLC-γ1真核过表达载体并制备了其多克隆抗体，通过显微注射技术将重组质粒注入卵母细胞并实现表达，证明PLC-γ1在绵羊早期胚胎发育各时期均有表达，且具有作为新的卵母细胞激活因子的潜能。既为探索绵羊PLC-γ1基因对卵母细胞激活作用及早期胚胎发育的影响提供了科学依据，也为进一步提升绵羊的繁殖性能奠定基础。

【研究背景和目的】PCI术后再狭窄是影响冠脉介入治疗患者预后的主要威胁,新生内膜形成在PCI术后再狭窄发病机理中起着关键作用,而平滑肌细胞的增殖、迁移是新生内膜形成的重要因素。泛素-蛋白酶体系统(UPS)参与多种生物学过程:细胞分裂增殖、细胞周期、细胞内信号转导和细胞凋亡等,介导真核生物大部分蛋白质的降解。去泛素化酶(DUBs)在UPS中扮演着重要的角色,目前发现的DUBs有100多种,参与了各种心血管疾病的发生发展,包括动脉粥样硬化、心肌肥大、心肌纤维化等,但其对新生内膜形成的调控机制尚不清楚。本研究旨在探讨DUB在血管新生内膜形成的作用及分子机制,以期为PCI术后再狭窄的治疗提供新的思路。【研究方法】1.通过结扎小鼠颈动脉和PDGF-BB刺激血管平滑肌细胞构建体内外新生内膜形成模型,检测USP10的表达。2.运用不同处理抑制平滑肌细胞中USP10的作用(Spautin-1抑制USP10的活性、si RNA干扰USP10的表达),研究USP10对平滑肌细胞增殖、迁移的调控作用。3.运用不同处理抑制平滑肌细胞中USP10的作用(Spautin-1抑制USP10的活性、si RNA干扰USP10的表达),研究USP10对细胞周期分子(P-Rb、Rb、CDK4、Cyclin D1、P27)的调控。4.在体外细胞增殖模型上,运用不同处理抑制USP10的作用(Spautin-1抑制USP10的活性、si RNA干扰USP10的表达),探讨USP10对平滑肌细胞中Skp2的调控作用。5.采用免疫共沉淀、免疫荧光及激光共聚焦技术,研究USP10与Skp2的相互作用。6.在体外过表达Skp2,研究USP10对平滑肌细胞增殖的影响。7.动物模型中在抑制或沉默USP10的情况下,研究USP10对新生内膜形成的影响。【研究结果】1.新生内膜形成时USP10表达增加:免疫荧光及免疫组化结果显示USP10在新生内膜中表达增加,Western blot结果显示USP10在PDGF-BB刺激的平滑肌细胞中表达增加。2.抑制或敲低USP10可抑制平滑肌细胞增殖:MTS结果显示抑制或敲低USP10可降低细胞活力,克隆形成实验结果显示Spautin-1可抑制平滑肌细胞长期insect biodiversity增殖,Ed U实验结果显示Spautin-1抑制细胞的DNA复制,Brd U实验结果显示抑制或敲低USP10可减少Brd U的渗入。3.USP10介导VSMC细胞周期进程影响细胞增殖和迁移:流式细胞术结果显示抑制或敲低USP10可阻滞细胞周期从G0/G1期到S期的转换,Western blot结果显示抑制或敲低USP10降低周期蛋白分子的表达,细胞划痕及Transwell实验结果显示抑制或敲低USP10可阻碍平滑肌细胞迁移。4.USP10通过降低Skp2的降解调控其表达:Western blot结果显示抑制或敲低USP10可降低Skp2蛋白表达。5.USP10与Skp2相互作用且USP10稳定Skp2的表达:免疫共沉淀结果显示USP10与Skp2相互作用,抑制或敲低USP10增加了Skp2泛素化水平。6.USP10调控平滑肌细胞增殖依赖selleckchem Etoposide于Skp2:流式细胞术结果显示过表达Skp2可逆转抑制或敲低USP10诱导的细胞周期阻滞,Western blot结果显示过表达Skp2可挽救抑制或敲低USP10导致的p27、Cyclin D1改变。7.USP10促进新生内膜的形成:HE、免疫组化及免疫荧光染色结果显示抑制或沉默USP10新生内膜的厚度明显减少。【结论】去泛素化酶USP10通过稳定血管平滑肌细胞中Skp2蛋白促进STM2457溶解度新生内膜形成。

目的：探讨双氢青蒿素（DHA）对急性髓系白血病（AMLPS-341体外）的潜在治疗价值及其作用机制。方法：通过CCK-8检测细胞活力，明确DHA对AML细胞活力的影响；通过荧光探针染色及流式细胞术检测DHselleckA对AML细胞内氧化还原状态的影响；通过免疫印迹技术、腺病毒转染和激光共聚焦分析DHospital acquired infectionHA对细胞自噬水平的影响，并利用不同小分子抑制剂进行实验，进一步探究DHA诱导AML细胞死亡的可能机制。结果：DHA可抑制AML细胞株HL-60和Kasumi-1的活力，同时可显著提高细胞内氧化应激水平，经10μmol/L DHA处理后，HL-60细胞内活性氧含量可升至原来的2.6倍，Kasumi-1细胞内活性氧含量可升至原来的2.0倍。此外，DHA还可上调AML细胞内自噬相关蛋白的表达，增加胞内自噬流，激活自噬。进一步检测发现，自噬抑制剂可降低DHA诱导的细胞死亡，而且通过清除胞内自由基抑制氧化应激水平可抑制自噬的发生进而恢复细胞活力。结论：DHA可通过诱导氧化应激激活AML细胞发生自噬性死亡。

