目的:肺癌是全世界常见的恶性肿瘤,非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)约占肺癌的80%-85%,5年生存率仅为4%左右。免疫治疗联合化疗已经成为NSCLC的标准治疗,但从中获益的患者并不多。本研究旨在探索PD-L1促进NSCLC发生转移的具体机制,从而发现潜在的治疗靶点。方法:1、免疫组化分析临床标本肿瘤组织PD-L1表达水平。2、小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)敲减目标蛋白,慢病毒构建稳定转染的细胞系。3、Transwell检测细胞迁移能力。4、Western blot检测目标蛋白的表达水平。5、m RNA转录组测序筛选下游通路。6、质谱分析检测PD-L1互作蛋白。7、构建裸鼠尾静脉肺转移模型,验证PD-L1促进肺癌转移。8、统计学分析:采用Graphpad Prism(版本10.1.2)对实验数据进行统计分析以及作图。P<0.05具有统计学意义。结果:临床数据分析表明,PD-L1阳性表达的NSCLC患者更易发生淋巴结转移。将患者分为PD-L1阳性表达和阴性表达两组,数据分析结果显示,在PD-L1阳性表达组中,NSCLC患者更易发生淋巴结转移;2.PD-L1促进肺癌细胞迁移。体内外实验证明敲减PD-L1后,肺癌细胞系迁移能力下降;3.PD-L1促进肺癌细胞的糖代谢。敲plasma medicine减PD-L1后进行m RNA转录组测序,富集出糖代谢通路;4.PD-L1通过上调PFKP的表达促进肺癌细胞糖酵解和迁移。通过质谱分析筛选出PFKP。敲减PD-L1后,PFKP蛋白表达水平下降,糖酵解能力下降,细胞迁移能力下降;5.PD-L1与PFKP存在胞浆共定位。Co-IP结果显示PD-L1与PFKP存在共定位。膜浆分离实验及对PD-Tezacaftor供应商L1胞内段、胞外段截短体质粒结果显示,PD-L1与PFKP在细胞质中存在共定位;6.PD-L1通过泛素蛋白酶体途径调控PFKP的蛋白稳定性。应用CHX、CQ和MG132,Western Blot结果提示PD-L1通过泛素蛋白酶体途径调控PFKP的蛋白稳定性;7.PD-L1促进PFKP S386位点磷酸化上调PFKP的表达。质谱分析结果提示PD-L1调控PFKP S386位点磷酸化上调PFKP表达。设计PFKP S386A突变质粒。结果显示Etoposide体内PD-L1调控野生型PKFP磷酸化和蛋白表达而对突变型无影响;8.PD-L1通过YWHAZ上调PFK…