背景：已有研究表明汉防己甲素可以通过激活AMPK信号Canagliflozin作用通路诱导细胞自噬从而抑制肿瘤细胞增殖，但目前汉防己甲素诱导破骨细胞自噬和分化的相关研究甚少。目的：探究汉防己甲素在不同浓度下对破骨细胞分化和自噬的影响，并分析诱导破骨细胞自噬能否起到抑制其分化的作用。方法：(1)第一部分：使用重组小鼠巨噬细胞集落刺激因子和核因子κB受体活化因子配体两种细胞因子对小鼠RAW264.7巨噬细胞进行诱导，使其向破骨细胞转化。细胞诱导及药物干预分组如下：空白对照组(完全培养基)，阳性对照组(含两种细胞因子)，低、中、高剂量汉防己甲素干预组(阳性对照组分别添加0.1,0.5,1.0μmol/L汉防己甲素)。抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察成熟破骨细胞数量变化；Western blot法检测组织蛋白酶K(CTSK)、自噬微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和自噬底物泛素结合蛋白(p62)的蛋白相对表达量；RT-PCR检测CTSK、LC3-Ⅱ和p62的mRNA相对表达量；丹酰尸胺(MDC)染色观察诱导过程中破骨细胞中自噬小体的Z-IETD-FMK分子量数量变化。(2)第二部分：选取抑制破骨细分化效果最明显的汉防己甲素浓度(1.0μmol/L)进行回复性验证。各组处理如下：阳性对照组(含两种细胞因子)，自噬抑制剂组(巴佛洛霉素处理immediate weightbearing)，药物干预组(汉防己甲素干预)，药物干预+自噬抑制剂组。抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察成熟破骨细胞数量变化；Western blot法检测CTSK的蛋白相对表达量。结果与结论：(1)一定浓度汉防己甲素能够对破骨细胞的分化起抑制作用，并且抑制作用随药物浓度升高而提升；(2)汉防己甲素在一定浓度下能够激发破骨细胞分化过程中自噬标志物的表达及减少自噬特异性底物累积，并在破骨细胞分化过程中可刺激自噬小体形成；(3)使用自噬抑制剂后，汉防己甲素抑制破骨细胞分化的作用受到显著影响；(4)综上，一定浓度的汉防己甲素能够通过激活自噬抑制破骨细胞的分化。

猪支原体肺炎活疫苗(168株)是一种以肺内注射途径免疫的弱毒活疫苗。为了拓展猪支原体肺炎活疫苗的免疫途径，评估猪支原体肺炎活疫苗(168株)配合佐剂以肌肉注射方式免疫猪群后的攻毒保护效果，选取20头7日龄猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)阴性仔猪，将其随机平均分成4组，分别为健康对照组、感染对照ankle biomechanics组、肌肉注射免疫组和肺内注射免疫组。在免疫后采集血样并检测其中的Mhp IgG抗体，在首次免疫后42 d人工感染Mhp组织毒(JS株),攻毒28 d后评估肺脏的病变情况并测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中的Mhp含量。结果显示：免疫后肌肉LY-188011注射免疫组动物产生了明显的Mhp特异性血清IgG抗体，而肺内注射免疫组动物在攻毒前未见明显的血清抗体；肌肉注射免疫组和肺内注射免疫组的攻毒保护率分别平均为88.89%和75.93%,且组间无显著性差异；感染对照组的BALF中Mhp单位含量极显著高于肌肉注射免疫组和肺内注射免疫组(P<0Tofacitinib采购.01),2个免疫组间无显著性差异。结果表明：猪支原体活疫苗配合佐剂后经肌肉注射免疫可产生较好的免疫攻毒保护效果。本研究为猪支原体肺炎活疫苗(168株)实施肌肉注射免疫提供了临床数据支撑。

目的 总结腋窝入路腔镜下双target-mediated drug disposition侧乳房皮下切除Ⅰ期假体重建术的相关GSK J4抑制剂经验，并探讨其优越性及患者满意度。方法 回顾性分析2021年6月至2022年6月期间于中山大学附属第六医院行腋窝入路腔镜下双侧乳房皮下切除Ⅰ期假体重建术的23例女性乳腺癌患者的临床资料，总结相关的手术流程、手术安全性和术后患者满意度。结果 23例患者均成功行腔镜下双侧乳房皮下切除Ⅰ期假体重建术，无乳头重建，其中9例患者行双主刀手术，14例行单主刀手术。手术时间3.5～7.0 h，平均4.76 h，且双主刀模式的平均手术时间短于单主刀模式；术中出血量20～150 mL，平MRTX1133浓度均45.7 mL；术后住院时间0～24 d，平均10.7 d。术后发生并发症4例：1例患者假体上移，2例乳头乳晕部分缺血坏死，1例皮下气肿。本组患者术后均获访，随访时间均为3个月。随访期间所有患者均无复发、转移、死亡等事件发生。与术前相比，术后1个月时性生活满意度、社会心理状况及胸部功能有所下降，但是术后3个月均有明显回升，且乳房满意度在术后3个月较术前大大提高。结论 双侧乳房切除的患者行腔镜下Ⅰ期乳房重建可以获得很好的美容效果和手术安全性。双主刀模式能在一定程度上缩短手术时间，进而降低患者麻醉风险。

目的 研究异喹啉生物碱克班宁对肝癌细胞株Huh7的生长抑制作用及促凋亡Genital mycotic infection作用。方法用不同浓度的克班宁作用于Huh7细胞后，按照CCK-8法检测克班宁对肝癌细胞增殖的影响，并据此将后面的实验分为对照组和给药组（36、48、60μg·mL~(-1)）；利用形态学实验观察克班宁对肝癌细胞生长和状态的影响，平板克隆实验观察细胞克隆形成能力；Hoechst 33258实验和流式细胞术检测细胞凋MLN8237细胞培养亡状态和水平；Western blot检测细胞中BAX、Bcl-2、PARP凋亡相关蛋白及AKT、p-AKT、FoxO3a、p-FoxO3a的表达情况。结果 与对照组相比，克班宁可明显抑制Huh7细胞的增殖能力，抑制作用呈剂量和时间依赖性；且可诱导Huh7细胞出现明显的形态学变化；并在长时间内影响其克隆形成能力；同时还显著促进细胞凋亡，上调PARP、BAX蛋白的表达，下调Bcl-2、p-AKT、p-FoxO3a蛋白的表达。结论 克班宁不仅能抑制肝癌细胞株Huh7的增殖，还能促进细胞凋亡，且其促凋亡作用有可能是通过抑制AKT/FoxO3a信号通路产生Enasidenib配制的。

目的：探讨A型肉毒毒素(Botulinum toxin A，BTX-A)对大鼠皮瓣的缺血再灌注的保护机制与自噬的关系，为提高皮瓣成活率提供新的靶点。方法：将大鼠随机分为四组：假手术组、I/R组、BTX-A+I/R组和BTX-A+I/R+3-MA组。制作大鼠腹部岛状皮瓣，诱导缺血8 h。术前7 d在靠近蒂的皮下层给予BTX-A或0.9%生理盐水。BTX-A+I/R+3-MA组再灌注前20 min通过腹腔注射给药自噬阻滞剂3-MA。术后第7天，评估皮瓣存活率。HE染色检测血管数目。免疫组织化学染色用于Human papillomavirus infection评估CD34和LC3的表达水平。凋亡细胞数量通过Tunel染色显示。结果：BTX-A+I/R组皮瓣存活面积大于I/R组。与I/R组相比，BErdafitinib IC50TX-A+I/R组减少了皮瓣坏死，血管生成增加、LC3表达增加并抑制细胞凋亡。3-MA处理可以抑制BTX-Aselleck CX-5461对皮瓣的保护。结论：BTX-A通过增强自噬保护皮瓣缺血再灌注损伤。本研究为提高皮瓣移植成功率提供了一种新的理论方法。

目的 采用不同方法预处理流式细胞术多细胞因子检测结果异常升高的血浆样本，比较其消除NASH non-alcoholic steatohepatitis分析干扰的效果。方法选取流式细胞术多细胞因子检测结果异常升高的血浆样本32例，分别采用样本稀释、20%聚乙二醇6000 (PEG-6000)沉淀法和嗜异性抗体阻断管（HBT）预处理上述血浆样本后，检测白细胞介素（IL）-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、γ干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子（TNF） 7种细胞因子的表达水平，并与电化学发光法的IL-6检测结果进行比较。结果 流式细胞术细胞因子检测结果异常升高的血浆样本经过倍比稀释后，7种细胞因子检测结果与稀释倍数未呈线性关系的比例>60%；与稀释倍数未呈线性关系的血浆样本经过PEG-6000沉淀法和HBT预处理后，与未经预处理的样本相比，7种细胞因子流式细胞术检测结果均明显下降（均P <0.05）；与稀释倍数呈线性关系的血浆样本经过PEG-6000沉淀法和HBT预处理后，与未经预处理的样本相比，IL-6、IL-10、selleck激酶抑制剂IFN-γ和TNF亦呈下降趋势（均P <0.05）。PEG-6000沉淀法和HBT预处理后血浆样本的流式细胞术IL-6检测结果与电化学发光法检测结果均呈较好的相关性，且PEG-6000沉淀法预处理后的相关性高于HBT购买Ferrostatin-1。结论 应用PEG-6000沉淀法和HBT预处理样本，有助于消除流式细胞术多细胞因子检测中的分析干扰。